川东獐牙菜不同部位芒果苷的含量测定研究
作者：张有理，郑一敏，胥秀英，傅善权
【摘要】 目的建立高效液相色谱法测定川东獐牙菜不同部位芒果苷的含量。方法采用Hypersil C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）,流动相为甲醇-0.04%磷酸溶液在0～15 min内由22∶78到32∶68，流速1.0 ml·min-1，检测波长254 nm，柱温室温，用外标法定量，测定川东獐牙菜中芒果苷的含量。结果芒果苷的线性范围0.27～2.70 μg，r=0.999 7，回收率100.90%，RSD 为2.19%。结论 该方法简便，快速，线性关系良好，可用于川东獐牙菜芒果苷的含量测定。
【关键词】 川东獐牙菜；芒果苷；高效液相色谱法
AbstractObjectiveTo establish an HPLC method for determining the content of mangiferin in different parts of Swertia davidi Franch. MethodsThe analysis was carried out on Hypersil C18 column(150 mm×4.6 mm，5 μm). The mobile phase was CH3OH?.04% phosphoric acid.The ratio of methanol and water increased from 22∶78 to 32∶68 in 15 min. The flow rate was 1.0ml·min?1, the detection wavelength was 254 nm, and the temperature was room temperature.ResultsThe linear range of arctiin was 0.27～2.70 μg and gave a correlation(r) of 0.999 7.The recovery was 100.90 and RSD was2.19%.ConclusionThe method is simple,fast and has a good linear relationship.It can be used for determining the content of mangiferin in Swertia davidi Franch.
Key wordsSwertia davidi Franch； Mangiferin； HPLC
川东獐牙菜是龙胆科(Gentianaceae)獐牙菜属植物,民间俗称水黄连、鱼胆草、青鱼胆草、水灵芝等，性寒，味极苦，具清热解毒、利胆健胃等功效［1］。对其主要药效成分芒果苷在不同部位含量测定研究的至今未见报道。本文采用高效液相色谱法对川东獐牙菜中全草、根、茎、叶各部位芒果苷的含量进行了测定。现报道如下。
1 仪器与试药
Waters高效液相色谱仪（Waters1525二元泵，Waters2487紫外检测器）；Breeze液相色谱工作站（Waters公司）。芒果苷对照品 ，购于药品生物制品检定所，批号为111607-200301。甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。水为重蒸水并经0.45 μm滤膜过滤；川东獐牙菜药材 ，购于湖南湘西，由重庆工学院傅善权副研究员鉴定为龙胆科獐牙菜属植物川东獐牙菜Swertia davidi Franch的全草。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱Hypersil C18柱（150 mm×4.6 mm,5 μm）；流动相为甲醇和0.04%磷酸溶液的比例在0～15 min内由22∶78变化至32∶68；流速 1.0 ml·min-1；检测波长254 nm；柱温为室温。
2.2 对照品及供试液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备
精密称取芒果苷对照品一定量，用甲醇溶解，制成0.27 g·L-1的溶液，经0.45 μm滤膜滤过，备用。
2.2.2 供试品溶液的制备
分别称取经干燥粉碎的川东獐牙菜5.0 g 3份，各加入40 ml甲醇液，超声提取30 min,过滤得提取液，滤渣再各加30 ml甲醇液，超声提取20 min，过滤得提取液，合并两次提取液。将提取液减压浓缩干燥得提取物，各称取该提取物一定量，用甲醇溶解制成5.0 mg·ml-1的溶液, 经0.45 μm滤膜过滤，备用。
2.3 线性关系考察实验
分别精密量取上述对照品溶液1，2，4，6，8，10 μl 进样，以色谱峰面积(Y)对质量(X)进行回归，芒果苷的线性回归方程为Y=5.0×106X-87984，r=0.999 7，线性范围为0.27～2.70 μg。
2.4 精密度实验
取上述对照品溶液10 μl，连续进样6次，测得芒果苷峰面积RSD为1.36%，表明仪器进样精密度良好。
2.5 稳定性实验
取2.2.2项下供试样品溶液10 μl，分别在0，2，4，8，16 h进样，测定芒果苷的峰面积RSD为2.15%，表明样品溶液在16 h内稳定。
2.6 重现性实验
取同一批川东獐牙菜样品，按供试品制备方法配制6份，分别进样10 μl，测定芒果苷的含量RSD为1.82%，表明该方法的重现性较好。
2.7 加样回收率实验
取同一供试品5份，分别加入与样品量之比为1∶1的芒果苷对照品，按供试品溶液制备，进样10μl，得回收率为100.90%，RSD为2.19%。结果见表1。表1 芒果苷的回收率实验结果（略）
2.8 样品含量测定
取2.2.2项下供试品制备方法制成样品溶液各10 μl进样（n=3），测定峰面积，由线性方程计算得川东獐牙菜全草、叶、茎、根各部位芒果苷含量见表2，对照品及供试品色谱图见图1。表2 不同部位川东獐牙菜中芒果苷的含量测定结果（略）
3 讨论
3.1 芒果苷［2，3］在獐牙菜属植物中广泛存在，具有保肝利胆、平喘镇咳、抗病毒等作用。近年来又发现其许多新的药理活性，但用高效液相色谱法测定川东獐牙菜中芒果苷的含量尚未见报道。本法采用原生药材提取液直接测定，杂质干扰小，且稳定性和重现性较好，为开发本属植物种芒果苷质量标准的研究提供了一种较理想的含量测定方法。
3.2 本实验结果表明，川东獐牙菜叶中芒果苷含量较高，茎中含量最低，为合理地利用川东獐牙菜各部位及相关制剂的质量研究提供实验依据。
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［1］刘士寻，肖兵南，龙顺英，等. 川东獐牙菜对细菌的抑制试验［J］.中兽医医药杂志，2004，2：48.
［2］林鹏程，冶兆辉，卢永昌，等.HPLC法测定獐牙菜及其近缘植物中4种有效成分的含量［J］.药物分析杂志. 2004，24(5)：502.
［3］刘青戴，传 勇. 不同超声波频率对芒果甙提取率的影响［J］.广西中医药，2001，24(4)：58.
