反相高效液相色谱法测定鼻渊枢滴鼻剂中阿魏酸的含量

      作者：李春花，严玉平，宋晓宇，范精华    

【关键词】  鼻渊枢滴鼻剂；,,阿魏酸；,,反相高效液相色谱法

　　摘要：目的建立以反相高效液相色谱法测定鼻渊枢滴鼻剂中阿魏酸含量的方法。方法采用反相高效液相色谱法，色谱柱为Diamonsil C18柱(200 mm×4.6 mm,5 μm)；甲醇水乙酸（35∶65∶1 V/V/V）为流动相；流速 1.0 ml/min；检测波长为 322 nm；外标法定量。结果阿魏酸在0.208~1.040 μg 范围内进样量X（μg）与峰面积Y呈良好的线性关系 ，Y=1 704 575.96 X－13 177.4（r=0.999 7，n=5），平均回收率为97.12％，RSD=1.28%。结论 反相高效液相色谱法测定滴鼻剂溶液中阿魏酸含量用于制剂质量控制，方法简便，灵敏，准确。

　　关键词：鼻渊枢滴鼻剂；  阿魏酸；  反相高效液相色谱法

　　Determination of the Content of Ferulic Acid in Biyuanshu Nose Drops by RPHPLC

　　Abstract：ObjectiveTo establish the RPHPLC method for content determination of ferulic acid in Biyuanshu nose drops.MethodsThe assay was performed on a diamonsil C18 column by UV detection at the wavelength of 322 nm with methanolwateracetic acid (35∶65∶1)as the mobile phase at the flow rate of 1.0ml/min.ResultsThe content of ferulic acid was linear with its area over the range from 0.208 μg~1.04  μg， Y=1 704 575.96X-13 177.4（r=0.999 7，n=5）. The average recovery was 97.12％,RSD=1.28%.ConclusionThe present method is convenient,sensitive and accurate with good reproducibility and can be used for the quality control of Biyuanshu nose drops.

　　Key words：Biyuanshu nose drops;  Ferulic acid;  RPHPLC
   
　　鼻渊枢滴鼻剂由川芎、辛夷花、鹅不食草、细辛等组成，具有祛风通窍、清热解毒的功效，主要用于急慢性鼻炎、鼻窦炎引起的头痛、鼻塞、流黄浊涕，属风热犯肺者。本实验以川芎中有效成分阿魏酸为指标，采用反相高效色谱法测定滴鼻剂溶液中阿魏酸含量，旨在建立制剂的质量控制分析方法。报道如下。

　　1  仪器与试药

　　1.1  仪器日本岛津高效液相色谱系统SPD10AVD，SPD10A VP紫外检测器，N2010 色谱工作站；756-MC紫外可见分光光度计（上海精密仪器厂）；1810BC石英自动双重纯水蒸馏器（江苏省金坛市白塔石英玻仪厂）；TD200/型天平（天津天平仪器有限公司）；TG328B型分析天平（上海精科仪器厂）；KQ250B型超声波清洗机（上海必能信超声有限公司）。

　　1.2  试剂与药材阿魏酸对照品（药品生物制品检定所，批号07739910）；甲醇（色谱纯，天津市康科德科技有限公司）；乙酸（分析纯，天津市标准科技公司）；水为自制新鲜双蒸水。鼻渊枢滴鼻剂（河北医科大学中药药剂教研室自制，批号20060301，20060310，20060320）。辛夷花、川芎、鹅不食草、细辛购于石家庄乐仁堂药店，经鉴定符合2005版《中国药典》规定。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件固定相为迪马公司Diamonsil ODSC18反相柱（200 mm×4.6 mm，5 μm serNo.8023115），流动相为甲醇水乙酸（35∶65∶1，V/V/V)；流速1.0 ml/min ；检测波长322 nm；柱温为室温；进样量20 μl，理论塔板数按阿魏酸计不低于3 000，阿魏酸与其相邻色谱峰分离度大于1.5。

　　2.2  对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的阿魏酸对照品5.2 mg，用少量甲醇溶解后，加双蒸水于50 ml 棕色容量瓶中至刻度，超声处理10 min，放置室温，双蒸水定容。取上清液，过0.45 μm微孔滤膜，取滤液作为供试品溶液,得 0.104 mg/ml 对照品溶液备用。

　　2.3  供试品溶液的制备

　　2.3.1  鼻渊枢滴鼻剂的制备［1］按处方比例准确称取各味药材，混匀后置500 ml 烧杯中，加 8倍量水室温下浸泡60 min，煮沸后改文火煎 60 min，用4层纱布过滤，残渣加 8 倍量水重复以上过程，合并 3 次滤液，浓缩至每毫升药液含1 g生药材，放置室温，以95%乙醇醇沉至60%，静置过夜，减压抽滤，滤液回收乙醇至无醇味，继续浓缩至每毫升药液约含原药材1 g的提取液，得供试品原液。用NaHCO3调pH 6.5，氯化钠调整渗透压至等渗，消毒，分装，灌封，得鼻渊枢滴鼻剂，2 ml/支。

　　2.3.2  样品供试液的制备精密量取供试品原液1.0 ml，置10 ml 棕色容量瓶中，加入流动相，超声混匀15 min，放至室温定容。取上清液，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液。

　　2.4  阴性对照液的制备按处方比例称取不含川芎的各味药材，按上述2.3项下方法制备不含川芎的阴性对照液。

　　2.5  检测波长的选择吸取阿魏酸标准品液，紫外扫描，阿魏酸在322 nm处有最大吸收且干扰小，故选择322 nm作为检测波长。

　　2.6  色谱系统的适用性考察分别精取标准品溶液，供试品及阴性对照液，在本实验选定的色谱条件下，分别进样20 μl，在阿魏酸标准品出峰位置，阴性对照液无干扰，见图1～3。

　　图1  阿魏酸标准品色谱图（略）

　　图2  鼻渊枢滴鼻剂样品色谱图（略）

　　图3  鼻渊枢滴鼻剂阴性样品色谱图（略）

　　2.7  线性关系及灵敏度考察精密量取对照品液1，2，3，4，5 至10 ml棕色容量瓶中，用双蒸水定容，超声处理5 min，0.45 μm微孔滤膜滤过，分别进样20 μl，测峰面积。以峰面积（Y）对进样量（X）进行回归，得回归方程为：Y=1704575.96X-13177.4(r=0.999 7,n=5)。结果表明，阿魏酸进样量在0.208 ～1.040 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。最低检测限为0.208 μg。

　　2.8  精密度实验精密吸取对照品液2.5 ml，双蒸水定容至10 ml，超声处理5 min，0.45 μm微孔滤膜滤过，连续进样5次，进样20 μl，测峰面积依次为806 636，800 160，802 339，799 924，795 551，以峰面积大小RSD=0.50% (n=5)，结果表明本测定系统精密度良好。

　　2.9  重复性实验取同一批号（20060301）下样品5份，依2.3项下供试品液制备方法制备样品液，分别进样20 μl，依法测定峰面积，以阿魏酸含量计算RSD=0.32% (n=5)，重现性良好。

　　2.10   稳定性实验精密吸取同一份供试液，于室温下0，2.0，4.0，8.0，12.0，24.0 h进样，测定 6次，RSD＝2.01％（n=6），保留时间极差为0.247 min。表明本检测系统条件下，供试品溶液24 h内稳定性良好。

　　2.11   加样回收率实验 平行精密吸取6份已知含量的供试品原液1 ml至标记的棕色容量瓶中，分别加入（C=0.020 8 mg/ml）阿魏酸标准品溶液：1.4，1.6，1.8 ml，流动相定容至10 ml，超声混匀 15 min，取上清液分别过 0.45 μm 微孔滤膜，进样 20 μl测定峰面积，以阿魏酸含量计算，测得回收率见表1。

　　表1  回收率测定结果（略）

　　2.12  样品含量测定精密吸取鼻渊枢滴鼻剂3批样品各3份，每份1 ml，用流动相定容至10 ml，超声混匀 15 min，取上清液过0.45 μm微孔滤膜，分别进样 20 μl，测定峰面积。结果见表2。

　　表2   鼻渊枢滴鼻剂中阿魏酸的含量（略）

　　3  讨论

　　3.1  阿魏酸在溶液状态下不稳定，在处理样品时要注意避光操作，药品配制后应置棕色瓶中，于冰箱中保存。本实验初期，阿魏酸曾按《药典》中分离系统分离检测［2］，分离效果不理想，峰拖尾，且阿魏酸标准品分解迅速，在标准品溶液中会出现双峰。为此本实验调整了流动相比例［3］，实验表明分离效果较好且在该条件下阿魏酸能保持稳定。

　　3.2  实验中发现流动相中甲醇的比例对阿魏酸的保留时间和分离效果影响较大，若甲醇比例过高，样品中阿魏酸分离效果不好，且峰易拖尾。实验证明甲醇比例不应超过35%。

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　　［1］  崔丽娟,刘玉明.正交试验法优选川芎中阿魏酸的提取工艺［J］.齐鲁药事, 2005, 24(9)：560.

　　［2］  国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学出版社，2005：339.

　　［3］  季  芳,吕雪芳.川芎中阿魏酸的HPLC测定［J］.中国应用药学杂志,2003,20(2)：149.