综合评分法优化黑豆汁炖何首乌炮制工艺

                作者：田源红， 张丽艳， 杨玉琴， 李健， 徐兰楠

【关键词】  何首乌；,,炮制；,,正交实验设计；,,综合评分

　　摘要：目的优化黑豆汁炖何首乌炮制工艺。方法以何首乌中二苯乙烯苷、多糖、大黄素的含量为指标，采用正交设计综合评分法优化黑豆汁炖何首乌的工艺。结果优化所得工艺为炖36 h，干燥9 h，干燥温度80℃。结论 合理优选出最佳的炮制工艺稳定。

　　关键词：何首乌；  炮制；  正交实验设计；  综合评分

　　AbstractObjectiveTo optimize the technologies of processing in Heshouwu braised. MethodsThe preparation was optimized by using orthogonal design which took the contents of polysaccharides, 2.3.5.4'four hydroxy tow cinnamic-2-o-D-glycosides, emodin in Heshouwu.ResultsThe optimized processing braising for 36 hours,drying 9 hours at 80℃were the fairest for all the products.ConclusionIt is successful to prepare on Heshouwu braised using the optimized technologies of processing.

　　Key wordsHeshouwu；  Processing；  Orthogonal design process；  Colligation score
   
　　何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的干燥块根。生品性平，味苦涩，微甘，功能生津润燥，解毒散结；制品性变温，味转甘，具补肝肾、益精血、强筋骨、乌须发的作用。临床多采用制何首乌入药。何首乌中主要含蒽醌、二苯乙烯苷、卵磷脂、糖类等成分。蒽醌具有泻下作用；二苯乙烯苷能降低血清中的胆固醇，具有保肝作用；卵磷脂是构成神经组织特别是脑脊髓的主要成分，也是血球和其他细胞膜的原料，能促进血液中细胞的新生，具有良好的滋补作用，还能使血糖升高，有抗衰老、减轻动脉粥样硬化的作用［1］；多糖有良好的抗衰老、补益、强壮作用［2］。《药典》2005版虽收载了何首乌的炮制方法，但仅做了一般原则性的规定，未规定其关键炮制工艺参数。本实验采用正交实验设计，综合评分法，按照2005版《中国药典》方法炮制何首乌，测定其多糖、二苯乙烯苷、大黄素指标，优化出炮制工艺参数。

　　1  器材

　　1.1  药材何首乌药材购于贵州省凯里地区施秉GAP药材种植基地，经我院周汉华副教授鉴定为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的干燥根。经鉴定、含量测定均符合2005版《中国药典》（Ⅰ部）标准。

　　1.2  仪器AgilentHP1100型高效液相色谱仪（美国），AB204-S型分析天平（万分之一，瑞士梅特勒-托利多公司），AE240-型电子分析天平（十万分之一，瑞士梅特勒-托利多公司）。Cintra-20紫外分光光度计（澳大利亚），CS-9301双波长飞点薄层扫描仪（日本岛津），CAMAG-Linomat-IV半自动点样仪（瑞士卡玛），薄层色谱数码相机系统。

　　1.3  试药大黄素对照品（批号：756-8902），二苯乙烯苷对照品（批号：110844-200404）均由中国药品生物制品检定所提供，含量测定用。乙腈为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯，硅胶G板（青岛海洋化工厂）。苯酚试剂的制备：取苯酚500 g，加铝片0.5 g与碳酸氢钠0.25 g，蒸馏收集180℃馏分，称取此馏分34 g，加水500 g置棕色瓶中备用。

　　2  方法

　　2.1   黑豆汁的制备取黑豆100 g，加水适量，煮约4 h，熬汁约150 g，豆渣再加水煮约3 h，熬汁约100 g，合并黑豆汁约250 g。

　　2.2  黑豆浸出率的测定参照《中国药典》2005版水溶性浸出物含量测定项下方法测定，结果3批次浸出物含量为11.05%～16.46%（n=2）。

　　2.3  炮制品取何首乌片与黑豆汁拌匀，闷润，置蒸锅内密闭，隔水分别炖至药物内外呈棕褐色，取出，干燥［3］。每100 kg净何首乌片，用黑豆10 kg。用正交实验方法，按炖制时间、干燥温度、干燥时间作为考察的3个因素，各取3个水平设计实验方案。炮制得到9个样品，粉碎过4号筛，备用。见表1～2。

　　表1   因素水平（略）

　　2.4  考察指标的测定

　　2.4.1  糖含量测定 参照《中国药典》2005版金樱子含量测定项下方法测定［3］。结果见表3。

　　2.4.2  二苯乙烯苷含量测定 参照《中国药典》2005版制何首乌含量测定项下方法测定［3］。结果见表3。

　　表2   L9(3)4正交实验方案（略）

　　2.4.3  大黄素含量测定 薄层色谱条件：硅胶G板10 cm×10 cm，110℃活化1 h，原点状点样，展开剂为苯∶醋酸乙酯∶冰醋酸（15∶5∶0.3）。薄层扫描条件：双波长反射法锯齿扫描。λS=450 nm，λR=550 nm，狭缝宽度0.4 mm×0.4 mm。对照品溶液的制备：精密称取大黄素标准品14.9 mg置50 ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0.298 mg/ml大黄素对照品溶液。供试品溶液的制备：取何首乌粗粉约2 g，精密称定，置150 ml平底烧瓶中，精密加入95%乙醇35 ml，加热回流至沸腾，并保持微沸1 h。放冷后，取下，用干燥滤器滤过，置干燥蒸发皿中，在水浴上蒸至10 ml以下，将浓缩后的滤液转移置10 ml容量瓶中，定容至刻度，密闭，即得。标准曲线的制备：用自动点样仪，分别将大黄素对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0 μl点于同一硅胶G薄层板上，按上述条件展开，扫描，以峰面积积分值为纵坐标，点样量为横坐标，绘制标准曲线。得回归方程为：A=3 056.2C+808.63，r＝0.997。结果表明，大黄素在0.596～2.086 μg范围内呈良好的线性关系。样品含量测定：分别精密吸取大黄素对照品溶液2，4 μl供试品溶液4 μl，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，展开，同标准曲线项下操作，扫描、含量。结果见表3。

　　2.4.4  醇溶性浸出物的测定参照《中国药典》2005版醇溶性浸出物方法测定，结果醇浸物为6.69%～11.14%。

　　3  结果

　　综合指标的［4］在多指标的优化实验中，有些指标欲求最大值（如多糖、二苯乙烯苷），而有些指标则越小越好（如大黄素）。多数情况下，这些指标之间可能出现矛盾，所以在优化过程中需对各个指标进行综合考虑和权衡。故设计一个综合指标“隶属度”，将各个指标统一综合考察，以综合指标进行直观分析和方差分析。在计算综合指标之前，需先将各指标进行“隶属度”计算。对于欲达到最大值的指标（如多糖、二苯乙烯苷）其指标隶属度＝（指标值－指标最小值）/（指标最大值－指标最小值）。对于要进行最小化的指标（如大黄素），其指标隶属度＝（指标最大值－指标值）/（指标最大值－指标最小值）［5］。可见，指标最大值的隶属度为1，而最小值隶属度为0，所以0≤指标隶属度≥1。如果各指标的重要性一样，就直接将各指标隶属度相加作为综合分数；如不一样就要求出加权和作为综合分数。根据各成分在何首乌中的重要性，考虑二苯乙烯苷占40%、多糖占40%、大黄素20%的权重。于是每号实验的综合分数＝多糖隶属度×40%＋二苯乙烯苷×40%＋大黄数×20%，满分为1.00。评分结果和以综合分数作为总指标进行的直观分析。结果见表3。

　　表3   L9(3)4 实验结果与综合评分结果（略）

　　表4  方差分析（略）

　　由方差分析结果可知，各考察因数对制何首乌的质量影响大小顺序为A＞C＞B，炖时间、干燥时间均有显著性影响。干燥温度无显著性影响，故从节约能源考虑选择干燥温度80℃。正交设计最佳实验方案为A3B1C1，即炖36 h，干燥9 h，干燥温度80℃。验证实验为进一步验证所得工艺的可行性和稳定性，以炖36 h，干燥9 h，干燥温度80℃工艺，炮制3批样品，进行验证实验，所得实验结果见表5，综合评价优于正交设计中各次实验，结果令人满意，说明优化成功。

　　4  讨论

　　何首乌中有效成分二苯乙烯苷、多糖，其含量应越高越好；结合性蒽醌是何首乌致泻的副作用成分，含量随着炮制时间延长而减少，其游离蒽醌开始时增加，20 h后就开始减少，致使致泻作用减弱，游离蒽醌（大黄素）越低越好。炖20 h后何首乌几乎无毒性。故传统认为黑豆汁炖何首乌32 h为佳［6］。本实验中多糖含量随炮制时间而增加，与制何首乌补益作用更加突出相一致。二苯乙烯苷、大黄素随炮制时间增加而有所降低。根据各成分在何首乌中的重要性，考虑二苯乙烯苷占40%，多糖占40%，大黄素20%的比例。综合评分得出影响因素主次为A＞C＞B，即炖时间＞干燥时间＞干燥温度。优选方案A3B1C1，即炖36  h，干燥时间9 h，干燥温度80℃为佳。由方差分析结果可知，考察因素炖制时间对实验结果有级显著性影响，干燥时间对实验结果有显著性影响。

　　表5   验证实验结果（略）

　　为对实验结果进行综合评价，在处理实验数据时，引入了综合指标隶属度的概念，将具有不同考察范围的指标转变成具体数据，使之能综合出最优的炮制工艺参数。黑豆汁炖何首乌饮片：辅料黑豆汁的质量可以控制其水溶性浸出物，本实验黑豆汁水溶性浸出物为11.05%～16.46%；炮制工艺条件为炖36 h ，干燥9 h，干燥温度80℃。其醇溶性浸出物6.69%～11.14％，二苯乙烯苷1.49%～2.26%含量均大大高于《药典》2005版制何首乌的醇溶性浸出物不得少于5.0%，二苯乙烯苷不得少于0.7％的限量规定。为申请黑豆汁炖何首乌饮片生产批准文号提供理论依据。

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　　［1］  龚千锋.中药炮制学，第1版［M］.北京：中国中医药出版社，2003：292.

　　［2］  苗明三.何首乌多糖对衰老模型小鼠组织的影响［J］.中国中医药信息杂志，2001，8（9）：40.

　　［3］  国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部 ［S］.北京：化学出版社，2005：123，154.

　　［4］  李云雁，胡传荣.实验设计与数据处理，第1版［M］.北京：化学工业出版社，2005：90

　　［5］  胡容峰，朱家壁，彭代银，等.综合评分法优化复方丹参口腔速溶片制剂处方［J］.中国中药杂志，2006，31（5）：380

　　［6］  叶定江,张世臣,潘三江.中药炮制学，第1版［M］.北京：中国中医药出版社，1999：348.