薄层扫描法测定芪黄胶囊剂中黄芪甲苷的含量

            作者：梁旭明，唐耀书，张小梅

【关键词】  芪黄胶囊；,,黄芪甲苷；,,薄层扫描

　　摘要：目的用薄层扫描法测定芪黄胶囊剂中黄芪甲苷的含量。方法采用１％羧甲基纤维素钠作黏合剂的硅胶Ｇ薄层版；以氯仿甲醇水（13∶6∶2）下层溶液为展开剂；λS=520 nm，λR =700 nm。结果黄芪甲苷在2.016～12.096 μg范围内呈良好线性关系 (r=0.999 1)，平均加样回收率为97.46%；RSD=2.68%(n=6)。结论 该方法简单、准确、重现性好，可作为该制剂的质量控制。

　　关键词：芪黄胶囊；  黄芪甲苷；  薄层扫描

　　　Abstract：ObjectiveTo determine the content of Astragaloside in Qihuang Capsules by TLCScanning.MethodsSilica G in 1% CMCNa was used as the Solid phase and developed with ChloroformMethanolWater(13∶6∶2);λS=520 nm,λR =700 nm.ResultsAstragaloside showed a good linear relationship within a range of 2.016～12.096  μg(r=0.999 1). The average recovery was 97.46%,RSD was 2.68%(n=6).ConclusionThe method is simple,accurate,reliable and can be used as the quality control of this preparation.

　　Key words：Qihuang Capsules;  Astragaloside;  TLCscanning
   
　　芪黄胶囊剂由黄芪、匙羹藤叶等中药材经提取分离制备而成，该制剂具有补气养阴，活血化淤功能，用于中医辨证属糖尿病肾病肾气阴两虚兼血淤证候者。本品中黄芪是君药，经实验研究，采用高效液相色谱仪，其检测器为紫外检测器，黄芪甲苷处于末端吸收，难以检测，采用薄层扫描法［1］能有效控制该制剂中黄芪甲苷的含量。

　　1  器材

　　CS9301双波长飞点薄层扫描仪（日本岛津）。点样定量毛细管（Drummond Scientific CO USA）；BPQI型薄板自动铺板器（重庆南岸新力实验电器厂）。芪黄胶囊剂（由本文第一、二作者制备）；黄芪甲苷（药品生物制品检定所，批号：07819706）；所用试剂均为分析纯。

　　2.1  色谱条件 薄层板：1%羧甲基纤维素钠作黏合剂的硅胶G薄层板。点样量：供试品溶液15 μl，对照品溶液4，10 μl，分别点于同一薄层板上。展开剂为氯仿甲醇水（13∶6∶2）下层溶液。展开方式：上行展开。显色剂为10%硫酸乙醇显色,于105°C烘箱中烘至斑点显色清晰。采用双波长反射锯齿扫描法［2］， 狭缝0.4 mm ×0.4 mm , 线性参数S x = 3,扫描波长λS=520 nm，参比波长λR＝700 nm。

　　2.2  测定波长的选择用定量毛细管吸取黄芪甲苷对照品溶液、供试品溶液、阴性样品，分别点于同一硅胶G薄层板上，按测定方法进行层析，展开，晾干，显色，分别于390～700 nm范围内进行扫描，进行斑点光谱分析，得最大吸收波长为520 nm，因此选定λS=520 nm，λR＝700 nm。结果见图1。

　　2.3  供试品溶液的制备 取［装量差异］下芪黄胶囊剂8粒，倾出内容物，精密称定，置索氏提取器中［3］，加甲醇50 ml，冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4 h，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水40 ml分数次微热使溶解，溶液置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，30 ml/次，合并正丁醇液，用氨试液洗涤3次，30 ml/次，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水10 ml微热使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂（内径1.5 cm，长12 cm），以水80 ml洗脱，弃去水液，再用40%乙醇40 ml洗脱，弃去40%乙醇洗脱液，继用70%乙醇120 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

　　λ/nm

　　1.黄芪甲苷对照品   2.芪黄胶囊供试品  3.阴性样品

　　图1   测定波长的选择（略）

　　2.4  对照品溶液的制备取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含黄芪甲苷1.008 mg的溶液，即得。

　　2.5   阴性样品溶液的制备 按生产工艺制备缺黄芪的阴性样品，并按供试品溶液的制备方法制得阴性样品溶液。

　　2.6   标准曲线的制备分别精密吸取2，4，6，8，10，12 μl对照品溶液，点于同一硅胶G薄层板上，按测定方法展开，显色，扫描斑点峰面积值，以峰面积值为纵坐标，点样量为横坐标，绘制标准曲线，并按最小二乘法进行回归，得回归方程为：Y=398.02X+65.719(r=0.999 1)，表明黄芪甲苷点样量在2.016～12.096 μg范围内与峰面积成良好的线性关系。结果见表1。

　　表1  标准曲线测定结果（略）

　　2.7  稳定性实验精密吸取黄芪甲苷对照品溶液适量，点于硅胶G薄层板上，按规定的条件展开，显色，分别于0，0.5，1，2 h扫描测定峰面积值，其相对标准差RSD=0.176%，表明黄芪甲苷斑点显色后2 h内基本稳定。

　　2.8  精密度实验精密吸取黄芪甲苷对照品溶液10 μl，点于硅胶G薄层板上，按规定条件展开，显色，重复测定5次，其RSD=0.72%，表明仪器精密度良好。

　　2.9  重现性实验取同一批（批号050201）样品，按供试品溶液制备方法分别制备5份供试品溶液，分别点于不同的5块薄层板上，按测定方法测定其结果，5份样品峰面积的RSD=2.29%，表明本法重现性较好。

　　2.10   加样回收率实验取同一批（批号050201）已知含量的样品6份各6粒，精密称定，分别精密加入黄芪甲苷对照品各1.004 mg，按供试品溶液制备方法制备，按测定方法进行测定，回收率，结果见表2，表明本法具有良好的回收率。

　　表2   回收率实验结果（略）   

　　2.11  样品含量的测定取6批样品，按含量测定方法检测。结果见表3。

　　3  讨论

　　本品在含量测定过程中曾采用高效液相紫外检测器检测，结果不理想，采用薄层扫描法简便，结果可靠，稳定性好，可作为该制剂的质量控制方法。

　　表3  含量测定结果（略）

　　本品为复方制剂，药味多，处方量大，成分复杂，采用D101大孔数脂吸附分离，样品得到很好纯化，给点样操作带来方便，同时薄层展开斑点无干扰。

　　：

　　［1］  王宝，苏  健，鲁  静．黄芪甲苷的测定在中药质控中的应用［J］. 中药杂志，1996，21(3)：161.

　　［2］  宋吉莲，张冬梅，刘  兵.薄层扫描法测定复方抗甲片中黄芪甲苷的含量［J］. 中成药,2005,27（1）：101.

　　［3］  国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］. 北京： 化学出版社，2000：249.