高效液相色谱法测定半夏厚朴泡腾片中厚朴酚及和厚朴酚的含量

               作者：郑平， 王文忠， 欧英勇， 张广厚， 李婷， 郭伟

【关键词】  半夏厚朴泡腾片；,,厚朴酚；,,和厚朴酚；,,高效液相色谱

　　摘要：目的建立半夏厚朴泡腾片中厚朴酚、和厚朴酚含量的测定方法。方法以依利特C18（4.6 mm × 200 mm,5 μm) 色谱柱分离厚朴酚、和厚朴酚，流动相甲醇水乙腈（31.5∶38.5∶30.0），检测波长294 nm。结果线性范围：厚朴酚0.54～13.61 μg，r＝0.999 7（n＝7），和厚朴酚0.11～2.82 μg，r＝0.999 7（n＝7）。厚朴酚平均回收率100.92％，SRD＝1.79％（n＝6），和厚朴酚平均回收率101.23％，RSD＝1.79％（n＝6）。结论该方法简便易行，稳定性较好。

　　关键词：半夏厚朴泡腾片；  厚朴酚；  和厚朴酚；  高效液相色谱

　　Abstract：ObjectiveTo establish a method for determining the content of magnolol and honokiol in BanxiaHoupu effervescent tablets.MethodsMagnolol and honokiol were separated with Elite C18column（4.6 mm × 200 mm,5μm) and detected at 294 nm, using methanolacetonitrilewater（31.5∶38.5∶30.0）as mobile phase.ResultsThe standard curves for magnolol and honokiol were linear in the range of 0.54～13.61μg (r＝0.999 7) and 0.11～2.82 μg (r＝0.999 7）. The average recoveries of magnolol and honokiol were 100.92％ (RSD＝1.79％) and 101.23％ (RSD＝1.79％). ConclusionThe method is simple and quick, which is suitable for practical use.

　　Key words：BanxiaHoupu Effervescent Tablets；  Magnolol；  Honokiol；  HPLC
   
　　半夏厚朴汤出自汉代张仲景的《金匮要略》，由半夏、厚朴、茯苓、生姜和苏叶5味中药组成，具有行气散结、降逆化痰等功效，原用于梅核气，现临床常用于治疗精神性疾病如抑郁症、焦虑症等［1］。目前半夏厚朴汤临床应用剂型仍为传统的汤剂，患者应用起来有诸多不便。鉴于此将其制成迅速溶解，吸收快、生物利用度高,便于患者服用的口服泡腾片剂型。厚朴系方中君药之一，厚朴酚、和厚朴酚是其主要成分。本文采用高效液相色谱（HPLC）法测定半夏厚朴泡腾片中厚朴酚、和厚朴酚的含量。

　　1  仪器与试药

　　1.1  仪器Agilent 1100高效液相色谱仪，DAD检测器，四元泵，Agilent 1100工作站；Bp211D分析天平（德国，sartorius）；KQ218型超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

　　1.2  试药甲醇（色谱纯，天津光复精细化工研究所），乙腈（色谱纯，天津北联精细化学品开发有限公司），水为重蒸水；厚朴酚、和厚朴酚对照品（药品生物制品检定所）；中药材（天津市中药饮片厂）；样品（自制）。

　　2  方法与结果［2,3］

　　2.1  色谱条件 色谱柱：依利特C18（4.6 mm × 200 mm, 5 μm) ；流动相：甲醇水乙腈（31.5∶38.5∶30.0）；检测波长：294 nm；流速：1.0 ml・min1；柱温：25℃。在此条件下，对照品、阴性对照样品、厚朴药材及半夏厚朴泡腾片样品的HPLC图谱见图1。

　　2.2  线性关系 精密称取厚朴酚对照品17.01 mg、和厚朴酚对照品3.52 mg于同一25 ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容，摇匀。精密吸取0.2，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml对照品溶液，分别加入至5 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得到7组不同浓度的对照品溶液。按上述色谱条件，分别吸取每组对照品溶液20 μl进样，测定峰面积积分值，以峰面积积分值（ｙ）对进样量（μg）（ｘ）进行回归，得回归方程：厚朴酚：ｙ＝1152.8ｘ＋67.2（r＝0.999 7），线性范围为0.54～13.61μg；和厚朴酚：ｙ＝1 335.6ｘ＋14.9（r＝0.999 7），线性范围为0.11～2.82 μg。

　　2.3  样品测定液的制备 取样品研成细粉，混匀，精密称取1.5 g，置25 ml具塞锥形瓶中，用移液管吸取甲醇25 ml加入具塞锥形瓶中，称定重量，超声处理15 min，放冷至室温，再称定重量，用甲醇补足重量，摇匀。用微孔滤头（45 μm）滤过即得。

　　2.4  精密度实验精密吸取某一浓度的对照品溶液20μl进样，并连续重复6次，记录厚朴酚、和厚朴酚的峰面积积分值，RSD分别为0.92％和1.01％。

　　2.5  稳定性实验取样品测定液，按0，2，4，8，24 h不同时间间隔进样，测定厚朴酚、和厚朴酚的峰面积积分值，RSD分别为0.58％和1.64％，结果表明样品测定液中厚朴酚、和厚朴酚在24 h内稳定。

　　2.6  阴性对照实验 取阴性对照样品（处方中缺厚朴药材，按照半夏厚朴泡腾片制备工艺制备），按样品测定液制备方法制备供试液，进样测定。结果其色谱在厚朴酚、和厚朴酚相应保留时间无峰出现，说明处方中其他成分对测定结果无干扰。

　　2.7  厚朴药材实验 取厚朴药材研成细粉，按样品测定液的制备方法制备药材供试品溶液。进样测定。

　　2.8  重复性实验  取同一批样品6份，按上述样品测定液制备方法分别制备供试液，按上述条件测定6次，记录厚朴酚、和厚朴酚的峰面积积分值，计算RSD分别为1.14％和1.62％。

　　2.9  加样回收率实验  精密吸取已知含量的同一批6份样品测试液0.1 ml，分别精密加入0.1 ml的对照品溶液（厚朴酚：0.628 1 mg・ml1，和厚朴酚：0.128 7 mg・ml1），混匀，进样20 μl，测定峰面积积分值，计算回收率。结果见表1~2。

　　表1  厚朴酚回收率测定结果(略)

　　2.10  样品测定取3批样品，研细，混匀，分别精密称取1.5 g，按样品测定液的制备方法制备供试液，20 μl进样，测定峰面积积分值。结果见表3。  

　　表2  和厚朴酚回收率测定结果(略)  

　　表3  样品含量测定结果(略)

　　a对照品  b阴性对照  c厚朴药材  d和半夏厚朴泡腾片样品

　　图1  HPLC图谱

　　3  讨论

　　3.1  制备测定液时采用了超声提取的方法［3］。为检验该方法的提取效果［4］，在按上述方法提取后的残渣中，再加甲醇25 ml，超声处理15 min，过滤，滤液蒸干，加甲醇2 ml溶解，微孔滤头（45 μｍ）滤过，进样20 μl 。结果其色谱在厚朴酚、和厚朴酚相应保留时间无峰出现，说明样品测定液的制备方法能将样品中的厚朴酚、和厚朴酚基本提取完全，方法简便易行，稳定性较好。

　　3.2  选择流动相时，有关［2,3］，比较了不同比例的甲醇-水、乙腈水冰醋酸、甲醇水乙腈等溶剂系统，结果以甲醇水乙腈（31.5∶38.5∶30.0）条件下分离效果最好,杂质干扰较小,厚朴酚的保留时间约为23 min,和厚朴酚的保留时间约为15 min。

　　参考文献：

　　［1］  丁德正. 半夏厚朴汤在精神疾病中的应用［J］.陕西中医，1992，13（9）：412.

　　［2］  国家药典委员会. 药典，Ⅰ部［S］.北京：化学出版社，2005：176.

　　［3］  干国平，熊  丽，陆海涛，等. 高效液相色谱法测定香砂养胃丸中厚朴酚与和厚朴酚的含量［J］.中国药学杂志，2002，22（12）：734.

　　［4］  周羽琪，章建民，高家鉴. HPLC法测定开胸顺气胶囊中厚朴酚与和厚朴酚的含量［J］.中成药，2002，24（2）：93.