紫外分光光度法测定补骨脂药材中总呋喃香豆素含量２

        作者：寿清耀， 杨荣平， 王宾豪， 钟国跃， 涂永勤， 胡轶娟

【关键词】  补骨脂药材；,,总呋喃香豆素；,,紫外分光光度法

　　摘要：目的建立紫外分光光度法测定补骨脂药材中总呋喃香豆素的含量。方法补骨脂药材粉末经索氏提取2 h，过聚酰胺柱后，采用紫外分光光度法，检测波长为245 nm对补骨脂药材中的总呋喃香豆素进行测定。结果采用该方法可准确测定补骨脂药材中总呋喃香豆素的含量，补骨脂素在1.008～10.08μl/ml范围内吸光度与浓度的线性关系良好，样品平均回收率为98.7%，精密度RSD为0.11%，重复性RSD为2.8%，稳定性RSD为0.75%（4 h内）。结论该方法简单、准确，可用于补骨脂药材中总呋喃香豆素的含量测定。

　　关键词：补骨脂药材；  总呋喃香豆素；  紫外分光光度法

　　Determination of the Total Furanocoumarins in Fructus Psoraleae by UV Spectrophotometry

　　Abstract：ObjectiveTo establish a  UV spectrophotometry for determination of the total furanocoumarins in Fructus Prosraleae. MethodsThe powder of Fructus Psoraleae was extracted by CH3OH for two hours and puerariaed by polyamide column chromatography ;when it was determined  by UV spectrophotometry, wave length was 245 nm.ResultsThe method had good linear relationship from 1.008μl/ml to 10.08 μl/ml,and the recovery rate was 98.7%．The relative standard deviation of accurate test and stability test were 2.8%and 0.75% respectively.ConclusionThe method is simple and accurate, and can be used for determination of the total furanocoumarins in Fructus Psoraleae.

　　Key words： Fructus Psoraleae；  Total furanocoumarins；  UV spectrophotometry
   
　　补骨脂为豆科植物补骨脂Psoralea corylifolia L.的干燥成熟果实。补骨脂味辛，苦，归肾、脾经。具有温肾补阳、纳气、止泻之功效［1］。用于阳痿遗精，遗尿尿频，腰膝冷痛，肾虚作喘，五更泄泻；外用治白癜风、斑秃。呋喃香豆素类为补骨脂的主要活性物质，用于白癜风、多种妇科出血、鼻、牙龈出血及类血友病出血等症［2］；同时有一定的抗癌活性及对成骨细胞的增殖作用。由于补骨脂中呋喃香豆素类成分无酚羟基，而其他成分包括拟雌内酯类，补骨脂黄酮类及单萜酚类成分均有酚羟基，故采用聚酰胺柱色谱对补骨脂药材中的呋喃香豆素进行富集，以补骨脂素为对照品，建立了用紫外分光光度法测定总呋喃香豆素含量的方法。结果表明该方法简便、准确，可用于补骨脂药材中总呋喃香豆素含量测定。

　　1  仪器与试药

　　UV1601型可见紫外分光光度计（日本岛津），AW220型天平（日本岛津），补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品（药品生物制品检定所），聚酰胺粉（30～60目）。

　　2  方法与结果

　　2.1  供试品溶液的制备

　　2.1.1  上柱样品的制备取补骨脂药材粉末（过三号筛）0.5 g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，加热回流提取2 h，过滤，加0.5 g聚酰胺粉（30～60目）拌匀，即得。

　　2.1.2  乙醇洗脱浓度的考察将样品上聚酰胺柱（10 ml 30~60目聚酰胺，1×10 cm），水洗脱至无色，再依次以30%,50%,70%乙醇各洗脱100 ml，洗脱液进行紫外全波长扫描，图谱见图1~5。
   
　　由上图可以看出，30%乙醇洗脱液的紫外扫描图最大吸收波长为245 nm，与补骨脂素及异补骨脂素等呋喃香豆素的紫外扫描图基本一致；50%乙醇洗脱液显示为补骨脂酚的紫外吸收图；而70%洗脱液显示为黄酮及拟雌内酯类紫外吸收。

　　图1  30%乙醇洗脱液(略)                    

　　图2  50%乙醇洗脱液(略)

　　图3  70%乙醇洗脱液 (略)                  

　　图4  补骨脂素(略)

　　图5  异补骨脂素 (略)
 
　　2.1.3  乙醇洗脱用量的考察将样品上聚酰胺柱，加水洗脱至无色，再加30%乙醇洗脱以 10 ml/min洗脱，每25 ml为一流分，取1 ml稀释至10 ml，在245 nm处测定吸光度。结果见表1。
 
　　表1  样品30%乙醇洗脱液不同流分的紫外吸收(略)

　　由上表可以看出，第10个流分所检测到的吸光度已很低，故样品上聚酰胺柱后，加水洗脱至无色，用30%乙醇以10 ml/min洗脱250 ml即得。

　　2.1.4  结论根据实验结果，最终确定补骨脂药材供试品制备方法为取补骨脂药材粉末0.5 g（过三号筛），精密称定，置索式提取器中，加甲醇适量，加热回流提取2 h，过滤，滤液加0.5 g聚酰胺粉（30～60目）拌匀，挥干，上聚酰胺柱，以30%乙醇洗脱250 ml。

　　2.3  对照品溶液的配置取补骨脂对照品12.6 mg精密称定，加甲醇超声，定容至50 ml，再精密吸取1 ml，加甲醇定容至25 ml即得标准品溶液。

　　2.4  标准曲线的绘制精密吸取上述对照品溶液1，3，5，7，10 ml，加甲醇定容至10 ml，于245 nm处测定吸收度,.并以吸光度与对照品浓度进行回归,得标准曲线方程y=0.132 1x+0.008 8，r=0.999 7(n=5)。实验表明补骨脂素在1.008～10.08 μg/ml浓度范围内与吸光度呈良好的线性关系。

　　2.5  精密度实验精密吸取上述对照品溶液1 ml，加甲醇稀释至10 ml，于245 nm处测定吸光度，连续测定5次，结果表明5次测定的RSD为0.11%，故仪器精密度良好。

　　2.6  稳定性实验将精密度考察项下对照品溶液于0，6，12，24，48 h在245 nm处测定吸光度，实验结果表明RSD为0.75%，对照品溶液在4 h内稳定性良好。

　　2.7  重复性实验按照拟定的含量测定方法，取同一批药材5份，每份0.5 g，分别制备样品，测定吸光度，并其含量，实验结果5个样品含量RSD为2.9%，表明本法重复性良好。

　　2.8  回收率实验取已知含量的补骨脂药材0.25 g，精密称定，分别精密加入补骨脂素对照品溶液适量（3种不同水平，各2份），按供试品制备方法处理，进行含量测定，计算回收率。结果见表2。
 
　　表2  回收率实验(略)

　　由表2可知，3种水平6次实验的加样回收率测定结果均在95%～105%之间，其平均值为98.7%，RSD为1.00%。

　　2.9  样品测定 取6批补骨脂药材，每批0.5 g（过三号筛选），按供试品制备方法制备，测定吸光度，根据标准曲线计算样品中总呋喃香豆素的含量。结果见表3。
 
　　表3  6批补骨脂药材含量测定结果(略)

　　从表3可知，补骨脂药材中总呋喃香豆素的含量在1%左右，各个批次药材之间总呋喃香豆素的含量有较大的差异。

　　3  讨论

　　补骨脂中总呋喃香豆素是补骨脂中的主要活性物质，补骨脂中呋喃香豆素没有酚羟基，在聚酰胺柱上的吸附能力较补骨脂中的其他成分如黄酮类、拟雌内酯类及单萜酚类为弱。根据这一特性，我们通过聚酰胺柱色谱对补骨脂药材中的呋喃香豆素进行了富集，并对乙醇洗脱的浓度与用量进行了考察。结果以药材提取液拌聚酰胺，上柱，水洗至无色，再以30%乙醇洗脱250 ml作为供试品溶液；以补骨脂素为对照品绘制标准曲线测定样品中总呋喃香豆素含量，该方法灵敏度高，重复性好。根据拟定的方法，我们测定了6个不同批次药材中中呋喃香豆素的含量，发现各个批次药材含量有较大的差别，故有必要通过总呋喃香豆素来控制补骨脂药材的质量。

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　　［1］  国家药典委员会.药典，Ⅰ部［S］.北京：化学出版社，2005.

　　［2］  吉  力，徐植灵.补骨脂化学成分综述［J］.中国中药杂志，1995，20（2）：120.