复方丹参制剂质量控制研究
作者：黄喜茹， 范桂敏， 冯媛媛， 杨亚军
【关键词】 复方丹参；,,制剂；,,原儿茶醛；,,水溶性酚酸总量；,,比色法
摘要：目的建立复方丹参制剂中水溶性酚酸总量的测定方法，以其中酚酸总量做为质量控制指标全面控制药品质量。方法利用丹参中水溶性酚酸类成分与NaNO2-Al(NO3)3在碱性条件下的显色反应，比色法测定复方丹参制剂中水溶性酚酸（以原儿茶醛计）的总量。结果原儿茶醛在3.336~14.46 μg/ml范围内呈良好的线性关系，回归方程为：A=0.027 77C+0.012 79(r=0.099 96)，加样平均回收率为99.95%，RSD为0.16%。结论该法简便快速，结果准确，重现性好，可用于复方丹参制剂的质量控制。
关键词：复方丹参； 制剂； 原儿茶醛； 水溶性酚酸总量； 比色法
Studies on Quality Control Method of Compound Radix Salviae Miltiorrhizae Preparations
Abstract:ObjectiveTo establish an assay for the determination of the total components of water-soluble phenolic acidity in compound Danshen preparation.MethodsIn the solvent of 1 mol/L NaOH,using the reaction of the total components of water-soluble phenolic acidity in Danshen and the NaNO2-Al(NO3)3,the total components of water-soluble phenolic acidity in compound Danshen preparation(calculated with protocatechualdehyde )were determined by colorimetric spectrophotometry.ResultsThe linear range of protocatechualdehyde was over 3.336~14.46 μg/ml,the correlative equation was:A=0.027 77C+0.012 79(r=0.999 6).The average recovery and relative standard deviation were 99.95% and 0.16%,respectively.ConclusionThe method was simple,quick and accurate,and it is usable on controling the quality of compound Danshen preparation.
Key words:Compound Danshen; Preparation; Protocatechualdehyde; Total components of water-soluble phenolic acidity; Colorimetric spectrophotometry
复方丹参制剂如复方丹参滴丸、复方丹参含片、复方丹参片具有活血化淤、理气开窍、扩张血管和增进冠状动脉血量的作用，主要用于心绞痛、心肌梗塞等疾病的预防和。丹参为制剂的君药。丹参中的化学成分包括水溶性酚酸类和脂溶性二萜醌类。水溶性酚酸类包括原儿茶醛、丹参素、原儿茶酸等;脂溶性二萜醌类包括丹参酮ⅡA等。有些丹参制剂的主要有效成分是其水溶性酚酸类成分，其含量高低决定药品的质量和疗效。由于其成分复杂，测定各个单一成分不仅难度大，且不足以全面反映丹参制剂的质量。在丹参制剂的质量控制研究中，以其中水溶性酚酸总量作为质量控制指标未见报道。本文利用丹参中水溶性酚酸类成分与NaNO2-Al(NO3)3在碱性条件下生成粉红色化合物的反应［1］，研究建立了复方丹参制剂中水溶性酚酸总量的测定方法，用以全面控制复方丹参制剂的内在质量。
1 仪器与试药
紫外可见分光光度计（UV-2201日本岛津）；原儿茶醛对照品（北京药品生物制品检定所）；复方丹参滴丸、复方丹参含片、复方丹参片（市售）；其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的配制精密称取在105℃干燥至恒重的原儿茶醛对照品55.6 mg，用蒸馏水溶解，并转移置50 ml量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，得储备液。精密吸取储备液置50 ml量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液（每毫升含原儿茶醛111.2 μg）。
2.2 条件的考查
2.2.1 测定波长分别配制一定浓度的原儿茶醛对照品及丹参各种制剂供试品，显色前后，分别在200~900 nm内记录吸收光谱。结果表明，原儿茶醛对照品、丹参各种制剂供试品显色前在可见区均无吸收，显色后在506 nm处均有最大吸收。故选择506 nm作为测定波长。
2.2.2 溶液的酸度溶液的酸度对显色反应有较大影响。本文采用1 mol/L的NaOH溶液，固定其它实验条件，只改变NaOH的加入体积，配制系列测定溶液，分别测定吸光度。NaOH加入体积为4.0 ml时，溶液的吸光度值最大且趋于稳定，故NaOH的最佳加入体积为4.0 ml。
2.2.3 显色剂的加入量显色剂是1%的NaNO2和20%的Al（NO3）3。其它实验条件不变，只改变显色剂的加入量，配制系列测定溶液，分别测定吸光度。当NaNO2和Al（NO3）3加入体积分别为2.5 ml和0.25 ml时吸光度值最大且稳定，故选择NaNO2和Al（NO3）3加入体积分别为2.5 ml和0.25 ml。
2.2.4 稳定性吸取一定浓度的原儿茶醛对照液适量，加入NaNO2 2.5 ml摇匀，暗处静置5 min，再加入Al（NO3）3 0.25 ml，摇匀，暗处静置5 min，再加入NaOH 4.0 ml，用水稀释至10 ml，摇匀。在506 nm处，每隔2 min测定其吸光度。结果表明，在10 min吸光度值达到最大且稳定，稳定时间至少达40 min，本实验选择最佳反应时间为15 min。
2.3 标准曲线的绘制精密吸取对照品溶液0.3，0.5，0.7，0.9，1.1，1.3 ml置10 ml量瓶中，分别加入NaNO2 2.5 ml，摇匀，暗处静置5 min。再加入Al（NO3）3 0.25 ml，摇匀，暗处静置5 min；再加入NaOH 4.0 ml，用水稀释至10 ml，摇匀，暗处静置10 min。以空白溶液作参比，在506 nm处测定吸光度，以浓度对吸光度值建立回归方程为：A=0.027 77C+0.012 79(r=0.999 6)；原儿茶醛在3.336~14.46 μg/ml范围呈良好的线性关系。
2.4 样品的含量测定取复方丹参滴丸10丸，用70%乙醇溶解，超声30 min。用水稀释至50 ml摇匀，过滤2次得样品液。精密吸取样品液适量置10 ml量瓶中，加入NaNO2 2.5 ml，摇匀，暗处静置5 min。再加入NaOH 4.0 ml，用水稀释至10 ml，摇匀，暗处静置10 min。以不加显色剂的溶液作参比，在506 nm处测定吸光度，按线性回归方程含量。取复方丹参含片3片，用70%乙醇溶解，超声30 min。用水稀释至50 ml，摇匀，过滤2次得储备液。精密吸取储备液5ml稀释成50 ml得样品液。以下操作同上。取复方丹参片20片，去糖衣，精密称重，求出平均片重，研细，精密称取细粉约5片量于具塞50 ml的三角瓶中，加蒸馏水30 ml，振摇10 min，超声30 min，转移至100 ml量瓶中，用蒸馏水反复洗涤三角瓶，洗涤液并入量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，过滤，续滤液即为复方丹参片的样品液。以下操作同上。结果见表1。
表1 复方丹参制剂中水溶性酚酸总量测定结果（略）
2.5 加样回收率的测定精密吸取样品液（复方丹参含片）适量平行7份两组，一组按样品测定方法测定，其测定值作为基础值，另一组精密加入不同量的对照品溶液，再按样品测定方法操作。计算回收率。结果见表2。
表2 回收率测定结果（略）
3 讨论
丹参水溶性酚酸类成分均为邻二酚羟基结构，本法可消除非邻二酚羟基类化合物的干扰，使结果准确。本法显色稳定性好，操作简便，易于掌握。实验结果表明，同厂家丹参制剂水溶性酚酸总量相差不大，而不同厂家的产品有一定差异。目前，中药制剂一般以一种主要活性成分作为质控指标。众所周知，中药的活性成分十分复杂，单用某一种活性成分来衡量药品的质量是不全面的。用水溶性酚酸总量作为质量控制指标尚属首次。本法可全面衡量复方丹参制剂的质量。
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［1］ 王文祥，周巧霞，蒋木岗，等.比色法测定丹参及其提取物水溶性总酚的改进［J］.中草药，2001，32（8）：711.
