复方芩柏颗粒剂提取工艺的研究

【摘要】  本文通过对大黄、延胡索的薄层色谱进行对比，及对小檗碱、黄芩甙含量的测定，确定了分提法优于混提法。并采用正交实验法考察了浸泡时间、加水量、加醇量、提取时间、乙醇浓度几个因素，确定了水提与醇提的工艺条件。

【关键词】  黄芩甙 小檗碱 分提 混提 正交实验

    复方芩柏颗粒剂由黄芩、黄柏、大黄等11味中药组成。临床用于痔疮术后感染，疗效满意。为了将药材中有效成分充分提出，提高制剂的质量，本文对该制剂提取工艺进行了系统的研究。

    1  仪器与试药

    1.1  仪器  日本岛津CS-930双波长薄层扫描仪，微量进样器（10ul）（上海医用激光仪器厂）。uv-1型三用紫外分析仪，CX-100超声波清洗器。

    1.2  试药  无水乙醇，甲醇，95%乙醇，苯，氯仿，甲酸，冰醋酸，乙酸乙酯，正丁醇等均为分析纯，盐酸小檗碱，黄芩甙（卫生部药品生物制品检定所）。

    2  提取工艺路线的选择

    　　本制剂处方由11味中药组成，其中黄柏、秦艽、玄胡、槟榔均含生物碱，泽泻中有效成分为三萜类化合物，易溶于有机溶剂。而其中大黄、当归、防风、生地、桃仁、黄芩中的有效成分能溶于水。又因大黄、黄芩等中药中的有效成分呈酸性，而生物碱呈碱性，酸与碱易发生反应而沉淀，从而影响其中有效成分的浸出。为此，设计了混提与分提二种工艺路线进行对比。

     2.1  浸膏得率

    　　依处方比例称取药材，分别按上述分提与混提工艺制备干浸膏，并求出浸膏得率，结果见表1。表1    二种工艺的浸膏得率

    2.2  薄层色谱对比

    2.2.1  延胡索的检识  取混提样品粉末3g，分提样品粉末2.6g，各加浓氨水2ml，放置（密塞）15min，加无水乙醇40ml，超声提取1h，过滤，滤液蒸干，残渣加氯仿2ml溶解，作为供试品溶液。取延胡索药材5g同法制成对照药材溶液，另取延胡索乙素，用氯仿制成每1ml含水量0.5mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述四种溶液各15ul，点于同一硅胶G薄层板（以0.5%CMC-Na为粘合剂）上，以石油醚︰醋酸乙醋（2︰1.7）为展开剂。（展开前先用氨蒸气饱和15min），展开，取出，晾干，喷稀碘化铋钾溶液，结果显示混提样品中几乎不能检出延胡索生物碱成分，而分提样品的生物碱成分的斑点则十分明显，见图1。

    2.2.2  大黄的检识  取混提样品粉末2g，分提样品粉末1.8g，加甲醇30ml，超声提取30min，过滤，滤液蒸干，残渣加15ml水溶解，再加盐酸2ml，置水浴中加热30min，立即冷却（置冰箱中），用乙醚分二次萃取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材1.0g，同法制成对照品药材溶液。取大黄素、大黄酚标准品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的对照品溶液。吸取上述三种溶液各15ml及大黄素、大黄酚的标准品溶液3ul点于同一硅胶G薄层板（以0.5%CMC-Na为粘合剂）上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-甲酸（15︰5︰1），展开，取出，晾干。在365nm紫外灯观察，分提，混提样品的薄层色谱无明显差异，见图2。

    2.3  小檗碱、黄芩甙浸出效率的比较

    2.3.1  小檗碱含量的测定  取分提和混提浸膏粉末约0.5g，精密称定，置25ml容量瓶中，加20ml无水EtoH，浸泡入1h，超声提取1.0h，加无水乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。用薄层扫描法测定小檗碱的含量，并浸出率，结果见表2。表2     小檗碱浸出率

    2.3.2  黄芩甙浸出率的测定  取分提、混提样品粉末约0.5g，精密称定，置25ml容量瓶中，加50%乙醇20ml，浸泡1h，超声1h，加50%乙醇，定容至刻度，摇匀，过滤，滤液作为供试品溶液，用薄层扫描法测定黄芩甙含量，并求出浸出率，结果见表3。表3     黄芩甙浸出率

    2.4  结果分析  由薄层色谱对比可知，延胡索以分提效果较佳，因分提所得斑点与单味药材几乎相同，且斑点清晰明显，而混提样品几乎不能检出生物碱成分的斑点，表明生物碱类成分未被浸出。大黄的薄层色谱中，分提与混提未见明显差别。从浸出率对比可知，分提工艺小檗碱的浸出率明显大于混提工艺，但黄芩甙的浸出率分提与混提工艺无明显差别，综合上述分析可以认为分提工艺优于混提工艺。因此，选定分提工艺作为该制剂的提取工艺。

    3  提取工艺条件的优选

    3.1  水提工艺条件的优选

    3.1.1  试验设计  采用正交实验法，选定浸泡时间、提取时间、加水量三个因素作为考察对象，以黄芩甙浸出率为评价指标，用L4（23）正交表安排实验，所选因素水平见表4。　表4            因素水平表

    3.1.2  试验方法  取黄芩、大黄、当归、桃仁、生地、防风，按正交试验设计表的安排（见表4），进行提取，收取二次提取液，准确浓缩至300ml备用。

    　　黄芩甙的测定:精密吸取浓缩液5ml，置于10ml容量瓶中，再精密加入5ml无水乙醇，摇匀，静置，取上清液作为供试品溶液，用薄层扫描法测定黄芩甙的含量，并求出黄芩甙浸出率。

    3.1.3  数据处理与结果分析  对实验数据进行处理，由直观分析可知，C因素对黄芩甙浸出率影响最大，其次为B、A。最佳工艺条件为A1B2C2，即浸泡0.5h，加水量分别为药材的10、8倍量，煎提二次，提取时间分别为2.0、1.5h。

    3.2  醇提工艺条件的优选

    3.2.1  试验设计  采用正交试验法，选定加醇量，乙醇浓度，提取时间三个因素作为考察对象，以小檗碱浸出率为评价指标，用L4（23）正交表安排试验，所选项因素水平见表5。表5                         因素水平表

    3.2.2  实验方法  取黄柏、秦艽、延胡索、泽泻、槟榔按正交试验设计表的安排（见表5）进行提取，收集二次提取液，准确浓缩至300ml，备用。

    　　小檗碱含量的测定:精密吸取上清液10ml，浓缩至5ml，作为供试品溶液，用薄层扫描法测定小檗碱的含量，并求出小檗碱浸出率（见表6）。

    3.2.3  数据处理与结果分析  对实验数据进行处理（见表6），由直观分析可知，C因素对小檗碱浸出率影响最大，其次为A、B。最佳工艺条件为A2B1C2即用95%乙醇为溶媒，浸泡12h，加热回流提取二次，加醇量分别为药材的8、6倍量，提取时间分别为2.0、1.5h。表6 

    4  小结与讨论

    4.1  芩柏颗粒剂由11味中药组方制剂而成，根据它们各自所含的成分不同，水溶性、醇溶性的不同，以及酸与碱易发生反应而影响有效成分的浸提，从而将它们分成两组，分开进行提取。薄层色谱及小檗碱、黄芩甙浸出率均显示分提优于混提。

    4.2  正交试验结果表明，水提工艺的最佳工艺条件为A1B2C2，即加水浸泡0.5h，煎提2次，加水量分别为药材的10、8倍量，提取时间分别为2.0、1.5h。醇提工艺的最佳工艺条件为A2B1C2，即加入95%乙醇，浸泡12h，加热回流提取二次，加醇量为药材的8、6倍量，时间分别为2.0、1.5h。