高效液相色谱法测定美诺平胶囊中丹参素的含量
作者：吕洁 孟祥军 邹春阳 武静
【摘要】 目的：测定美诺平胶囊中丹参素的含量方法。方法：采用HPLC法,色谱柱：Diamonsil C18（250×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇－水－二甲基甲酰胺－冰醋酸（2:95:2:1）；流速：1.0ml/min；检测波长：281nm。结果：丹参素钠浓度在0.1816～0.4234mg/ml，浓度与峰面积线性关系良好(r=0.9994)。平均回收率为101.84%，RSD为1.67%(n=9),方法的精密度、稳定性及重现性良好。结论：本试验所确定的质量分析方法简便,快速准确,可作为美诺平胶囊的质控标准。
【关键词】 美诺平胶囊 丹参素钠 高效液相色谱法（HPLC）
Study on the Quality Standard of Meinuoping Capsules
【Abasract】Objective: To determination the content of Danshensu in Meinuoping Capsules by HPLC. Methods：HPLC with Diamonsil C18（250×4.6mm，5μm）column was used.methanol-water-dimethylformamide-acetic acid(2:95:2:1) as a mobile phase, flow rate was 1.0ml/min and detection wavelength at 281nm.Results: The method had good linear realationship with in the rage of 0.1816～0.4234mg/ml of Danshensu, the correlation coefficient(r) was 0.9994. The average recovery rate was 101.84%，RSD was 1.67%(n=9). The method is suitable for the formulate of the quality standard with sufficient accuracy、stability and reappearance. Conclusion: The method is simpie、fast and accurate. It can be used for quality control of Meinuoping Capsules.
【Key words】Meinuoping Capsules； Danshensu ； HPLC
美诺平胶囊系在已有国家标准（试行）美诺平颗粒基础上通过改变剂型制得的中成药制剂[1]。本胶囊由白花蛇舌草、丹参、金银花、连翘、地黄、牡丹皮、赤芍、黄芩、桑白皮、石膏、皂角刺、防风、甘草十三味药材经提取加工制成，其组方合理，疗效确切。本品具有清热解毒，凉血散瘀的作用，主要用于肺热血瘀所致寻常型痤疮[2]。为严格控制本品质量，保证临床用药安全有效，根据美诺平颗粒国家标准（试行）及相关，对其进行质量标准的提高，选择测定丹参中丹参素作为质量控制的一个指标。采用分离效果好、专属性强的HPLC法，结果满意，重现性好，可用于本制剂的质量控制。
1 仪器与试药
1.1 仪器
高效液相色谱仪（UV200Ⅱ大连依利特仪器有限公司）；SrAdv Express色谱工作站；UV200Ⅱ检测器。天平（AL204梅特勒——托利多上海称重设备公司）。
1.2 试药
丹参素钠对照品购自药品生物制品检定所（批号：855-200202，供含量测定用）；甲醇（色谱纯，山东禹王实业总公司化工厂）；其它试剂均为分析纯。（批号：855-200202，供含量测定用）其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱Diamonsil C18柱（4.6×250mm，5μm）；柱温：室温；流动相：甲醇—水—二甲基甲酰胺—冰醋酸（2︰95︰2︰1）；流速：1.0ml/min；检测波长：281nm。根据测定结果，确定本实验理论板数按丹参素色谱峰计不得低于6000。
2.2 对照品溶液的制备
取丹参素钠对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号：855-200202）适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液（相当于每1ml含丹参素0.27mg），作为对照品溶液，置棕色瓶中备用。
2.3 供试品溶液的制备
取装量差异项下的本品内容物，研细，取6.5g，精密称定，精密加入50%甲醇20ml，超声处理20min，放冷，精密量取3ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，滤液经微孔滤膜（0.45μm）滤过，溶液置棕色瓶中备用。
2.4 阴性液的制备
按处方比例根据本品制备工艺，制备不含丹参的阴性样品，按供试品制备方法制备成阴性供试液。吸取上述溶液各20μl，在上述色谱条件下进样测定。结果表明：对照品溶液和供试品溶液均有相应的峰出现，在丹参素相应的保留时间处阴性液无吸收峰，处方中的其它成分不影响丹参素的含量测定，结果见图1，图2，图3。
2.5 线性关系考察
精密称取丹参素钠对照品20mg，置10ml量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取0.9ml、1.2ml、1.5ml、1.8ml、2.1ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液各20μl，分别注入液相色谱仪中，测定色谱峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=4964.5x+53.125，r=0.9994。结果表明：丹参素钠浓度在0.1816～0.4234mg/ml范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验
精密吸取对照品溶液20μl，连续进样5次，测定色谱峰面积，结果其峰面积的RSD值为1.16%，表明方法的精密度良好。
2.7 重现性试验
精密称取同批样品6份，照“2.22供试品溶液的制备”项下方法操作，每次精密吸取20μl进样，结果：峰面积平均值为1563.51，RSD为0.69%，表明重现性良好。
2.8 稳定性试验考察
取含量测定项下的供试品溶液，按0、2、4、6、8小时时间间隔，分别进样20μl，测得样品中丹参素钠色谱峰面积的RSD为0.61%，表明供试品溶液在8小时内基本稳定。
2.9 回收率试验考察
采用加样回收法，精密称取已知丹参素含量的供试品，按2.3项下制备供试品溶液，精密加入一定量的丹参素钠对照品溶液，按上述色谱条件测定。测得9次平均回收率为101.84%。RSD为1.67%，结果见表1。表1 回收率试验测定结果（略）
2.10 样品测定
取供试品十批，按上述供试品溶液的制备方法和测定条件，测定其中丹参素的含量，结果见表2。表2 样品的测定结果 （略）
根据上述测定结果，暂定本品每粒含丹参以丹参素（C9H10O5）计，不得少于1.50mg。
3 讨论
试验中对提取溶剂、超声处理条件进行了考察。结果表明，选用50%甲醇为提取溶剂，超声提取22分钟，样品中丹参素提取效率最佳。
《药典》（2005年版）52页规定了丹参中丹参酮ⅡA的含量测定方法与限度，经查阅有关，丹参中所含水溶性成分如丹参素、原儿茶醛相对丹参酮ⅡA稳定，且丹参中水溶性成分丹参素为痤疮的有效成分之一[2]，故本试验采用HPLC法测定丹参中丹参素的含量。在选定的色谱条件下，丹参素与相邻组分分离度良好，阴性液无干扰。经方法学考察，方法的重现性、稳定性、精密度、回收率试验均符合有关规定。因此，确立本制剂定量指标为丹参素，定量方法为高效液相色谱法。
【文献】
[1] 美诺平颗粒．国家药品标准（试行）．标准号为WS-10181（ZD-0181）-2002．
[2] 吴小红，刘瓦利．痤疮发病机制的中西医研究现状[J]．中国中西医结合皮肤性病学杂志，2003，2（3）：193．
[3] 林少华．HPLC法测定舒心丹中丹参素钠的含量[J]．中药研究与信息，2005，7（5）：14．
[4] 刘东辉，黄意甜．HPLC法测定心可宁胶囊中丹参素的含量[J]．中药新药与临床药理，2005，16（2）：128．
