HPLC法测定中保心宁颗粒中丹参素的含量

           作者：沈利君 蒋东海 高国芳

【摘要】  目的：建立保心宁颗粒中丹参素的含量测定方法。方法：采用HPLC法测定丹参素的含量。色谱柱为Agilent C18柱（250mm×4.6mm，5μm），以水-甲醇-醋酸（88:12:0.05）为流动相，柱温为室温，流速为1ml·min－1。结果：丹参素在2.0～10.0μg进样量的与峰面积有良好的线性关系。r=0.9998（n=5），平均回收率为97.5%（RSD=0.61%）。结论：该测定方法精密度高，重现性好，可用于测定丹参素的含量。

【关键词】  保心宁颗粒 丹参素 高效液相色谱

    Determination of the content of Danshensu in Baoxinning granules

    【Abstract】AIM :to estabolish the method to determine the Danshensu in Baoxinning granules.Methods:HPLC was used to determine the Danshensu.Agilent C18(250mm×4.6mm,5μm)as the chromatogram column.And water:methanol:acetic acid(90:10:0.05)as the mobile phase.1.0ml·min－1 folw rate,column temperature was room temperature.Results the calibration curves were linear in the ranger2.0～10μm of Danshensu.The correlation coefficient was 0.9998(n=5),the average recovery rate was 97.5%,and the RSD was 0.61%.Conclusion:The method was simple,eccurate and can be used to determine the Danshensu in Baoxinning granules.

    【Key Words】Baoxinning granules;Danshensu;HPLC

    保心宁颗粒由保心宁胶囊经过剂型改进而来，保心宁胶囊是《卫生部药品标准中药成方制剂》（第十一册）收载的品种[1]，由丹参、三七、当归、枳壳组成，保心宁胶囊具有活血化瘀，行气止痛功效，用于心绞痛、心律失常、改善冠心病等症。将保心宁胶囊研制成颗粒之后，具有剂量准确，携带方便，稳定性好的优点。丹参素是保心宁颗粒的主要有效成分，为了有效控制该制剂的质量，本文采用HPLC法测定了丹参素的含量。结果表明，该方法简便、准确，可以有效地用于测定保心宁颗粒中丹参素的含量。

    1  仪器与试剂

    岛津高效液相色谱仪（LC-1 CAD泵、SPD-10AVP紫外检测器、Class-VP工作站），KQ-50超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），甲醇为色谱纯，水为双蒸水，其他试剂为分析纯，丹参素对照品购自药品生物制品检定所；保心宁颗粒为中试样品，批号：20070112，20070319，20070425。

    2  方法与结果

    2.1  色谱条件[2]  色谱柱为Agilent ZORBAX C18（4.6mm×250mm，5um），流动相为水-甲醇-醋酸（88:12:0.05），检测波长：277nm；流速：1.0μL/min；柱温为室温；进样量10μL；理论塔板数以丹参素峰计不低于4000。

    2.2  对照品溶液的制备  精密称取丹参素对照品10.0mg置于10ml容量瓶中，用双蒸水定容至刻度，得浓度为1.0mg/ml的对照品储备溶液。

    2.3  供试样品的制备方法考察[3]  取保心宁颗粒适量，研细，精密称取细粉2.0g，用20ml蒸馏水超声30min使之完全溶解，转移至60ml分液漏斗中，用乙酸乙酯进行萃取数次，每次40ml，合并萃取液，蒸干乙酸乙酯，残渣用双蒸水溶解并定容至5ml。为了达到最佳的萃取效果，对乙酸乙酯萃取次数考察，结果乙酸乙酯萃取次数以3次为好。

    2.4  专属性试验  精密吸取丹参素对照品溶液、保心宁颗粒样品供试液、阴性空白液各10μl，注入色谱仪中，由色谱图可知，在丹参素对照品色谱相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，阴性液在此峰位无吸收，说明此测定方法专属性强，色谱图见图1。

    2.5  线性关系  配制一系列不同浓度的丹素对照品溶液，浓度为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg·mL－1，精密吸取上述溶液各10μL进样，以进样量X（μg）对峰面积Y进行线性回归，得到回归方程为Y=316554.7X＋17108，r=0.9998（n=5）。说明丹参素在2.0～10.0μg进样量的与峰面积有良好的线性关系。

    2.6  精密度考察  取保心宁颗粒适量，研细，精密称取细粉2.0g，按2.3法下制备供试样品，进样10μl，连续进样6次，记录峰面积，结果丹参素面积的RSD为1.64%（n=6），说明该测定方法精密度较好。

    2.7  稳定性考察  取保心宁颗粒适量，研细，精密称取细粉2.0g，按2.3法下制备供试样品，在0h、2h、4h、8h、12h进样10μl，记录色谱峰面积，结果丹参素面积RSD为1.67%（n=5），说明供试样品在12h之内基本稳定。

    2.8  重现性试验  取同一批号颗粒剂，按2.3法制备5批样品，分别进样10μl，测得丹参素平均含量为0.387mg·g－1，RSD为1.92%（n=5），说明测定方法重现性较好。

    2.9  加样回收率试验  取保心宁颗粒适量，研细，精密称取细粉2.0g，分别加入1.0mg·ml－1的丹参素对照品溶液0.8ml，以下按2.3法制备供试样品，测得丹参素的平均加样回收率为97.5%（n=6），回收率较高，结果见表1。

    回收率（%）=测出丹参素的量－样品中丹参素的量÷加入丹参素对照品的量×100%表1   丹参素加样回收率实验结果（略）

    2.10  含量测定  取3批中试保心宁颗粒按2.3法制备供试样品，测定丹参素的含量，结果见表2。表2  样品含量测定结果（略）

    3  讨论

    由于丹参素为酚酸性化合物，极性较大，相应，决定以不同比例的甲醇-水-酸为基础，探索流动相的最佳组成。试验发现，PH值对峰形的影响较大，当PH值较高时（PH＞5）时，可出现双峰，可能与丹参素在此PH值下呈游离与离子两种状态有关。结果采用水-甲醇-醋酸（88:12:0.05）为流动相时，分离效果良好，操作方便。

【参考文献】
  [1] 卫生部药品标准．中药成方制剂[S]．第十一册，1996：142．

[2] 林佳，徐丽珍，李琰，等．不同地区丹参中丹参素的含量比较[J]．药学杂志，2004，39（7）：496．

[3] 林少华，孙玉滨，姚为民，等．HPLC法测定舒心颗粒中丹参素钠的含量[J]．中药研究与信息，2005，7（5）：14．