HPLC法测定双黄通痹颗粒中麻黄碱、伪麻黄碱的含量

【摘要】  目的 建立复方制剂双黄通痹颗粒中麻黄碱、伪麻黄碱的含量测定方法。方法 色谱柱为Akasil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为0.02 mol/L磷酸二氢钾（含0.3%二乙胺，磷酸调pH=3）?乙腈（体积比96∶4）；检测波长为210 nm；流速为1.0 mL/min；柱温为40 ℃；进样体积为10 μL。结果 麻黄碱在25.2～504 μg/mL范围内呈良好线性关系,平均回收率为101.23%；伪麻黄碱在17.6～352 μg/mL范围内呈良好线性关系，平均回收率为99.25%。结论 本测定方法简便可行、重复性好，可用于双黄通痹颗粒中有效成分麻黄碱、伪麻黄碱的含量测定。

【关键词】  双黄通痹颗粒；麻黄碱；伪麻黄碱；HPLC

. Abstract:Objective To determine the contents of ephedrine and pseudoephedrine in Shuanghuangtongbi granula. Methods HPLC was used to determine the content of  ephedrine and pseudoephedrine in Shuanghuangtongbi granula. Samples were analyzed on an Akasil C18  column(4.6 mm×250 mm，5 μm). The mobile phase consisted of 0.02 mol/L potassium dihydrogen phosphate (0.3% diethylamine, phosphoric acid accommodate pH3)-acetonitrile(96:4). The column temperature was  40 ℃ and  flow rare 1.0 ml/min at a detection wavelength of 210 nm．Results A good linearity was obtained over 25.2-504 μg/mL of ephedrine and 17.6-352 μg/mL of pseudoephedrine for plasma with a good correlation coefficient．The average recoveries of ephedrine and pseudoephedrine were 101.23%and 99.25%，respectively. Conclusion This method is simpleand quick．Which could be used for the quality control of Shuanghuangtongbi granula.

    Key words:ephedrine；pseudoephedrine；Shuanghuangtongbi granula；HPLC

     双黄通痹颗粒由麻黄、黄芪、白芍、络石藤等多种中药组成，具有活血祛风、通痹止痛的功效。主要用于各类退行性病变，如骨性关节炎引起的骨关节疼痛及类风湿性关节炎等。方中麻黄作为君药，具有发汗平喘的功效，用于治疗痹痛患者有良好的抗炎、镇痛效果［1］。麻黄碱与伪麻黄碱为麻黄中重要的化学成分，其中的伪麻黄碱则具有良好的抗炎、镇痛的作用［2,3］。为制定该制剂的质量标准，本研究选用麻黄碱、伪麻黄碱作为检测指标，建立了高效液相色谱法测定双黄通痹颗粒中麻黄碱、伪麻黄碱的含量，现报道如下。

    1  仪器与试药

    1.1  仪器 

    　　Summit P680A型高效液相色谱仪，Summit P680A型 低压四元泵，PDA?100 ASI100自动进样器，Summit 柱温箱以及“变色龙”色谱工作站；Sartorius 德国赛多利斯十万分之一天平。

    1.2  试药与试剂 

    　　双黄通痹颗粒（深圳海王药业有限公司提供，批号分别为20061017、20060720、20060423）；盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱对照品均购自药品生物制品检定所（批号分别为171241?200404、110736?200525）。乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

    2  方法和结果

    2.1  色谱条件 

    　　色谱柱：Akasil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：0.02 mol/L磷酸二氢钾（含0.3%二乙胺，磷酸调pH=3）?乙腈(体积比96∶4)；检测波长：210 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：40 ℃。理论塔板数按盐酸麻黄碱大于6 000。色谱图见图1-3。

　　2.2  标准曲线的制备

    　　精密称取经五氧化二磷干燥的盐酸麻黄碱对照品25.2 mg、盐酸伪麻黄碱17.6 mg分别置20 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为储备液；分别精密吸取2种储备液各0.4、0.8、2.0、4.0、8.0 mL置同一20 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液；按上述色谱条件，取对照品溶液各10 μL进行测定。以对照品的峰面积(A)为纵坐标，质量浓度（ρ）为横坐标，绘制标准曲线，求得盐酸麻黄碱回归方程：A=328.28ρ+0.095，r=0.999 7，线性范围：25.2～504 μg/mL；盐酸伪麻黄碱回归方程：A=204.73ρ+1.023，r＝0.999 6，线性范围：17.6～352 μg/mL。

　　2.3  供试品溶液的制备

    精密称取经五氧化二磷干燥的双黄通痹颗粒样品1 g，研匀，转移至三角瓶中，精密加入1 mol·L-1盐酸30 mL，超声提取30 min，抽滤，精取续滤液10 mL，用质量分数为30%的氢氧化钠溶液调pH值至12～13，用乙醚萃取(20 mL，20 mL，10 mL，10 mL)，合并萃取液，回收乙醚至适量，转移至蒸发皿中挥干溶剂，残渣加甲醇溶解并转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，以0.45 μm的微孔滤膜滤过，取续滤液即得供试品溶液。

    2.4  精密度试验 

    取对照品溶液重复进样6次，每次10 μL。测得盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱峰面积RSD分别为0.88%、0.98%。

    2.5  稳定性试验 

    　　精密吸取供试品溶液10 μL，分别在0、2、4、6、8、10、12  h进样，测得麻黄碱、伪麻黄碱峰面积RSD分别为0.45%、0.57%，表明供试品溶液在12 h内测定结果稳定。

    2.6  重复性试验 

    　　取同一双黄通痹颗粒样品（批号：20061017），按“2.3”项下制备方法平行制备6份供试品溶液，分别依法进样，测得峰面积并含量，结果测得麻黄碱、伪麻黄碱含量的RSD分别为1.17%、0.99%。

    2.7  加样回收率试验 

    　　分别精密称取9份已测得麻黄碱、伪麻黄碱含量的双黄通痹颗粒（批号：20061017）各0.5 g，分成3组，每组3份，分别加入对照品溶液各0.8、1.0、1.2 mL（盐酸麻黄碱对照品溶液质量浓度为0.126 mg·mL-1，盐酸伪麻黄碱对照品溶液质量浓度为0.088 mg·mL-1），混匀，按“2.3”项下方法制备溶液，分别依法进样，测得峰面积并计算结果。3个浓度麻黄碱和伪麻黄碱平均回收率为101.23%、99.25%，结果见表1。表1  加样回收率试验结果

    2.8  含量测定结果 

    　　分别精密称取3批双黄通痹颗粒样品各3份，按“2.3”项下方法制备溶液，依法进样测定，结果见表2。表2  样品含量测定结果

    3  讨 论

    3.1  提取方法的选择

    　　麻黄中麻黄碱与伪麻黄碱的含量都比较高，都具有较强的生理活性，同时测定2成分的含量可较好地控制麻黄及其相关制剂的质量。《药典》2005年版［4］以盐酸麻黄碱作为控制麻黄及制剂质量的指标。按2005年版药典方法必须利用中性氧化铝将麻黄碱与伪麻黄碱分开，且药典的提取方法较为繁琐，经查阅［5］及进行回收率考察后发现，样品经盐酸酸化后以超声提取，再碱化后以乙醚提取，回收率良好。

    3．2  流动相的选择

    　　麻黄碱与伪麻黄碱呈弱碱性，可加适量二乙胺改善峰形,经查阅文献［6］及预实验考察后发现，以0.02 mol/L磷酸二氢钾（含0.3%二乙胺，磷酸调pH=3）?乙腈(体积比96∶4)为流动相时，2成分达到完全分离，能够准确定量。本实验也曾尝试选用其他流动相，试图缩短被测成分保留时间在15 min之内，但杂质峰与主峰有重叠，而且更主要的是麻黄碱与伪麻黄碱2种成分难以完全分离，不能同时测定。

    3.3  波长、流速、温度的选择

    　　从DAD检测器记录信号中提取麻黄碱、伪麻黄碱200～400 nm的光谱图，发现最大吸收波长均为210 nm，用DAD检测器记录205、210、215 nm的色谱信号，通过比较，210 nm下的色谱峰对称性好、理论塔板数高，故选择210 nm作为检测波长；流速为1 mL·min-1、温度为40 ℃时，麻黄碱、伪麻黄碱的分离效果更好，出峰时间更适中。

【文献】
  ［1］ 高哗珩，党力纳.麻黄研究进展［J］.陕西中医学院学报，2003，6（20）:60-61.

［2］ 吴桂荣,王晓文.伪麻黄碱水杨酸盐的药用研究—镇痛、抗炎及对胃黏膜的刺激的考察［J］.药学进展,2000，24（2）：107.

［3］ 吴桂荣,王晓文.伪麻黄碱水杨酸盐的药用研究—解热、对心率和血压及组胺所致刺激反应的影响［J］.药学进展,2000，24（4）：238.

［4］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：2005年版一部［S］.北京：化学出版社，2005：223.

［5］ 谢晓兰.HPLC法测定平喘合剂中麻黄碱、伪麻黄碱的含量［J］.药品评价，2006，3（6）：469-470.

［6］ 高湘，许爱霞，宋平顺，等.甘肃不同采收期人工种植及野生麻黄中麻黄碱与伪麻黄碱含量分析［J］.兰州大学学报：医学版，2006，32（6）：43-45.