奥硝唑结肠定位肠溶片质量标准的研究
【摘要】 目的 建立奥硝唑结肠定位肠溶片的质量控制标准。方法 采用紫外分光光度法，测定奥硝唑结肠定位肠溶片中奥硝唑的含量，并采用转篮法，在不同溶出介质中测定奥硝唑结肠定位肠溶片的释放度。结果 奥硝唑质量浓度在4.0～12.0 μg/mL范围内，线性关系良好(r=0.9999)，平均回收率为97.2%，RSD为0.603%；奥硝唑结肠定位肠溶片在pH1.0盐酸溶液（9→1000）2 h、pH6.8的磷酸盐缓冲溶液中4 h均未溶出，而在pH7.6的磷酸盐缓冲溶液中开始释放，2 h的累积释放度达90％以上。结论 奥硝唑结肠定位肠溶片的含量和释放度测定方法简便、快速、准确，可作为其质量控制标准。
【关键词】 奥硝唑 结肠定位肠溶片 释放度 质量标准
Abstract:Objective To establish quality standard for ornidazole colon?specific enteric tablets. Methods The content of ornidazole colon?specific enteric tablets was determined by ultraviolet spectrophotometry, and the release property of ornidazole colon?specific enteric tablets was determined by rotating basket method in different dissolution environments. Results The detection concentration range of ornidazole was 4.0～12.0 μg/mL(r=0.9999), and the linearity is good. The average recovery rate was 97.2%, RSD=0.603%. Ornidazole colon?specific enteric tablets has no dissolution in 2 hours in hydrochloric acid solution（9→1000）, 4 hours in pH6.8 phosphate buffer. But in pH7.6 phosphate buffer, the accumulation release could reach over 90% in 2 hours. Conclusion The assaying method and release profile determination method are simple, quick and accurate; it could be applicable in quality control.
Key words:ornidazole; colon?specific enteric tablets ; release in vitro; quality standard
奥硝唑（ornidazole，ONZ）是继甲硝唑、替硝唑后的第三代硝基咪唑类衍生物，具有良好的抗厌氧菌、抗滴虫和抗阿米巴原虫作用，与甲硝唑、替硝唑相比，疗效更确切、毒副作用更低、无致癌致突变作用，安全性更可靠，可用于肠道感染疾病和各种结肠炎的，如溃疡性结肠炎、节段性结肠炎(crohn?s病)、伪膜性肠炎、阿米巴肠道感染等。随着市场的不断开发，奥硝唑已逐渐形成取代甲硝唑、替硝唑的势头。奥硝唑以确切的疗效和巨大的市场容量获得了显著的社会效益，国内已上市的奥硝唑制剂有片剂、胶囊剂、注射液等。奥硝唑普通制剂口服后，药物主要在胃和小肠被吸收，到达结肠的药物很少，不能充分发挥药物治疗结肠炎的作用，治疗效果较差，且有恶心厌食等不良反应。口服结肠定位给药是最方便的给药方式之一，将奥硝唑制成结肠定位肠溶片，到达结肠后释放药物，可在病变部位形成较高的药物浓度，减少不良反应，更好地发挥治疗结肠炎症的作用［1］。本文采用紫外分光光度法，测定奥硝唑结肠定位肠溶片中奥硝唑的含量，并采用转篮法，在不同溶出介质中测定奥硝唑结肠定位肠溶片的释放度,建立了其质量控制方法，报道如下。
1 仪器与试药
1.1 仪器
ZRS?8G智能溶出试验仪（天津大学无线电厂）；UV?2450紫外分光光度计(日本岛津)；AY120天平(日本岛津)；超声波清洗器(上海之信仪器有限公司)。
1.2 试药
奥硝唑对照品（供含量测定用，批号：100608-200301，药品生物制品检定所）； 奥硝唑原料药（批号：200510A0706，湖南九典制药有限公司）；奥硝唑结肠定位肠溶片（规格：250 mg/片，自制）；硫酸、三硝基苯酚、盐酸、乙醇、氢氧化钠、磷酸二氢钾等试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 性状
本品为薄膜衣片，除去包衣后显类白色或白色。
2.2 鉴别［2］
三硝基苯酚试验：取本品1片，除去薄膜衣，将片芯研成细粉，取约相当于奥硝唑0.1 g细粉，加硫酸溶液（3→100）4 mL，振摇使奥硝唑溶解，滤过，滤液中加入三硝基苯酚试液10 mL，即成黄色沉淀。
2.3 释放度
2.3.1 释放介质的选择
pH1.0的盐酸溶液（9→1000）中模拟胃液中的环境,pH6.8的磷酸盐缓冲溶液中模拟小肠的环境,pH7.6的磷酸盐缓冲溶液中模拟回肠下段以及回盲结合部的环境。
2.3.2 吸收波长的测定
分别称取15 mg的奥硝唑对照品置100 mL容量瓶中，分别加盐酸溶液（9→1000）、pH6.8磷酸盐缓冲溶液和pH7.6的磷酸盐缓冲溶液溶解稀释至刻度，照分光光度法（中国药典2005年版二部附录ⅣA）于200～400 nm波长处扫描。按处方比例称取辅料0.25 g，置100 mL容量瓶中，分别加盐酸溶液（9→1000）、pH6.8磷酸盐缓冲溶液、pH7.6的磷酸盐缓冲溶液摇匀，吸取上清液照分光光度法（中国药典2005年版二部附录ⅣA）于200～400 nm波长处扫描。结果盐酸溶液中奥硝唑在276 nm处有最大吸收，上述各种磷酸盐缓冲溶液中奥硝唑在317 nm处有最大吸收。各辅料对测定无干扰。
2.3.3 标准曲线的制备
取约10 mg的奥硝唑对照品，精密称定，分别用盐酸溶液（9→1000）、pH6.8磷酸盐缓冲溶液和pH7.6的磷酸盐缓冲溶液溶解定容，制备标准曲线。奥硝唑的盐酸溶液（9→1000）的标准曲线：A＝0.02952C－0.002227,r＝0.9999，表明奥硝唑质量浓度在6.432～24.12 μg/mL范围内与吸光度间线性关系良好。奥硝唑在pH=6.8的磷酸盐缓冲溶液中标准曲线为：A＝0.0399C+0.00135,r＝0.9999，表明奥硝唑质量浓度在8.06～19.34 μg/mL范围内与吸光度间线性关系良好。奥硝唑在pH7.6的磷酸盐缓冲溶液中标准曲线为：A＝0.0008C+0.0396,r＝0.9999,表明奥硝唑浓度在4.896～12.24 μg/mL范围内，吸光度与溶液浓度间线性关系良好。
2.3.4 精密度试验
分别精密量取上述以盐酸溶液（9→1000）、pH6.8磷酸盐缓冲溶液和pH7.6的磷酸盐缓冲溶液配制的奥硝唑对照品溶液2 mL置25 mL棕色容量瓶中，用相应介质稀释至刻度，在最大吸收波长处测定吸光度，连续测定6次，RSD分别为0.241％、0.178％和0.175％。
2.3.5 稳定性试验
取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，分别取约50 mg细粉，精密称定,置100 mL棕色量瓶中，分别用盐酸溶液（9→1000）、pH6.8磷酸盐缓冲溶液和pH7.6的磷酸盐缓冲溶液定容至刻度，精密量取1 mL置25 mL的容量瓶中，再用相应介质稀释至刻度，各样品分别在0、2、4、6、8 h测定吸光度1次，每个样品测定5次，计算RSD，分别为0.362％、0.182％和0.360％。结果表明，本品的上述不同介质溶液在室温放置8 h内稳定。
2.3.6 回收率试验
分别精密称取奥硝唑对照品12.83、12.68、12.56 mg置250 mL的棕色容量瓶中，按处方量加入辅料混匀，用盐酸溶液（9→1000）、pH6.8和pH7.6的磷酸盐缓冲溶液溶解稀释至刻度，滤过，分别精密量取续滤液1、2、3 mL于10 mL棕色容量瓶中，用相应介质稀释至刻度。在最大吸收波长处测定吸光度。计算回收率，结果见表1、表2和表3。
表1 奥硝唑在盐酸溶液（9→1000）中回收率测定结果（略）
Tab.1 Recovery of ONZ in hydrochloric acid solution（9→1000）
表2 奥硝唑在pH6.8的磷酸盐缓冲溶液中回收率测定结果（n=9）（略）
Tab.2 Recovery of ONZ in pH6.8 phosphate buffer （n=9）
表3 奥硝唑在pH7.6的磷酸盐缓冲溶液中回收率测定结果（n=9）（略）
Tab.3 Recovery of ONZ in pH7.6 phosphate buffer （n=9）
2.3.7 释放度试验
取本品，照释放度测定法（药典2005年版二部附录XC第一法）［3］，以盐酸溶液（9→1000）900 mL为释放介质，转速为100 r/min，依法操作，经2 h时，立即将转篮提出液面，供试品未见有裂缝或崩解现象，随即将转篮浸入磷酸盐缓冲溶液（pH6.8）900 mL的释放介质中，转速不变，继续依法操作，经4 h时，立即将转篮提出液面，供试品表面包衣层略见溶涨，但仍未见有裂缝或崩解现象。随即将转篮浸入磷酸盐缓冲溶液（pH7.6）900 mL的释放介质中，转速不变，继续依法操作，每20 min取样1次，每次取样4 mL（取样后立即补加相应介质4 mL），立即经0.8 μm微孔滤膜滤过，准确量取续滤液0.4 mL，加相应介质稀释至10 mL，在最大波长处测定吸光度。
结果测得3批样品在盐酸溶液（9→1000）2 h， pH6.8的磷酸盐缓冲溶液中在4 h均无药物溶出，而在pH7.6的磷酸盐缓冲溶液开始释放，累积释放度结果见图1。
图1 6 h后，在pH7.6磷酸盐缓冲液中的释放曲线图（略）
Fig.1 Release profile of ONZ colon?specific enteric tablets in pH7.6 PB (6 h)
2.4 含量测定
2.4.1 最大吸收波长的测定
精密称取经60 ℃干燥至恒重的奥硝唑对照品适量（约5 mg）,置50 mL容量瓶中，以乙醇溶解并定容至刻度，精密吸取该对照品溶液1 mL置10 mL的容量瓶中，用乙醇稀释至刻度。照分光光度法（中国药典2005年版二部附录ⅣA）测定，在200～400 nm波长范围内进行扫描，结果在312 nm波长处有最大吸收，辅料在此波长处无干扰吸收。故选择312 nm作为测定波长。
2.4.2 标准曲线的制备
精密称取奥硝唑对照品10.01 mg，置100 mL棕色容量瓶中，用乙醇溶解并定容至刻度，再分别精密量取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL置10 mL棕色容量瓶中，加乙醇稀释至刻度。得回归方程为A＝2.59×10-4C＋0.043，r＝0.9999，表明奥硝唑质量浓度在4.00 ～12.01 μg/mL范围内与吸光度间线性关系良好。
2.4.3 精密度试验
精密量取奥硝唑对照品溶液（质量浓度为10.01 mg/mL）5 mL置50 mL棕色量瓶中，用乙醇溶解定容至刻度，在最大吸收波长处测定吸光度，连续测定6次，算得RSD为0.381％。
2.4.4 稳定性试验
取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取细粉62.9 mg，置100 mL棕色量瓶中，加乙醇75 mL振摇使溶解，再加乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2 mL置100 mL量瓶中，加乙醇稀释至刻度摇匀,得供试液。取供试液分别在0、2、4、6、8 h于最大吸收波长处测定吸光度，算得RSD为0.427％。结果表明供试液在8 h内稳定。
2.4.5 回收率试验
精密称取奥硝唑对照品10.04 mg，置100 mL棕色量瓶中，加入压片处方量辅料混匀，用乙醇溶解定容至刻度，滤过，分别取续滤液0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL置10 mL棕色量瓶中，加乙醇稀释至刻度，在最大吸收波长处测定吸光度。测定结果见表4。
表4 奥硝唑在乙醇中的回收率测定结果（n＝9）（略）
Tab.4 Recovery of ONZ in alcohol （n＝9）
结果表明，低、中、高3种浓度的加样回收率平均为97.2％,RSD为0.603%。
2.4.6 样品测定
分别取3个不同批号的包衣片各10片，除去包衣精密称定，研细，分别精密称取粉末，置100 mL棕色量瓶中，加乙醇75 mL振摇使溶解，再加乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2 mL置100 mL量瓶中，加乙醇稀释至刻度摇匀制得供试品溶液。测得3个批号样品的含量分别为256、254、248 mg/片。本品中含奥硝唑在标示量的90.0%～110.0%范围之内，符合规定。
3 讨论
3．1 传统观点认为结肠的pH值在整个胃肠道中最高，可达7.5～8.0，近年来研究发现，回肠下端至回盲结合部的pH值最高，约为7.4±0.4，进入结肠后由于短链脂肪酸、CO2和一些发酵产物的存在，pH明显下降，降至6.5左右。在疾病状态下，会下降到更低［4］。作者曾将本品在盐酸溶液中测试2 h（9→1000）后，样品保持完整的情况下，随即又将样品浸入pH值5.5的缓冲溶液测试，也未见样品开裂或崩解。但在经过pH值7.6的缓冲溶液测试后，再模拟结肠病理状态，在pH值5.5的缓冲溶液中测试，奥硝唑可迅速释放。可能是由于在pH值7.6弱碱性条件下，包衣膜溶解或破裂，耐酸性降低所致。因此认为本品可在回肠下端至回盲接合部释放药物后随即进入结肠部位,未释放完全的药物，在结肠病变部位将继续释放。
3．2 采用紫外分光光度法测定奥硝唑结肠定位肠溶片中奥硝唑的含量，方法简便、快速，结果可靠，制剂中的辅料不干扰测定，可作为该制剂的质量控制方法。
【】
［1］ 周毅生.奥硝唑结肠定位肠溶片:中国,101011369［P］.2007-08-08.
［2］ 国家食品药品监督管理局. WS1?（X?445）?20031.国家药品标准奥硝唑片［S］.
［3］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典:2005二部［S］．北京：化学出版社，2005：附录179.
［4］ 沈熊，吴伟，徐惠南．口服结肠定位释药系统评价方法［J］．中国临床药学杂志，2004，13（4）：250-253.
