龙血竭中龙血素A与龙血素B在大鼠体内的组织分布研究

                        作者：孙晓博，金描真，李雪，金鸽

 【关键词】  龙血竭；龙血素A；龙血素B；高效液相色谱法；组织分布

　　Abstract:Objective To study the tissue distribution of loureirin A and loureirin B in rats.Methods After intragastric (i.g.) administration of loureirin A and loureirin B at doses of 250 mg/100 g in rats, the tissue concentrations at different time points were determined by HPLC．Results After i.g. administration, the main tissue distributions of loureirin A and loureirin B in rats were similar. The loureirin A and loureirin B concentrations in the liver and kidney were the highest and those in the spleen，heart，lung，brain， and muscle decreased sequentially．Conclusion There was an extensive distribution of loureirin A and loureirin B in rats．

　　Key words:Dracaena cochinchinensis (Lour) S.C.Chen; loureirin A；loureirin B； HPLC；tissue distribution；

　　血竭(Dragon′s blood) 又名麒麟竭,为传统名贵中药。国产血竭称龙血竭, 龙血竭具有活血、化瘀、止血、补血的功效,被誉为“活血圣药” ［1］,临床应用广泛。 报道龙血竭中的主要成分为黄酮类化合物,其在冠心病、脑梗死、心肌缺血、脑缺血损伤的保护作等方面有显著疗效［2,3］。龙血素A、龙血素B是龙血竭黄酮的主要成分，所以本文用HPLC法［4］测定了龙血素A和龙血素B在不同组织中的浓度，为临床应用提供理论依据。

　　1  材料与方法

　　1.1  动物

    SD大鼠，体质量（250±20） g，雌雄兼备，由中山大学医学院动物中心提供，合格证号：2006A064。

　　1.2  主要仪器及试剂

    Waters高效液相色谱仪：515 HPLC泵，2487双波长吸收检测器，N?2000双通道色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所)；TDL80?2B台式离心机(上海安亭仪器厂)；超声仪(上海超声波仪器厂)；ZH?2  BLENDER涡旋混合器(天津药典标准仪器厂)。
        
　　广西产龙血竭(广西中医学院制药厂提供)；龙血素A、龙血素B对照品(药品生物制品检定所提供)；乙腈(色谱纯)；甲醇(色谱纯)，乙酸乙酯，无水乙醇，冰醋酸等均为分析纯。

　　1.3  色谱条件

    色谱柱：DIAMonSIL  C18(5 μm，250 mm×4．6 mm)；保护柱：Easyguard C18 Replacement CartridgesCat#6101；流动相：乙腈?1％冰醋酸(体积比35∶65)；检测波长：280 nm；流速：1.2 mL／min，柱温30 ℃。

　　1.4  龙血素A、龙血素B对照品贮备液的制备
    　　
　　取龙血素A用甲醇配制成每1 mL含100 μg的溶液，作为对照品储备液。龙血素B用甲醇配制成每1 mL含80 μg的溶液，作为对照品储备液。

　　1.5  样品的制备与测定
    　　
　　取大鼠心、肝、脾、肺、肾、脑，用水洗净，滤纸吸干，称重，加生理盐水制成30%的组织匀浆液，-20 ℃保存，备用。
    　　
　　取组织匀浆液1 mL，加入乙腈2 mL，乙酸乙酯2 mL［4］，涡旋振荡1 min，3 000 r/min 离心10 min，取上清液，再重复提取2次，合并上清液，50 ℃水浴挥干，于残渣中加入100 μL甲醇,溶解，10 000 r/min 离心10 min，取上清液20 μL进样。

　　2  结  果

　　2.1  标准曲线和线性范围
    　　
　　取各组织空白匀浆液，精密加入龙血素A、龙血素B对照品储备液，配成系列标准溶液，混匀，按“1.5”项下的方法，自“加入乙腈2 mL，乙酸乙酯2 mL”起，依法操作。记录峰面积。以质量浓度（ρ)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标进行线性回归，绘制标准曲线，结果表明，龙血素A、龙血素B的质量浓度与峰面积呈良好线性关系，龙血素A和龙血素B的检测限为0.025 μg/mL和0.023 μg/mL，各组织回归方程见表1、表2。表1  各组织中龙血素A的标准曲线、相关系数及线性范围（略）表2  各组织中龙血素B的标准曲线、相关系数及线性范围（略）

　　2.2  回收率试验
    　　
　　取各组织空白匀浆液，精密加入龙血素A、龙血素B对照品储备液，混匀，按“1.5”项下的方法，自“加入乙腈2 mL，乙酸乙酯2 mL”起，依法操作。绝对回收率，结果见表3、表4。表3  各组织中龙血素A的回收率试验（略）表4  各组织中龙血素B的回收率试验（略）

　　2.3  精密度试验
    　　
　　取各组织空白匀浆液，精密加入龙血素A、龙血素B对照品储备液（加入量与回收率项下加入量相同），混匀。按“1.5”项下的方法，自“加入乙腈2 mL，乙酸乙酯2 mL”起，依法操作。计算日内、日间精密度，各组织中龙血素A和龙血素B的日内及日间RSD均小于10%。

　　2.4  稳定性试验
    　　
　　取各组织空白匀浆液，精密加入龙血素A、龙血素B对照品储备液（加入量与回收率项下加入量相同），混匀。放置-20 ℃保存1周，37 ℃水浴解冻后，按“1.5”项下的方法，自“加入乙腈2 mL，乙酸乙酯2 mL”起，依法操作。冻融样品稳定。

　　2.5  方法专属性
    　　
　　取2只大鼠，实验前禁食12 h，自由饮水，1只做空白对照，1只按100 g给予龙血竭250 mg，灌胃给药，给药2 h后处死，按“1.5”项下的方法，依法操作。由图1可见组织中的内源性物质不干扰龙血素A和龙血素B的测定。其他组织的HPLC图中龙血素A和龙血素B的出峰时间与肝脏的HPLC图相同。

　　2.5  组织分布
       
　　取大鼠36只（实验前禁食12 h，自由饮水）随机分成6组，每个时间点6只，称重，按100 g大鼠给予龙血竭250 mg，灌胃给药，分别于1、2、3、4、6、10 h处死大鼠，按“1.5”项下的方法，依法操作。结果表明，龙血素A、B在肝脏及肾脏浓度最高，然后依次是肺、脾、心、骨骼肌、脑,见图2、图3。
 
　　3  讨  论
    　　
　　药物的组织分布与药物本身的理化性质，药物与组织的亲和力及各组织器官的血流量等有密切的关系，因而在组织中的分布不相同。大鼠口服龙血竭后，经血液循环而不同程度地分布于心、肝、脾、肺、肾、脑等组织中，在外周组织分布较少，这与［2，3］报道龙血竭中的主要成分为黄酮类化合物,其在冠心病、脑梗死、心肌缺血、脑缺血损伤的保护作等方面有显著疗效相吻合。

【文献】
  　　［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部) S ］. 北京: 化学出版社,2000: 110.

　　［2］刘忠和.复方血竭胶囊对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤的拮抗作用［J］.武汉大学学报：医学版，2005,26(6)：174-177.

　　［3］方伟蓉,李运曼,邓嘉元.龙血竭总黄酮对动物心肌缺血的保护作用［J］.临床药与治疗学，2005,10(9)：1020-1024.

　　［4］周 晔，金描真，易军，等.含中药龙血竭的血清处理方法研究［J］.广东药学院学报，2007，23(2)：151-153.