HPLC-ELSD测定心肌康颗粒中黄芪甲苷的含量

【摘要】  目的 建立高效液相-蒸发光散射检测法测定心肌康颗粒中黄芪甲苷的含量。方法 采用色谱柱：Kromasil ODS C18（5μm，150mm×4.6mm），流动相：乙腈-水（32：68），流速：2.6ml/min。结果 黄芪甲苷在1.8792～18.7920μg之间呈良好的线性关系，回收率为96.7%（RSD=1.68%）。结论 方法简便，结果准确，重现性好，可作为该制剂的质量控制指标。

【关键词】  黄芪甲苷；高效液相色谱；蒸发光散射检测法

    【Abstract】  Objective  To establish a method for the determination of astragaloside IV in Xinjikang granules by high performance liquid chromatography with evaporative light scattering detection （HPLC-ELSD）.Methods  The determination was carried out on a Kromasil ODS C18（150mm×4.6mm，5μm）with mobile phase of acetonitrile-water（32:68）. The flow rate was 2.6ml/min.Results  There was a good linear relationship in the range of 1.8792～18.7920μg .The average recovery was 96.7% with RSD1.68%.Conelusion  The method is simple, highly repeatable and accurate,and it can be used to control the quality of the preparation.

    【Key words】  astragaloside IV;HPLC; ELSD

    心肌康颗粒由黄芪、当归、丹参、红花等中药组成，具有益气养阴，活血解毒的功效。方中黄芪具有补气固表，利尿托毒，排脓，敛疮生肌等功能［1］，而黄芪甲苷为黄芪主要有效成分，因而能够反映心肌康颗粒的主要作用。原标准其含量测定采用薄层色谱法测定，方法重现性差，测定结果不准确。本文《药典》2005年版一部及相关，建立了心肌康颗粒中黄芪甲苷含量测定的HPLC-ELSD法。结果显示本法准确、可靠、重复性好，可用于该产品的质量控制。

    1  仪器与试剂

    1.1  仪器  Agilent 1100高效液相色谱仪；Alltech 2000型蒸发光散射检测器（ELSD）。

    1.2  试药  黄芪甲苷对照品：中国药品生物制品检定所，批号：0781-200311（供含量控制用）。甲醇、乙腈为色谱用试剂，其他试剂均为分析纯；水为重蒸水；心肌康颗粒（青岛国风药业股份有限公司提供）。

    2  方法与结果

    2.1  色谱条件及系统适应性检测条件  色谱柱：Kromasil ODS C18，（5μm，150mm×4.6mm）；流动相：乙腈-水（32：68）；柱温：40℃；流速：1.0ml/min；ELSD检测器漂移管温度：105℃，雾化气体为压缩空气，流速：2.6ml/min；理论板数按黄芪甲苷峰应不低于4000。色谱图见图1、图2。

    2.2  溶液的制备

    2.2.1  对照品溶液的制备  精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每毫升中含0.5mg的溶液，即得。

    2.2.2  供试品溶液的制备  取装量差异项下的本品5g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇100ml回流提取4h，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取4次，每次20ml,合并正丁醇液，浓缩，用1%氢氧化钠溶液洗涤2次，每次20ml，弃去氢氧化钠溶液，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20ml,弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得［3］。

    2.3  线性关系考察  精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇配制成每毫升含黄芪甲苷0.9396mg的溶液，分别精密量取1、2、4、6、7ml至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，稀释成浓度为0.09396，0.18792，0.37584，0.56376，0.65772mg/ml的溶液，分别精密吸取20μl，注入高效液相色谱仪，依法测定，以黄芪甲苷峰面积常用对数值为纵坐标Y，浓度常用对数值为横坐标X，进行线性回归，得回归方程：

    LgA=1.6518LgC+6.8322 r=0.9998。  

    结果表明黄芪甲苷在1.8792～18.7920μg之间呈良好的线性关系。

    2.4  重复性试验  精密称取同一供试品5份，按“2.2.2”项下制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样10μl,测得峰面积值，黄芪甲苷含量平均值为0.587mg/g，RSD=0.53%。

    2.5  稳定性试验    精密称取供试品，按“2.2.2”项下制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液20μl，在0、1、12、24、48、72h内测定，共6次，测得黄芪甲苷峰面积积分值的平均值为2883506，其RSD=1.26%。结果表明，本方法的供试品溶液在3天内稳定。

    2.6  回收率试验  采用加样回收法，精密称取已知含量的心肌康颗粒（批号：070101）适量，分别精密加入浓度为0.5064mg/ml的黄芪甲苷对照品溶液2ml，按“2.2.2”项下提取，测定，计算回收率，所得回收率为96.7%，RSD=1.68%。结果见表1。表1  回收率试验结果

    2.7  样品含量测定    取不同批号的心肌康颗粒，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下，精密吸取对照品溶液10、20μl，供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算。样品含量测定结果见表2。

    3  讨论

    因黄芪甲苷紫外吸收较差，是末端吸收，若用紫外检测器检测，则其灵敏度低，干扰较大，重现性较差，尤其复方制剂，测定其含量更加困难，因此，此方表2  样品含量测定面的报道较少，一般采用薄层扫描法，而薄层扫描法的稳定性和重现性较差，且操作繁琐。近几年来，HPLC-ELSD法测定黄芪甲苷含量的有报道，其灵敏度、稳定性及重现性均能符合含量测定的要求。本试验即了文献中的条件，考察了蒸发光检测器的漂移管温度和雾化器气体流量对黄芪甲苷的响应值的影响，通过分别逐渐改变漂移管温度和雾化器气体流量，记录峰面积与信噪比的变化，选择了最优的温度和载气的流速［2］。

【参考文献】
  1 国家药典委员会.中华人民共和国药典，2005年版一部.北京：化学出版社，2005，212-213.

2 鄢立新.不同厂家黄芪注射液中黄芪甲苷的含量考察.中成药，2004，26（8）：626-628.

3 陈岳蓉.HPLC-ELSD测定芪鹿益肾片中黄芪甲苷的含量.中成药，2004，26（8）：629-631.