细菌的消毒防腐剂耐药基因研究进展

【摘要】  消毒防腐剂的耐药性已经越来越受到人们的重视，消毒防腐剂与抗生素之间存在的交叉耐药性值得关注。现发现细菌对季胺类和双胍类等消毒防腐剂的耐药性与基因有关。本文对季胺类和重金属等消毒防腐剂耐药基因作一综述。

【关键词】  细菌； 消毒防腐剂； 耐药性； 基因

    ABSTRACT  Antiseptic resistance has arisen more and more attention, and the cross resistance between antiseptics and antibiotics is a great problem we focus on. Now it is shown that the bacterial resistant to antiseptics such as quaternaryammonium compounds (QACs) and chlorine?releasing agents (CRAs) has relationship with genes. The following article is a review for the progress on the antiseptic resistance gene such as qac and merA.

    KEY WORDS  Bacteria;  Antiseptics;  Drug resistance;  Gene

    消毒防腐剂在生活中的应用和已有几个世纪。从经验性地用铜和银打造的容器来储存饮用水，用醋和蜂蜜清洗伤口，用香料保存鱼和肉，到用碘酒作为伤口消毒剂，在产科中应用含氯水溶液，将苯酚作为伤口敷料以及在外科中作为抗菌剂，和将二价汞离子用作杀芽孢剂，整个消毒防腐剂都处在不断的发展之中。20世纪初人类又进一步开发了双胍类(CRAs)和季胺类消毒剂(quaternaryammonium compounds，QACs)。到了20世纪40年代，常用的消毒防腐剂已有酚类化合物、有机汞、双胍类消毒剂、季胺类消毒剂、碘及其复合物、乙醇、甲醛、过氧化氢、银化合物、染料(如吖啶、三苯甲烷)和两性表面活性剂。直到目前，这些消毒剂中的大多数仍在广泛地使用［1］。尽管消毒防腐剂一直在更新换代之中，但是在其广泛的选择压力下，细菌仍然渐渐产生了耐药性。因此，又一新的挑战已经摆在医务人员面前。现已发现，细菌对季胺类、双胍类以及重金属等消毒防腐剂的耐药与细菌本身的耐药基因有关。本文对细菌的消毒防腐剂耐药基因研究进展综述如下。

    1  季胺类消毒剂耐药基因(qac)

    细菌的季胺类消毒剂耐药基因首先从葡萄球菌属中分离得到。因其编码的蛋白介导对季胺类消毒剂耐药，从而命名来源于此。目前该类消毒剂耐药基因有qacA、qacB、qacC、qacG、qacH、qacF、qacJ、qacE和qacEΔ1。

    1.1  qacA/B

    qacA  多重耐药基因qacA首先在20世纪80年代从多重耐药的携带β?内酰胺酶和金属离子耐药基因的质粒pSK5中分离得到，随后英国和澳大利亚也在金葡菌和凝固酶阴性葡萄球菌中发现携带qacA基因的pSK1家族质粒和pSA1379质粒的流行［2，3］，之后在细菌的染色体上也发现qacA基因的存在［4］。Rouch等［5］研究表明，qacA基因与四环素耐药基因tet和糖转运体基因有高度的同源性。    核酸序列分析表明，qacA基因编码514个氨基酸的多重耐药Mr55017外排蛋白(QacA)。 该蛋白含有14个α?螺旋的跨膜片段(transmembrane segments，TMS)，属于主要易化子超家族(the major facilitator superfamily，MFS)，依赖质子泵动力把菌体吸收的药物排到体外，介导对30多种结构不同的有机化合物包括单价阳离子化合物(如季胺类化合物和染料)和二价阳离子化合物(如联脒和丙脒腙)耐药［6］。经流式细胞仪检测，发现单价和二价阳离子化合物作用在QacA蛋白不同靶位上［7］。另有研究表明，其中第10个α?螺旋的跨膜片段是QacA蛋白袋状结构域的酶作用底物完整的结合位点，其中323?天冬氨酸残基和319?甲硫氨酸残基是二价阳离子化合物的直接结合位点。313?甘氨酸残基被认为在底物转运过程中起了非常重要的作用。通过诱变试验表明，多重耐药QacA蛋白的袋状结构域作用位点极易发生适应和突变［8］。

    现在公认，作为qacA的上游基因qacR所编码的蛋白可抑制qacA转录。该蛋白属于TetR/CamR转录调控家族，是有188个氨基酸，分子量为22.8ku的二聚体。TetR/CamR家族成员具有相似的三螺旋N端DNA结合结构域和反向的C端结构域，这些结构特点能结合特异蛋白形成复合物，而且大多数TetR/CamR家族成员结合由0～15bp的DNA序列编码二聚体调控子。QacR能在qacA启动子区结合一段较长的序列(IR1，包括28bp)，其覆盖的范围包括qacA的转录起始位点［9］。QacR与IR1以两个二聚体形式结合，并且QacR可能作为抑制因子与IR1结合形成DNA?蛋白复合物，阻止RNA聚合酶?启动子复合物往前移动生成RNA，而不是阻断RNA聚合酶与启动子的结合［9～11］。QacR蛋白由很多结构不相似的单价和二价亲脂性阳离子化合物诱导产生，这些化合物同时也是QacA外排泵酶的作用底物，如果这些化合物的其中之一结合到QacR蛋白任何一个二聚体上，将导致QacR蛋白由线状到螺旋状转变，最终导致蛋白内部的92?和93?酪氨酸残基排到蛋白外面，形成药物结合袋状结构域。这些重要的构像变化将导致螺旋α5的一次延伸，并促使螺旋α6在DNA结合区域易位。螺旋α6与螺旋α1的DNA结合区域有很多复杂的相互作用关系，它的活动可导致DNA结构域结合的药物亚基发生平移和旋转，分别为9.1?和36.7°；游离的药物结合亚基仅发生很小的平移和旋转，分别为3.9?和18.3°。这些构像变化的结果是使得DNA识别的螺旋中心距离变大了9?，最终导致该结构不再结合到IR1的位点上去，使得qacA基因开始转录［12］。

    qacB  早在20世纪50年代，国外学者就已经从澳大利亚的一家临床分离的金葡菌中提到携带qacB基因的质粒pSK156，这是最早分离到的已知编码外排泵蛋白的质粒［8］。此后，80年代时又在金属离子高度耐药的质粒pSK23中也发现存在qacB［13］。基因测序和诱变试验研究表明，与qacA基因相比，两者之间仅仅是7个碱基和第十个跨膜片段323位的氨基酸不同，qacA为天冬氨酸，qacB为丙氨酸，因此不能用PCR和Southern blot的检测方法对它们进行鉴别。这种差异被认为是由于临床上长期应用二价化疗药物而诱导形成的。现在发现，与QacA不同的是，QacB仅对单价阳离子化合物耐药，对少数的二价阳离子化合物呈低度耐药［8］。

    1.2  qacC

    qacC基因又名qacD、ebr或smr，可从金葡菌小质粒和大质粒如2.4kb的pSK89、pSK108和47.8kb的pSK41中分离得到［13］；在凝固酶阴性葡萄球菌的结合型质粒PNVH99中也发现它的存在［14］。后来从食品中分离得到的葡萄球菌经核酸测序证明，qacC与smr仅有一个核苷酸的不同。qacC基因编码的蛋白含有107个氨基酸，属于原核多重耐药家族，这个家族中还包括大肠埃希菌编码蛋白Ebr和革兰阴性杆菌的整合子编码蛋白QacE。该家族的蛋白均有四个跨膜片段，它们依靠质子泵的动力对季胺类化合物和溴化己啶等消毒剂耐药［15］。Paulsen等进一步研究表明，QacC蛋白四个跨膜部分均为α螺旋，四个部分分别由膜外周质的两个区域和膜内的一个区域分隔开来(图1)。通过定向诱导试验发现，用具有相同侧链的甘氨酸和丙氨酸取代QacC蛋白的保守残基31?脯氨酸、59?酪氨酸和62?色氨酸，能明显地降低对乙啡啶和甲基玫瑰苯胺的耐药水平。以上现象表明，这些氨基酸应该处在酶特异性结合位点的边缘。而且59?酪氨酸和62?色氨酸的替换几乎能降低对绝大多数消毒剂的耐药水平， 因此59?酪氨酸和62?色氨酸在酶结合位点起了非

    图1    QacC蛋白模型图常重要的作用［16］。

    1.3  qacG

    qacG基因是1999年从具有2.3kb碱基的质粒pST94中分离得到的。该基因编码的蛋白QacG有107个氨基酸，与Smr、QacE和EmrE的同源性分别是69.2%、45%和41%，属于小的多重耐药家族(the small multidrug resistance family，SMR)，其耐药机制也是依赖质子的外排泵。与Smr蛋白不同的是，QacG蛋白的第33号氨基酸被分散地贯穿于整个蛋白，而Smr蛋白仅处在第二个α螺旋内。与Smr蛋白相同的是，QacG蛋白的疏水性氨基酸和Smr疏水性氨基酸处于相同的位置，具有同样的蛋白折叠结构。这两个蛋白均有两个保守区域，分别是第38号氨基酸到47号氨基酸和52号氨基酸到71号氨基酸，这两个区域分别在Smr蛋白结构模型中第二个跨膜片段的羧基末端和第三个跨膜片段的氨基末端上。多重氨基酸序列对比研究表明，小的多重耐药家族成员拥有许多的保守序列。在QacG蛋白中，大多数残基被认为是保守的，但是有两个例外：9?丙氨酸被替换为丝氨酸和32?丝氨酸被替换为苏氨酸。与Smr蛋白相比，QacG蛋白中大约一半的氨基酸替换被认为是保守的，包括疏水氨基酸的替换，如亮氨基酸?异亮氨酰基、缬氨酸?异亮氨酸和苯丙氨酸?异亮氨酸。总之，与Smr蛋白相比，它的33个氨基酸替换并没有使它的耐药谱发生太大的变化。两者均对苯扎氯铵(benzalkonium chloride，BC)耐药，但是QacG却对吖啶变得敏感，而且对磷酸三苯酯、罗丹明6G、二氨基吖啶、盐酸四环素和联二?n?甲基吡啶(MV)始终保持敏感［17］。

    1.4  qacH

    1998年，Heir等从腐生葡萄球菌中分离得到一个2.4kb的质粒p2H6，其中含qacH基因。核酸测序结果表明，完整的质粒p2H6有一个开放读码框负责编码含107个氨基酸的蛋白，并与小的多重耐药家族蛋白有高度同源性。进一步作氨基酸测序表明，QacH与Smr、QacG分别有78%和70%的同源性。与Smr和QacG不同的是，QacH对二氨基吖啶呈低水平耐药，对溴化乙啡啶高度耐药。将qacH基因克隆到与qac相同的质粒上作进一步研究，结果表明，qacH基因的启动子也是自身内在的基因。由此可见，QacH与Smr、QacG一样，都有广泛的耐药谱。经荧光素标记法显示，QacH对溴乙啡啶高度耐药也是质子泵所介导的。定向诱变替换试验表明，以24?谷氨酰胺替换24?天冬氨酸并不能在耐药特征上产生很大的改变。同时，在p2H6质粒上还有另外一个开放读码框来编码一个与滚环复制蛋白类似的未知蛋白［18］。

    1.5  qacJ

    qacJ基因是Bjorland等2003年在挪威从马身上的金葡菌分离质粒pNVH01中得到的。同时，在中间葡萄球菌(S.intermedius)和模仿葡萄球菌(S.simulans)上也发现存在质粒pNVH01。pNVH01质粒拥有2650bp碱基，是环状DNA复制机制的pC194质粒家族一员。Bjorland等对qacJ作核酸测序，再与小的多重耐药家族蛋白比较，发现它们有较高的同源性，并据此认为QacJ蛋白也属于小的多重耐药家族。该基因编码的蛋白有107个氨基酸和4个跨膜片段。与Smr相比，QacJ对苯扎氯铵的耐药增强，但对溴化十六烷基三甲铵(cetyltrimethylammoniumbromide，CTAB)敏感度一样。以上结果表明，酶作用底物的改变系由单个氨基酸改变所致，而不是因为qacJ基因转录时发生突变引起。经与QacG、QacH相比，发现QacG、QacH对苯扎氯铵和溴化十六烷基三甲铵的耐药性都比QacJ高［19］。

    1.6  qacF

    1998年，Ploy等从临床标本中分离到对多种抗生素耐药的产气肠杆菌BM2688，经测定发现该细菌携带pIP833质粒。该质粒携带I类整合子(class1 integron)，它包含有两个基因(qacEΔ1和sul1)和四个基因盒［aac(6′)?Ib、qacF、cmlA2和oxa?9］。两个基因中，qacEΔ1介导对消毒防腐剂耐药，而sul1介导对磺胺类抗菌药耐药；四个基因盒中，aac(6′)?Ib介导对氨基糖苷类抗生素耐药，cmlA2基因与氯霉素耐药基因cmlA1有84%同源性，oxa?9基因由于缺少启动子在该整合子中并不表达。qacF基因盒有345个核苷酸的开放读码框，它在115号核苷酸上有一个未知的GTG启动子以7bp与核糖体结合位点结合。qacF和qacE基因有67.8%的同源性，它编码含110个氨基酸的蛋白。与qacE相比，两者在末端有很大的不同，特别是3′末端。qacF有60个碱基处在下游，而qacE却与141个碱基相连。qacF下游的60个碱基与catB3有88.3%同源性。为研究qacF的表型耐药程度，经质粒pUC18转导，克隆到大肠埃希菌JM83和JM83/pAT672中，经测定MIC，表明它对季胺类消毒剂是耐药的。比较发现，大肠埃希菌编码的QacF蛋白与QacE、QacC和Ebr分别有75%、37.6%和70.1%的同源性［20］。

    1.7  qacE和qacEΔ1

    qacE、qacEΔ1从质粒R751上的Ⅰ类整合子中分离得到。该质粒最先从肺炎克雷伯菌中分离。核酸测序分析表明，其DNA整合酶基因的3′端有3个开放读码框(ORF1、ORF4和ORF5)，并且ORF1的100个编码子有94个与ORF4相同。它们都与QacC有高度同源性。Paulsen等把ORF1命名为qacE，ORF4命名为qacEΔ1，并且从表型耐药分析qacE对消毒剂的耐药谱与qacC相似，qacEΔ1对这些消毒剂呈较低水平的耐药。因此，qacEΔ1可能是由于携带磺胺(sulI)耐药基因DNA片断插入到ORF1之中进化而来，其最终导致编码的蛋白比ORF1白蛋白少了16?氨基酸的羧基末端。荧光试验表明，QacE的耐药也是质子泵介导的。氨基酸测序结果表明QacE也属于小的多重耐药家族蛋白，并有四个跨膜片段。两者均对季铵盐类消毒剂(如苯扎溴铵、苯扎氯铵和溴化米芬)、双胍类化合物(如氯己定)、腙类化合物和染料耐药。QacEΔ1对季铵盐类消毒剂和染料的耐药水平低于QacE。进一步研究表明，与QacE相比，这些差异是由于QacEΔ1蛋白失去了第四个跨膜片段和羧基末端的高度保守残基所造成的。ORF5目前功能尚不明确［21］。

    目前外排泵主要分为以下五个家族：小的多重耐药家族(SMR)、主要易化子超家族(MFS)、ATP?结合盒家族(the ATP?binding cassette family，ABC)、抗小结分裂家族(the resistance?nodulation?division family，RND)以及多种药物和毒性化合物外排家族(the multidrug and toxic compound extrusion family，MATE)。葡萄球菌属中的消毒剂外排体主要属于小的多重耐药家族和主要易化子超家族，包括QacA/B(MFS)、Smr(SMR)、QacG(SMR)、QacH(SMR)、QacJ(SMR)、QacEΔ1(SMR)和NorA(MFS)。Smr和QacEΔ1同时也在粪肠球菌中被检测到。这些基因除了norA存在于金葡菌的染色体中之外，其它都是由质粒介导的，其中qacA/B、smr、qacΔ1在临床分离的金葡菌中非常普遍，特别在消毒剂耐药的金葡菌中qacA/B和smr更是占绝对优势［22］。

    季铵类消毒剂耐药基因从发现开始到目前国内外学者均已做了大量的流行病调查，1999年Noguchi等［23］在日本调查研究发现，MRSA中qacA/B和qacC检出率分别是14%(10/71)和28%(20/71)。2001年Mayera等［24］研究发现金葡萄菌中qacA/B检出率为42%(210/497)，其中MRSA占63%(186/297)、MSSA占12%(24/200)；qacC的检出率是5.8%(29/497)，其中MRSA占6.4%(19/297)、MSSA占5%(10/200)。2005年Sheldon等［25］调查发现MRSA中qacA/B和qacC检出率分别48%(198/413)和3%(14/413)。2005年黄支密等［26］在20株MRSA中均检出qacA基因的存在，检出率为100%(20/20)。2007年王华丽等［27］发现，MRSA中的qacA基因检出率为5%(4/84)。2005年张金艳等在36株鲍曼不动杆菌中共检出30株携带qacEΔ1消毒剂耐药基因，检出率为83%；Stickler在103株阴沟肠杆菌、弗氏柠檬酸杆菌、铜绿假单胞菌和嗜麦芽寡养单胞菌中的qacEΔ1检出率为10%，并且这些细菌均对复方磺胺甲口恶唑(SMZ/TMP)耐药［28，29］。尽管季铵类消毒剂耐药泵已在金葡菌中广泛流行，但它到底是否造成了消毒效果的降低仍不能确定。

    2  编码主动外排泵的其它耐药基因

    2.1  norA和bmr

    norA基因首先从金葡菌中分离得到，后来在枯草芽孢杆菌中也发现该耐药基因的流行。研究表明，该基因有多个基因座位，它存在于细菌染色体中，而不是由质粒介导，但有研究表明，某些质粒的存在可以使得norA表达增加，而且norA可以被它的底物诱导产生。编码的蛋白NorA作为主动外排转运体，不仅表现出对氟喹诺酮类抗生素耐药，而且对其它类抗生素和亲脂或单价阳离子化合物如十六烷基三甲基溴化铵、菲啶溴红、苯扎氯铵和吖啶黄也存在耐药现象。它们的MIC分别是诺氟沙星1.6～79.4μg/ml，诺氟沙星+利血平0.4～6.3μg/ml，吖啶黄6.3～25μg/ml，苯扎氯铵0.8～3.1μg/ml，十六烷基三甲基溴化铵0.4～12.5μg/ml，菲啶溴红6.3～50μg/ml，菲啶溴红+利血平1.6～6.3μg/ml，四苯膦17.7～250μg/ml［30］。Neyfakh的研究表明，NorA和Bmr两者介导的耐药均可以被利血平逆转［31］。

    与norA基因一样，bmr基因存在于枯草芽孢杆菌的染色体中，它所编码的蛋白由12个未知的跨膜区域组成。携带bmr基因的细菌对多种结构完全不同的化合物存在耐药现象，如菲啶溴红、罗丹明、四苯膦、博罗霉素、氯霉素、吖啶氮蒽和诺氟沙星。经氨基酸序列测定表明，Bmr蛋白与NorA蛋白有44%的同源性［31］。

    2.2  mdrL和orfA

    mdrL、orfA基因是1999年Huillet等在研究产单核细胞李斯特菌的溶细胞素基因hly时发现的。这两个基因存在于转座子Tn917侧翼区，mdrL位于orfA的上游。orfA是mdrL的抑制子，负责编码一个含176个氨基酸的未知蛋白，与枯草芽孢杆菌YfiO蛋白有28%同源性；mdrL负责编码一个含398个氨基酸的未知蛋白，这种蛋白与枯草芽孢杆菌Bmr和Blt蛋白(两者均为多重耐药外排泵家族)有21%～24%同源性。携带mdrL和orfA基因的细菌对大环内酯类抗生素、头孢噻肟、重金属和吖啶黄等耐药［32，33］。

    国外学者从环境和食品中分离得到97株携带mdrL、orfA基因的产单核细胞李斯特菌，它们均对苯扎氯铵和十六烷基三甲基溴化铵呈高度耐药。进一步做噬菌体实验发现，细菌并没有对季胺类化合物变得敏感，因此携带mdrL基因细菌的耐药并不是由质粒介导［34］。通过PCR扩增和Southern blot杂交试验发现mdrL和orfA基因与金葡菌的qacA和smr基因的同源性很低［33］。Romanova等研究发现，苯扎氯铵的存在可以使mdrL基因表达增加，且用利血平不能抑制外排泵表达［35］。

    3  消毒防腐剂的其它耐药基因

    3.1  merA

    merA基因编码二价汞离子还原酶，携带该基因的细菌专一性地对汞离子耐药。该基因广泛分布于革兰阳性和阴性细菌体内，可以在革兰阳性和阴性菌体之间相互转导，并且经常与抗生素耐药基因连锁于同一质粒如pSN254上。Tung等将从健康儿童口腔中分离得到的革兰阴性细菌用100～200mmol的汞离子溶液反复诱导，然后通过DNA?DNA杂交和PCR技术检测merA基因的存在，结果表明，在8个革兰阴性菌菌属中检测到merA基因，它们分别是柠檬酸杆菌属、奈瑟菌属、不动杆菌属、埃希杆菌属、肠道细菌属、克雷伯菌属、假单胞菌属和粘质沙雷菌。经过对不动杆菌和大肠埃希菌中分离到的1000bp基因进行测序，发现它们与金葡菌的merA基因的同源性高达95%～96%；与枯草芽胞杆菌的merA基因的同源性也高达89%～97%［36］。

    3.2  银离子耐药基因(sil)

    含银的物品被广泛地应用在医学中，如在牙科中用作葡萄糖氧化酶因子(microcidal agents)，在烧伤科中磺胺嘧啶银、含银的尼龙纱布常被用作抗菌剂。除此之外，含银的导管或导管表面涂抹银离子常能缓慢释放发挥抗菌活性。1975年McHugh等发现鼠伤寒沙门菌对银产生耐药［37］。进一步的研究表明，这种对银离子的耐药是由于鼠伤寒沙门菌产生了与一般外排泵有很大不同的一种外排泵。该耐药决定簇受两个膜信号传感器控制，并由silS和silR两个基因同时共同转录而成，它们负责编码一个位于胞质内的银结合蛋白(SilE)。从表面上看，这种蛋白有两个正向平行外排泵：一个P?型三磷酸腺苷酶(ATPase)和一个是三层膜的电位依赖性的阳离子多肽和质子反向转运体［38］。

    3.3  二氯苯氧氯酚(Triclosan)耐药基因(fabI)

    二氯苯氧氯酚是漱口药、抗痤疮药物、除臭剂和牙膏中的关键性抗菌成分，常以2%的浓度加于肥皂、霜剂和溶液中用作手和伤口消毒以及手术、注射或静脉穿刺前的皮肤消毒，其抗菌机制是阻断细菌脂肪酸的生物合成。其抗菌谱广泛，包括金葡菌、耻垢分枝杆菌、结核分枝杆菌、铜绿假单胞菌、流感嗜血菌和枯草芽孢杆菌。英国学者发现了对二氯苯氧氯酚耐药的大肠埃希菌，其耐药机制是编码烯醇基载体蛋白的脂肪酸生物合成还原酶的基因(fabI)发生了变异，产生了新的靶点，但确切机制尚不清楚［22］。

    4  小结

    早在1951年，Lowbury就观察到铜绿假单胞菌对季胺类化合物有耐受现象。20世纪60年代起又发现许多菌株逐渐对季胺盐类和双胍类消毒剂如氯己啶产生了耐药。1991年，Retyi发现大肠埃希菌对含氯消毒剂具有了耐药性［39］；1995年国外学者观察到大肠埃希菌对甲醛耐药，并且认为这种耐药是由耐药基因介导的。这些基因编码产生一种降解甲醛的酶，但具体机制还不清楚［40］。近年又相继发现细菌对酚类、醇类和碘类消毒剂产生了耐药性，但大多数耐药机制还不是很清楚。

    目前认为，细菌对消毒剂的耐药机制有以下几种［22］：①细菌体内消毒剂作用靶位的改变。与抗生素相比，消毒剂通常作用在多个靶位上，因而不易发生靶位的改变。但二氯苯氧氯酚例外，二氯苯氧氯酚是作用在细菌的脂肪酸生物合成还原酶上，如果编码该蛋白的基因发生突变，将导致细菌对该消毒剂的耐药；②抗渗透能力增强。大多数消毒剂必须在菌体内积聚到一定的浓度才能产生消毒效果，但1999年英国学者发现，经消毒剂作用后，革兰阴性菌的细胞膜和细胞壁发生了改变，或是产生了生物膜，导致渗透性下降；③外排泵的存在。多重耐药泵有着广泛的作用底物，具有外排泵后，细菌可对许多结构不同的消毒剂产生耐药。

    尽管细菌对消毒剂的耐药机制与抗生素相似，但是消毒剂与抗生素之间是否存在交叉耐药一直是我们需要探讨的问题。由上面的综述我们可以知道，携带消毒剂耐药基因norA、bmr、mdrL和orfA的细菌同时对抗生素也存在耐药现象，但是携带季胺类消毒剂耐药基因的细菌却未发现与抗生素存在交叉耐药的现象。革兰阴性杆菌中编码外排泵的抗生素耐药基因与消毒剂存在交叉耐药现象，如阴垢分枝杆菌的LfrA(MFS)、大肠埃希菌的EmrE(SMR)、MdfA和TehA(MFS)、副溶血性弧菌NorM(MFS)、铜绿假单胞菌的AcrAB?TolC(RND)、MexAB?OprM、MexCD?OprJ和MexEF?OprN［22］。因此消毒剂与抗生素交叉耐药的具体机制值得我们大家探讨。

    人们通常在食品中添加一些消毒防腐剂，以便更安全、更长久地保存食品。季胺类化合物由于具有一定的表面活性、无腐蚀且毒性低等优点而被广泛地用于食品保鲜和临床环境的防腐消毒。但随着它的使用，许多国家已发现金葡菌和凝固酶阴性葡萄球菌对季胺类化合物耐药，更重要是，在食品业和食品加中发现到对季胺类化合物耐药的金葡菌、凝固酶阴性葡萄球菌和产单核细胞李斯特菌。因此，为了防止耐药菌的流行，有必要对耐药菌进行调查和监测。以上结果也提示，对消毒防腐剂的耐药不仅在革兰阳性菌中已经流行，更重要的是在革兰阴性菌中也已经存在了，这一点应引起我们的重视。

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