不同株人肝癌细胞对化疗药物杀伤作用的敏感性分析

                    作者：刘晓波 蔡美英 阚和平 魏大鹏 王霞

【摘要】  目的 研究化疗药物对不同株人肝癌细胞杀伤作用的敏感性。方法 采用MTT比色分析法测定多柔比星(DXRB)或米托蒽醌(DHAQ)对体外培养的4株人肝癌细胞的细胞毒作用。结果 DXRB对SMMC?7721细胞的杀伤作用最强，QJY次之，HEPG?2和Alexander不敏感；DHAQ对QJY细胞的杀伤作用最强，Alexander和SMMC?7721次之，同样HEPG?2不敏感。结论不同株人肝癌细胞对同一化疗药物可具有不同的敏感性。

【关键词】  化疗药物； 人肝癌细胞； 细胞毒作用

    ABSTRACT  Objective  To investigate susceptibilities of four human hepatoma cell lines to chemotherapeutics.  Methods  MTT colorimetric assay was used to test in vitro cytotoxicities of the chemotherapeutics against human hepatoma cell lines.  Results  As for susceptibilities to doxorubicin (DXRB), SMMC?7721 cell line was the top, QJY cell line was second, Alexander cell line and HepG?2 cell line were the less. While for susceptibilities to mitoxantrone (DHAQ), QJY cell line was the top, Alexander and SMMC?7721 cell lines were second, HepG2 cell lines was the less.  Conclusion  Different human hepatoma cell lines had different susceptibile to same chemotherapeutics.

    KEY WORDS  Chemotherapeutics;  Human hepatoma cell line;  Cytotoxicity

     我国是原发性肝细胞癌(Hepatocellular carci?noma，HCC)的高发国家，肝癌已占我国肿瘤死亡的第二位［1］。多柔比星(DXRB，doxorubicin)等化疗药物局部化疗尤其是经肝动脉插管化疗已是肝癌非手术的首选方法。临床上肝癌患者化疗有些效果较好，有些较差或者无效，其原因与肝癌的多药耐药性(multidrug resistance，MDR)有关，也可能与不同肝癌患者对化疗药物敏感性差异有关。我们采用4株人肝癌细胞，进行了DXRB或米托蒽醌(mitoxantrone，DHAQ)的体外细胞毒实验，以评价人肝癌不同细胞株对化疗药物的敏感性，现将结果报道如下。

    1  材料与方法

    1.1  药品试剂

    DXRB为浙江海门制药厂产品；DHAQ由四川大学药学院张志荣教授提供；噻唑蓝(MTT)为Fluka公司产品； 二甲基亚砜(DMSO)为AR，广州化学试剂厂产品。

    1.2  细胞株

    4株人肝癌细胞(SMMC?7721、HEPG?2、QJY和Alexander)均为本室保种传代。

    1.3  MTT比色分析法

    参照方法［2］，在96孔板中加入细胞(0.5～1)×104/孔，待细胞贴壁后加入不同浓度的DXRB或DHAQ，于37℃，5% CO2条件下孵育一定时间，加入MTT(用PBS配成浓度5mg/ml，12μl/孔)，继续孵育6～8h，吸弃上清，加入DMSO(150μl/孔)，混匀后于570nm波长处测吸收光度(A570)，按下式杀伤率：

    杀伤率=1-实验孔A570对照孔A570×100%

    2  结果与讨论

    2.1  DXRB杀伤作用与药物浓度、作用时间的关系

    DXRB对SMMC?7721细胞具有较强杀伤作用，且具药物浓度依赖性(Fig.1)，随作用时间延长，杀伤作用增加，表现为药物的半数抑制浓度(IC50)降低(Fig.2)。

    2.2  DXRB对4株人肝癌细胞的杀伤作用

    DXRB与细胞作用72h后，对SMMC?7721细胞杀伤作用最强，对QJY次之，对于HEPG?2和Alexander基本上无杀伤作用(Fig.3)，表明DXRB对不同株肝癌细胞杀伤作用的敏感性不同。

    2.3  DHAQ对4株人肝癌株的杀伤作用

    Fig.1    Dose?dependent cytotoxicity of DXRB to

    SMMC?7721 human hepatoma cells

    after 48 hours co?incubation

    Fig.2    Time course for cytotoxicities of DXRB to

    SMMC?7721 human?hepatoma cells    与人肝癌细胞作用72h后，DHAQ对QJY杀伤作用最强，Alexander次之，SMMC?7721较弱，而HepG?2基本上无杀伤作用(Fig.4)，表明DHAQ对不同株肝癌细胞杀伤作用的敏感性不同。

    2.4  DXRB和DHAQ对4株人肝癌细胞杀伤作用比较

    对于SMMC?7721细胞，DXRB杀伤作用强于DHAQ；对于QJY细胞，DXRB、HDAQ杀伤作用接近；对于Alexander细胞，DHAQ杀伤作用强于DXRB；对于HepG?2细胞，DXRB、DHAQ均无有效杀伤作用(Tab.1)，表明不同株人肝癌细胞对于不同化疗药物杀伤作用的敏感性不同。

    DXRB、DHAQ均为蒽环类化合物，化学结构类似。DXRB是临床上常用广谱抗癌药，是肿瘤化疗方面最重要药物之一。DHAQ是国产二类新药，临床研究中对乳腺癌和白血病等肿瘤抑制作用已得到肯定［3］。肝癌的不同株系对同一种化疗药物敏感性差异很大(Fig.3，Fig.4)，提示在评价某一种化疗药物体外对某一肿瘤的药效时，应选用该种肿瘤的多株细胞来进行实验；也提示在临床用药时，一种化疗药物对同种肿瘤的不同个体疗效可能不同。

【】
  ［1］ 叶胜龙. 肝癌生物的研究进展［J］. 中华肝脏病杂志，1999，7(3)：191～192.

［2］ 刘晓波，马布仁，曾祥元. 多抗甲素对小鼠巨噬细胞功能的影响［J］. 药通报，1994，10(6)：445～448.

［3］ 马云鹏，郑升. 抗肿瘤药米托蒽醌［J］. 国外药学?合成药，生化药，制剂分册，1986，7(6)：324～328.