参归软肝胶囊对脾虚小鼠免疫功能的影响
作者：李艳 路西明 王淑英 王建刚
【摘要】 目的观察参归软肝胶囊（SGR）对脾虚小鼠免疫功能的影响。方法通过腹腔巨噬细胞吞噬实验及淋巴细胞转化实验［使用脾虚型小鼠以刀豆素(ConA)或脂多糖(LPS)作诱导剂，通过体内给药，体外实验的方法］测定SGR对脾虚小鼠非特异性的吞噬细胞功能及特异性的细胞免疫、体液免疫功能的影响。结果给脾虚小鼠灌服受试药，能明显提高其腹腔巨噬细胞的吞噬能力和T、B淋巴细胞增殖反应 (P＜0.05)。结论参归软肝胶囊能提高脾虚小鼠巨噬细胞吞噬能力、细胞免疫及体液免疫的功能。
【关键词】 参归软肝胶囊； 脾虚小鼠； 免疫功能
AbstractObjectiveTo study the effects of SGR capsule on immunity function of spleen-deficient mice.MethodsThe spleen-deficient mice model was induced by ConA and LPS.The engulfing test of abdominal phagocyte and the transform test of lymphocytes were adopted to observe the effects of the capsule on the multiplication rate of T,B lymphocytes in vitro.ResultsAfter fed with medicine, the engulfing of abdominal phagocytic cells and the multiplication rate of T,B lymphocytes were increased markedly(P＜0.05).ConclusionSGR capsule can improve the functions of nonspecific immunity,cellular immunity and humoral immunity of the spleen-deficient mice.
Key wordsSGR capsule; Spleen-deficiency; Immune function
参归软肝胶囊主要由丹参、当归、黄芪、川芎、白芍、郁金组成，有益气、活血养血、疏肝解郁功能。本实验通过腹腔巨噬细胞吞噬功能及淋巴细胞转化实验，观察参归软肝胶囊对脾虚小鼠非特异性的吞噬细胞功能及特异性的细胞免疫、体液免疫功能的影响，为该药的临床应用提供实验依据。
1 材料
1.1 动物 昆明小鼠，河南省实验动物中心提供，医动0002631。
1.2 药物大黄煎剂及参归软肝胶囊均由河南科技大学第一附属制剂室提供；ConA为美国Sigma公司产品；LPS为美国Sigma公司产品；MTT瑞士试剂公司产品；RPMI1640培养基，日本产品；小牛血清，天津生化制品厂生产，批号060312。
1.3 检测仪器 OD-3022酶标仪，国营华乐管厂制；CO2培养箱，日本产；721分光光度计，上海第三分析仪器厂生产。
2 方法
2.1 分组小鼠60只，体重20～22 g，雌雄各半，随机分为6组，每组10只，0.2 ml/10 g·d-1×14,ig。正常对照组0.5% CMC-Na；用大黄煎剂造模为脾虚小鼠，造模小鼠分为模型组，复方鳖甲软肝片组，SGR低、中、高剂量组。模型组0.5%CMC-Na；复方鳖甲软肝片对照组2.7 g·kg-1；SGR低、中、高3剂量组分别为（生药·kg-1）2.5，5.0，7.5 g。
2.2 方法除正常对照组外，其余各组动物均按上述剂量每日灌服大黄煎剂（40 g生药·kg-1），连续10 d，给药组动物于第7 天起按拟定剂量灌服相应受试药，连续14 d。
2.2.1 SGR对腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响［1，2］将小鼠处死，仰卧固定于工作台上，腹部碘伏局部消毒后，注入2 ml的1640培养液冲涮腹腔后，吸出腹腔液，滴0.1 ml液体于干净玻片上，滴加致敏酵母液（按腹腔细胞∶酵母颗粒=1∶10比例），4℃，湿盒内过夜，用1640培养液轻轻冲洗，0.25%戊二醛固定，40倍光学显微镜下，随机计数200个腹腔巨噬细胞（贴壁细胞）中吞噬或吸附3个酵母以上的巨噬细胞数量。
2.2.2 SGR对ConA，LPS诱导脾虚小鼠T、B淋巴细胞增殖反应的影响［1，2］在超净工作台中取小鼠脾脏, 制成脾细胞悬液(2×106·ml-1)， 在96 孔板上每孔加100 μl细胞悬液, 分别加入ConA( 10 mg·ml-1) 和LPS (20 mg·ml-1)100 μl。每个样品设3个重复孔。置37℃，5% CO2培养箱中培养66 h。弃上清, 每孔加入20 μl的 M TT，37℃孵育4 h, 再加入DMSO振荡。采用酶标仪测OD值，λ= 570 nm。
细胞增殖反应率（%）=（实验孔平均OD值/对照孔平均OD值）×100%
3 结果
3.1 对腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响结果见表1。模型组结合致敏酵母3个以上的百分数低于正常对照组（P<0.05），受试药3个剂量组均高于模型组（P<0.05）。
3.2 对ConA，LPS诱导T，B淋巴细胞增殖反应的影响结果见表2。
3.2.1 ConA模型组低于正常对照组（P<0.05），受试药各组高于模型组（P<0.05和P<0.01）。
3.2.2 LPS模型组低于正常对照组（P<0.05），各受试药组均高于模型组（P<0.05）。
表1 SGR胶囊对腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响（略）
与正常对照组比较，△P<0.05；与模型组比较，*P<0.05；n=10
表2 SGR胶囊对ConA,LPS诱导下B淋巴细胞增殖反应的影响（略）
与正常对照组比较，△P<0.05；与模型组比较，*P<0.05,**P<0.01；n=10
4 讨论
西医缺乏成熟有效的肝纤维化药物。故研制高效、低毒抗肝纤维化的新药意义重大。中医治疗肝纤维化、肝硬变成为国内外学者研究热点。中医理论认为，肝纤维化成因多，应从舒肝、活血、祛淤、健脾、扶正补虚等多方面进行治疗，可提高疗效［3］。据此设计的参归软肝胶囊（SGR）主要由丹参、黄芪、川芎、白芍、郁金组成，有益气、活血养血、疏肝等多种功效。其中，人参具有增强机体非特异性抵抗力，提高机体适应性，促进病理过程恢复正常的功能，增强网状内皮系统及白细胞的吞噬功能；当归能显著增强动物腹腔巨噬细胞的吞噬功能，促进非特异性免疫功能；丹参能增加吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数，在支气管哮喘伴肺气肿患者的T淋巴细胞数目增高；黄芪能增加小鼠网状内皮系统吞噬功能［4］。腹腔巨噬细胞吞噬功能实验可观察SGR非特异性免疫功能，SGR对ConA，LPS诱导T，B淋巴细胞增殖反应的影响可观察SGR对特异性免疫功能的影响。给脾虚小鼠分别灌服SGR2.5，5.0，7.5 g生药/kg，观察腹腔巨噬细胞吞噬功能实验和其对ConA，LPS诱导T，B淋巴细胞增殖反应的影响，结果表明：SGR能不同程度的提高其腹腔巨噬细胞的吞噬能力，提高其特异性细胞免疫及体液免疫功能，该结果与中医理论扶正、补虚观点相一致，为SGR临床应用提供实验依据。
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［3］ 姚春甫.抗纤煎剂治疗慢性肝炎、肝纤维化36例临床观察［J］.中西医结合杂志，2007，16(12)：1629.
［4］ 姚 欣，姚希贤，修贺明.活血化淤中药益肝浓缩煎剂对大鼠肝纤维化的作用［J］.世界华人消化杂志，2002,8（5）：56.
