两点法测定宽叶缬草中总缬草素的含量

              作者：陈建伟 武孔云 梁光义 靳凤云 黄勇琪 杨娜 

【摘要】  目的建立测定宽叶缬草中总缬草素含量的测定方法。方法用两点电位滴定法测定。结果该方法过程简单，准确，易普及，测得所采宽叶缬草中总缬草素的含量为1.88%。结论可用两点电位滴定法测定宽叶缬草中总缬草素的含量。

【关键词】  宽叶缬草 总缬草素 电位滴定法 两点法

宽叶缬草Valeriana officinalis L. var. latifolia Miq.是败酱科缬草属(Valeriana)植物缬草的一个变种，在贵州省分布很广，是贵州省民间的常用药，也是贵州省苗药，具有理气、止痛、安神的功效，多用于胃腹胀痛、腰腿痛、跌打损伤、神经衰弱、失眠等症。其化学成分主要有挥发油类、缬草素类、生物碱类、黄酮类等，其中缬草素是其主要成分之一，为此我们对贵州省宽叶缬草中的缬草素含量进行测定，最终建立一种准确的、可操作性强的测定方法。
   
　　目前测定缬草类生药中缬草素的方法有：电位滴定法［1］、双波长薄层扫描法［2］、高效液相色谱法［3］等，其中电位滴定法判断滴定终点不受指示剂颜色的影响，准确，但是传统电位滴定法试验过程复杂，需要参数较多，数据处理繁琐；薄层扫描法和高效液相色谱法需要较高的条件，普及率不高；而两点电位滴定法准确性强，过程简单，设备普及率高，数据处理容易，所以本实验选用两点电位滴定法测定宽叶缬草中总缬草素的含量。

　　1  仪器与试药
   
　　梅特勒-托利多Delta320 pH计；pH-复合电极；磁力搅拌器；宽叶缬草V. officinalis L. var. latifolia Miq.采于贵州岑巩，由贵阳学院武孔云教授鉴定为V. officinalis L. var. latifolia Miq.。所用试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  方法原理

　　2.1.1  缬草素的测定原理缬草素类化合物属于环烯醚萜的三酯类，在过量的氢氧化钠碱性条件下生成3个有机酸钠盐，然后用盐酸液回滴剩余的氢氧化钠，求出药材中总缬草素消耗即可测得到药材中总缬草素的含量。

　　2.1.2  两点法确定滴定终点的方法［4］电位滴定计量点V，可由滴定计量点前或滴定计量点后两组滴定数据（V1,pH1）和（V2，pH2）来确定，报道了用两点法确定酸碱电位滴定的公式为：
   
　　V=［(10Δ  pH-1)/(V110Δ  pH-V2)］×V1V2（1）
   
　　V1，V2是计量点附近两点分别消耗的标准溶液体积，V1，V2必须在终点的同一侧， ΔpH是相应两点的pH值的差，要求ΔpH在0.3以上。可以在计量点前取两点，也可以在计量点后取两点，在计量点后取值时，ΔpH的取值为负。

　　2.2  方法精密称取药材粉末（40目）约10 g置索氏提取器中（同时另取本品粉末测定水分），加入适量的甲醇提取至无色，提取液转移并定容至50 ml的容量瓶中。精密量取样品溶液5 ml置水浴上蒸干，残渣加丙酮40 ml溶解后，精密加入氢氧化钠滴定液（0.01 mol/L）25 ml，置56～59℃水浴中加热水解30 min，用盐酸滴定液（0.01 mol/L）滴定，以酸度计指示电位变化，在计量点前记录两组数据（V1，pH1）和（V2，pH2），然后根据公式（1）可以出到达计量点时所消耗盐酸的体积。并用空白实验［精密量取5 ml置水浴上蒸干，残渣加丙酮40 ml使溶解，按照本方法用氢氧化钠滴定］校正滴定结果，按下式计算含量：
   
　　总缬草素（%）=0.01×（25-X1-X0）×422.46×50/［103×5×3×M(1-X)］×100%
   
　　0.01：酸和碱的浓度；X1:回滴所消耗盐酸的体积；X0：空白实验所消耗盐酸的体积；422.46：缬草素的分子量；3：1 mol缬草素经氢氧化钠水解后产生3 mol的有机酸钠；M：取样量；X：水分含量。

　　2.3  线性关系考察精密量取已知含量的样品溶液3，4，5，6，7 ml分别按样品测定方法进行含量测定，以总缬草素的量为纵坐标（Y），所消耗的氢氧化钠滴定液的体积为横坐标（X），进行回归。结果见表1及图1。

　　表1  线性关系结果（略）

　　结果表明，总缬草素含量在11.34～26.46 mg的范围内与所消耗的氢氧化钠滴定液的体积呈良好的线性关系，回归方程为Y=1.418 9X，相关系数为r=0.999 9。

　　图1  线性关系考察图（略）

　　2.4  精密度实验精密量取同一样品溶液5份，每份5 ml，按本方法分别进行含量测定。结果见表2。根据测定结果RSD值为2.00%。

　　表2  精密度实验结果（略）

　　2.5  重复性实验去药材5份，每份约10 g，精密称定，按本方法分别进行含量测定。结果见表3。根据测定结果计算RSD值为1.64%。

　　2.6  宽叶缬草药材中缬草素的含量测定按既定缬草素含量测定方法，对在贵州岑巩所采宽叶缬草药材中的总缬草素进行含量测定。测得当地所产宽叶缬草中总缬草素的含量为1.88%。

　　表3  重复性实验结果（略）

　　3  讨论
   
　　用两点电位滴定法测定宽叶缬草中总缬草素的含量精密度高，重复性好，过程简单，数据容易处理，能作为测定宽叶缬草中总缬草素含量的一种方法。
   
　　缬草三酯在过量的氢氧化钠的条件下生成3个有机酸钠盐，过量的氢氧化钠被盐酸中和后，3个有机酸钠盐水解呈碱性，所以用传统的电位滴定法测定时突跃点不是很明显，两点电位滴定法测定不需要突跃点，在计量点前任取两组数据就可以求出计量点。
   
　　缬草素只是宽叶缬草中环烯醚萜三酯类化合物的一种，含量比较高，在本实验中作为总缬草素类化合物的代表。

【】
  　　［1］ 肖 丹，管咏梅，边燕红．蜘蛛香药材中总缬草素的含量测定［J］．时珍国医国药，2006，17（2）：198．

　　［2］ 崔亚君，穆赫塔尔·亚森，岳松健，等．七种缬草属植物中缬草三酯和乙酰缬草三酯含量考察［J］．西北药学杂志，1999，14（4）：152．

　　［3］ 黄仁泉，张 立，杨建丽．不同种缬草中缬草三酯和缬草烯酸类成分的HPLC分析和比较［J］．中草药，2002，33（11）：1000．

　　［4］ 冯俊贤，李素娟，郄文娟，等． 两点电位滴定法及其应用［J］．分析化学，2002，30（3）：337．