玉液汤对胰岛素抵抗大鼠脂肪细胞因子的影响

                      作者：付雪艳，董琳，张义伟，于福生

【摘要】  　　目的观察玉液汤对胰岛素抵抗大鼠脂肪细胞因子瘦素（Leptin）和肿瘤坏死因子（TNF?α）的影响。方法用高脂饲料复制胰岛素抵抗大鼠动物模型,采用放射性免疫法，观察玉液汤对脂肪细胞因子Leptin，TNF?α的影响。结果玉液汤可明显改善Leptin，TNF?α的表达。结论玉液汤通过改善Leptin，TNF?α的表达，从脂肪细胞因子的角度改善了胰岛素抵抗。

【关键词】  玉液汤 胰岛素抵抗 瘦素 肿瘤坏死因子 α

　　Abstract:ObjectiveTo observe the influence of Yuyetang on the fat cytokines(TNF-α，Leptin) in insulin resistance rats. MethodsThe diabetes model was induced by high fat diet and the TNF?α and leptin were observed by radio immucoassay . ResultsYuyetang could significantly improve the expression of TNF?α and leptin.ConclusionYuye Tang can improve insulin resistance by modulating the expression of TNF－α and lepsin.

　　Key words:Yuyetang；  Insulin resistance；  Leptin;   TNF?α

　　本实验组前期工作证实，玉液汤高剂量组能够明显地改善胰岛素抵抗。本实验在此基础上，观察了玉液汤对胰岛素抵抗大鼠肿瘤坏死因子?α（TNF?α）及瘦素（Leptin）表达的影响，从脂肪细胞因子的角度揭示玉液汤能够有效胰岛素抵抗的作用机制。

　　1  器材与方法

　　1.1  动物   

　　Wistar大鼠，体重（200±20）g，雄性，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。

　　1.2  药材　

　　玉液汤由生山药、生黄芪、知母、生鸡内金、葛根、五味子、天花粉组成，均购于黑龙江省世一堂中药饮片厂，水煎提取浓缩至每毫升含生药0.828 g，置冰箱保存备用。

　　1.3  试剂　

　　肿瘤坏死因子－α放射免疫试剂盒、瘦素放射免疫试剂盒由武汉博士德生物工程有限公司提供；罗格列酮购自人民同泰药店，灌胃时用生理盐水配成混悬液。

　　1.4  仪器

　　TGL-16G台式高速离心机，上海医用分析仪器厂产品；GMJ型全自动放射免疫γ计数器，江苏省医疗研究所产品；MDF-U5OV型低温冰箱，日本三洋产品。

　　1.5 方法

　　随机取10只大鼠为正常对照组。利用高脂饲料复制胰岛素抵抗动物模型，模型复制成功后，将大鼠随机分为4组，分别为模型组、阳性药组、玉液汤高、低剂量组，每组10只。高剂量组按1.35 g/kg生药（低剂量组为其1/2）灌胃给药，给药时间为2周；阳性对照组给罗格列酮，按0.20 g/kg给药；正常对照组、模型组给同体积的生理盐水10 ml/kg。两周后将大鼠处死，摘眼球取血2m1，静置30 min后，4℃离心(3 000 r/min)15 min，吸取上部血清，-20℃保存待测。

　　1.5.1  对TNF-α的影响分别以缓冲液溶解抗TNF-α血清、125I-TNF-α及TNF-α标准品，并依照试剂盒说明加入分离剂后充分混匀，室温放置20 min,4℃；3 500 r/min离心25 min，吸取上清液。在γ计数器上测定cpm值。

　　1.5.2   对Leptin的影响Leptin测定：设立总管、非特异管、标准管和样本管，按说明书依此加入温育液、标准品、样品、125I－Leptin和Leptin抗体，摇匀，4℃放置20 min以上，加入分离试剂，摇匀，室温放置15 min后3 500 r/min离心20 min，吸去上清液，用γ测量仪测定各管沉淀物的cpm，B/Bo%= (B-NSB) /(Bo-NSB)×100%，以各标准管浓度取对数做横坐标，以B/Bo%取对数做纵坐标绘制标准曲线，根据各样本的B/Bo%对数值，各所测样本的浓度。

　　2  结果

　　2.1  对TNF-α的影响实验结果显示模型组TNF-α高于正常对照组，且有极显著性差异。玉液汤组及罗格列酮组与模型组相比均有极显著性差异。罗格列酮组TNF-α与玉液汤低剂量组比较有显著性差异，与高剂量组比较无显著性差异，与正常对照组比较有显著性差异。

　　2.2  对Leptin的影响 模型组Leptin与正常对照组比较有极显著性差异;罗格列酮组Leptin与玉液汤组比较均无统计学意义；罗格列酮组、玉液汤组Leptin与模型组比较有极显著性差异。结果见表1。表1  玉液汤对胰岛素抵抗大鼠TNF-α及Leptin的影响(略)

　　3  讨论

　　在体和离体的研究结果均表明，在脂肪和肌肉组织中，TNF-α可明显抑制胰岛素的作用，导致胰岛素抵抗的发生［1］。在脂肪细胞中，Leptin可抑制胰岛素对葡萄糖转运、糖原合成和脂肪合成等的促进作用；在肝脏，Leptin可降低胰岛素对肝糖原异生的抑制作用；在骨骼肌，Leptin可抑制胰岛素对糖原合成的促进作用；Leptin尚可对胰岛素受体后的信号传递途径产生影响［2］，因此，可以认为，Leptin与胰岛素抵抗的发生密切相关［3］。本实验研究证实玉液汤有改善TNF-α，Leptin表达的作用，因此，可认为玉液汤正是通过改善TNF-α,Leptin的表达来改善胰岛素抵抗的。

【】
  　　［1］Rober Zell,Peter Geck,Karl Werdan,et al.Tnf-αand IL-α inhibit both pyruvate dehydrogenase activity and mitochondrial function in cardiomyocytes:Evidence for primary impairment of mitochondrial function［J］.diabetes,1997,46:265.

　　［2］Fineberg SE,Huang J,Brunelle R,et al .Effect of long-term exposure to insulin lispro on the induction of antibody response in patients with type 1 or type 2 diabetes［J］.Diabetes care,2003,26:89.

　［3］Fineberg NS,Fineberg SE,Anderson JH,et al.Immunologic effects of insulin lispro(Lys(B28),Pro(B29) human insulin) in IDDM and NIDDM patients previously treated with insulin［J］.diabetes,1996,45:1750.