地榆水提液对四种癌细胞生长抑制作用的研究
【摘要】 目的 研究地榆水提液对癌细胞生长的抑制作用。方法细胞形态观察和活细胞计数法研究地榆水提液对人白血病细胞K562，肝癌细胞HepG2，胃癌细胞BGC823，宫颈癌细胞Hela生长的抑制作用。结果地榆水提液可使4种癌细胞形态上发生皱缩、变圆、脱壁、碎裂等变化，生长受到明显抑制，抑制率最高可达85.20%。结论 地榆有确切的抑癌作用，并与中医的气血理论和药物归经理论相一致，再次说明了中医基本理论的博大精深，即便在体外细胞水平上也有良好体现，对实验室手段研究中医药同样有着重要指导意义。
【关键词】 地榆；癌细胞；生长；抑制作用
Abstract：ObjectiveTo investigate the inhibitory effects of the extract of Sanguisorba officinalis L. on human carcinoma cells.MethodsMorphological change observation and live cell accounting were used to investigate the inhibitory effects of Sanguisorba officinalis L. on human chronic myloid leukemia K562 cell,hepatoma HepG2 cell,cervical carcinoma Hela cell and gastic carcinoma BGC823 cell.ResultsGrowth of the four kinds of cells was significantly inhibited by the extract of sanguisorba officinalis L., highest 85.20% and cell morphological changes included shrinkage,roundness,floating and crumbling.ConclusionSanguisorba officinalis L. has reliable carcinoma-inhibiting effects and the effects conform to the “qi” and blood theory and the Meridian-reaching theory of traditional Chinese medicine.
Key words:Sanguisorba officinalis L.；Carcinoma cell; Growth ; Inhibitory effects
笔者在临床上见一癌症病人，经中医中药，取得十分满意的效果，在征得主治医生同意后，将其方中出现频率较高的11种中药制成提取液，进行体外抑癌筛选，发现其中的地榆水提液具有良好作用，现将地榆水提液的研究情况报道如下：
1 器材
1.1 药材地榆生药购于内蒙古中蒙药房。取生药适量，六蒸水洗3遍，烘干，称量；六蒸水浸泡过夜，武火煮沸，文火煎煮40 min，纱布过滤，滤渣加适量六蒸水置115℃高压蒸气锅内30 min，纱布过滤；合并两次滤液，2℃冰箱静置72 h，高、中、低速滤纸，0.45 μm，0.22 μm微孔滤膜逐级过滤；滤液蒸发浓缩，灭菌，4℃保存，使用时以培养液稀释至所需质量分数（以生药）。
1.2 器材与试剂
倒置相差显微镜（Nikon eclipse TE2000-U），超净台（苏州净化设备有限公司），CO2培养箱（GALAXY &BINDER），24孔培养板（BIOFIL），RPMI1640，高糖DMEM（GIBCO），胎牛血清（TBD）。
1.3 癌细胞系人白血病细胞系K562，肝癌细胞系HepG2，胃癌细胞系BGC823，宫颈癌细胞系Hela（均由本实验室传代保种），均常规传代培养。
2 方法
2.1 实验分组每种细胞均设对照组（不加药）与观察组（加药），观察组分设高（4 mg/ml）、中（1 mg/ml）、低（0.25 mg/ml）3个浓度组。
2.2 加药处理取对数生长期的4种癌细胞，均以2×104/孔接种于24孔培养板，接种24 h后加药。加药后：①每天于倒置相差显微镜下观察细胞形态变化；②每隔24 h各组均取5孔细胞台朌蓝拒染法计活细胞数，每孔计3次，5孔取平均值，计算出当天的生长抑制率，抑制率（%）={（对照组平均活细胞数-观察组平均活细胞数）/对照组平均活细胞数}×100%，［1］，连续6 d。
2.3 抑制效果的判断与分析
①细胞形态的观察与分析：章静波的五级分类评价［2］；②平均抑制率：6 d的抑制率相加取平均值；③最高抑制率：每种细胞各浓度组取其6 d中最高的一天。抑制率的比较采用χ2检验。
3 结果
3.1 地榆水提液对细胞形态的影响
对照组：HepG2，BGC823和Hela紧贴板壁，胞间紧密接触，胞质透亮，可见分裂相，连续观察，细胞继续生长，集落不断扩大，属0级；K562胞体发亮，大小均匀，日益密集。观察组：加药后8～10 h，HepG2，BGC823和Hela部分胞体回缩，胞质内有颗粒物积累，属1级；K562多数胞体变暗，大小不均。加药后24 h，BGC823和Hela部分皱缩、变圆、脱壁，仍属1级，HepG2（图1）板底已可见碎渣样物质，属2级；K562（图2）大部分形态异常，或皱缩或内容物释放形成“鬼影”，板底可见碎渣样物质。加药后48 h，BGC823和Hela更多的脱壁并出现碎渣，属2级，HepG2大量浮起，碎渣量大，属3级；K562多数崩解。
3.2 地榆水提液对4种癌细胞生长的平均抑制率
见表1。由表1可见，地榆水提液对4种癌细胞的生长都有明显抑制作用，但它们的抑癌效果是不同的，如高浓度组中，K562的抑制率最高，可达83.72%，Hela的抑制率最低，也在54.11%，四者间相互比较，K562＞HepG2＞BGC823＞Hela。表1 地榆水提液对4种癌细胞生长的平均抑制率（略）
3.3 地榆水提液对4种癌细胞生长的最高抑制率
见表2。由表2可见，地榆水提液对4种癌细胞的生长都有明显抑制作用，但它们出现的最高抑癌时间不尽相同，以高浓度组为例，K562在72 h而Hela在96 h；它们的抑癌效果也不同，如高浓度组中，K562最高，为85.20%，Hela最低，为58.10%，4种细胞间相互比较，K562＞HepG2＞BGC823＞Hela。表2 地榆水提液对4种癌细胞生长的最高抑制率（略）
4 讨论
已有研究表明：地榆可抑制人宫颈癌细胞JTC-26的生长［3］，本实验表明其水提液对来源于血液、消化、生殖3个系统的4种癌细胞均有明显抑制作用，且对白血病细胞、肝癌细胞和胃癌细胞的作用强于宫颈癌细胞，提示值得进一步深入研究为其临床抗癌应用提供。
从形态观察到抑制率的比较均显示地榆对4种癌细胞的抑制效果为：K562＞HepG2＞BGC823＞Hela。中医认为：地榆“归肝、胃、大肠经，入血敛降”［3］，入血分，善治血病，故对白血病细胞抑制效果最好；首归肝经，对肝癌细胞效果也很好；次入胃经，对胃癌细胞效果弱于肝癌；与子宫颈关系不很密切，故对子宫颈癌细胞抑制效果最差。本实验这一结果与中医的气血理论和药物归经理论相一致，再次说明了中医基本理论的博大精深，即便在体外细胞水平上也有良好体现，对实验室手段研究中医药同样有着重要指导意义。
【参考】
［1］张卓然.细胞培养学与细胞培养技术［M］.上海：上海技术出版社，2004：424.
［2］章静波.细胞生物学实用方法与技术［M］.北京：北京医科大学协和医科大学联合出版社，1995：76.
［3］田代华.实用中药辞典［M］.北京：人民卫生出版社，2002：664.
