广西甜茶二萜类成分的研究
【摘要】 目的 研究广西甜茶Rubus suavissimus S.Lee叶中的活性成分。方法利用反复硅胶柱层析对广西甜茶水提物进行分离和纯化，通过IR，MS，NMR等光谱技术和化学方法鉴定出其结构。结果从广西甜茶叶中分离得到4个对映-贝壳杉型二萜类化合物，分别鉴定为ent-16β,17-dihydroxy-kauran -3-one (Ⅰ)，ent-16β，17-dihydroxy-kauran-19-oic acid（Ⅱ)，ent-kauran-16β，17-diol-3-one-17-O-β-D-glucoside(Ⅲ)，rubusoside(Ⅳ)。结论化合物Ⅰ，Ⅱ均为首次从该植物中分得。
【关键词】 广西甜茶；对映-贝壳杉；二萜
Abstract:ObjectiveTo study the bioactive constituents from leaves of Rubus suavissimus S.Lee. Methods Column chromatography with silic gel was employed to isolate and purify the ingredients. Their structures were elucidated by means of IR,MS,NMR and chemical methods respectively. ResultsFour compounds were isolate and elucidated as ent-16β,17- dihydroxy-kauran -3-one (Ⅰ),ent-16β,17-dihydroxy-kauran-19-oic acid（Ⅱ)，ent-kauran-16β,17-diol-3-one-17-O-β-D-glucoside(Ⅲ) and rubusoside(Ⅳ),respectively. ConclusionCompounds I and Ⅱ were separated from Rubus suavissimus S.Lee for the first time.
Key words:Rubus suavissimus S.Lee; Ent-kauran; Diterpenoids
蔷薇科（Rosaceae）悬钩子属植物（Rubus L.），现知约有七百余种，分布于全世界，主产地位于北半球温带，我国有194种。本属植物含有维生素、挥发油、有机酸、黄酮、萜类及甾体类［1］。
广西甜茶Rubus suavissimus S.Lee是蔷薇科悬钩子属植物一个新种，主产于广西桂林、金秀、桂平等县。甜茶叶民间应用悠久,长期以来除当茶叶饮用之外,还可药用。其叶具有清热润肺、祛痰止咳等功效，并用于糖尿病和高血压等症的辅助［2］。国外报道,临床上每天服用甜茶提取物可预防或改善炎症、喉痛、花粉过敏等。我们对广西甜茶的化学成分进行研究，从其水提液中分离得到4个化合物：Ⅰ为对映-16β,17-二羟基-贝壳杉-3-酮(ent-16β,17 -dihydroxy-kauran-3-one)，Ⅱ为对映-16β,17-二羟基-贝壳杉-19-羧酸(ent-16β,17-dihydroxy-kauran-19-oic acid)，Ⅲ为对映-贝壳杉-16β,17-二醇-3-酮-17-O-β-D-葡萄糖苷（ent-kauran-16β,17-diol-3-one -17 -O-β-D- glucoside）,Ⅳ为悬钩子苷（rubusoside）。其中化合物Ⅰ，Ⅱ均为首次从该植物中分得。
1 仪器与材料
熔点仪用Kafler显微熔点测定仪测定（温度计未校正）；红外光谱用EQUINOX55型红外光谱仪测定。质谱用ZAB-HS型双聚焦磁质谱仪；核磁共振用Varian-INOVA500MHz超导核磁共振波谱仪；柱层析和薄层层析硅胶均由青岛海洋化工厂生产。显色剂为碘蒸气和5%磷钼酸乙醇溶液。所用试剂均为分析纯。药材于2004?07采于广西金秀县，由广东药学院中药学院刘基柱老师鉴定为Rubus suavissimus S.Lee。
2 提取与分离
取干燥的广西甜茶叶10 kg粉碎，粗粉用热水煎煮3次 ，合并煎煮液，浓缩干燥得到2 kg浸膏，粉碎，用70%乙醇沉淀出不溶物，过滤，滤液加2～3倍量水，水浴蒸至无醇味。滤液依次用石油醚（60～90℃）、氯仿、醋酸乙酯进行反复萃取，得到石油醚部位、氯仿部位和醋酸乙酯部位。
将氯仿萃取物46.2 g 经硅胶（200目）柱层析，用石油醚-醋酸乙酯梯度洗脱，得到化合物Ⅰ，Ⅱ。将醋酸乙酯萃取物70.0g经硅胶（200目）柱层析，用氯仿-甲醇梯度洗脱进行粗分，粗分后石油醚-醋酸乙酯反复柱层析，得到化合物Ⅲ、Ⅳ。
3 结构鉴定
化合物Ⅰ：白色针状结晶，mp192～193℃,易溶于氯仿，甲醇。FAB-MS 给出分子离子峰m/z 321［M+1］+，同时给出303［M-H2O+H］+ ,285［M-2H2O+H］+，分子式为C20H32O3，IR(KBr)cm-1:3 542,3 273(-OH),2 940，1 692(C=O),1 446，1 068，提示分子结构中可能存在羟基和羰基。1H-NMR （CDCl3)ppm谱δ1.03（3H,s）,1.08(3H,s)，1.10（3H,s）证实有3个甲基存在,3.71(1H,d,J=11.0),3.78(1H,d,J=11.0)是-CH2OH基团上的两个不对称氢。 13 C-NMR（CDCl3）ppm谱δ218.1吸收峰证实羰基存在，分子的不饱和度为5，去除一个羰基，分子其余骨架不饱和度为4，且其碳谱信号均在高场，说明其骨架具有4个环，可能是一个四环二萜类化合物。有2个碳的吸收峰在60.0～85.0 ppm之间，说明这2个碳原子连有羟基，其中δ66.2是C-17的吸收峰，δ81.7是C-16的吸收峰，且16-C处于β位。查阅相关［3，4］发现,其结构应为对映-16β,17-二羟基-贝壳杉-3-酮(ent-16β,17 -dihydroxy -kauran-3-one)，碳谱数据见表1，该化合物首次从该植物中分得。
化合物Ⅱ：白色块状结晶（甲醇），mp 266～268℃。FAB-MS 给出分子离子峰m/z 337［M+1］+，分子式为C20H32O4,IR(KBr)cm-1:3 436，3 257（-OH），1 697（C=O)，1 466，1 229，1 167。13C-NMR（CD3OD）和DEPT可以观察到20个碳原子，其中存在2个CH3，10个CH2,3个CH和5个季碳。1H-NMR（CD3OD）ppm谱δ1.02（3H,s），δ1.09(3H,s)证实有2个甲基，δ3.67(1H,d,J=11.0), δ3.78 (1H,d,J=11.0) 是-CH2OH基团上的两个不对称氢，δ4.41（1H，t）是C17的-OH的氢信号。13 C-NMR（CD3OD）ppm谱δ181.7吸收峰证实羧基的存在，低场只有这一个吸收峰，其余均在高场且都是饱和碳，在60.0～85.0 ppm之间有2个碳的吸收峰，说明2个碳原子连有羟基，其中δ66.9是C-17的吸收峰，δ82.9是C-16的吸收峰，且16-C处于β位。综上所述，化合物Ⅱ为贝壳杉型四环二萜化合物，且数据与［5］报道的对映-16β,17-二羟基-贝壳杉-19-羧酸（ent-16β,17- dihydroxy- kauran-19-oic acid）一致，碳谱数据见表1，该化合物首次从该植物中分得。化合物Ⅲ：无色针状结晶，mp 202～203℃。分子式C26H42O8，IR(KBr)cm-1: 3 411(-OH),2 932，1 704(C=O),1 424，1 254，1 026,提示存在羟基、羰基。13C-NMR和DEPT谱可观察到26个碳原子，其中存在3个CH3，10个CH2 ，8个 CH，5个季碳。13C-NMR (DMSO)ppm谱δ216.5吸收峰证实羰基的存在,δ79.4为季碳，提示该碳连有羟基。δ104.4，73.7，76.3，70.0，76.9，61.0一组数据表明该化合物连有一分子葡萄糖。1H-NMR（DMSO)ppm谱δ0.93(3H,s)，0.99（3H，s）和1.00（3H，s）证明存在3个CH3，δ5.06(1H,d)是糖的端基碳上的质子，δ2.96-3.17（6H,m）是糖上的6个氢。查阅有关文献［6］发现其结构类型属于贝壳杉型化合物,且光谱数据与对映-贝壳杉-16β,17-二醇 -3-酮-17-O-β-D-葡萄糖苷（ent-kauran-16β,17- diol-3-one -17-O-β-D-glucoside）一致，碳谱数据见表1。
化合物Ⅳ：白色针状结晶，mp177～178℃。分子式C32H50O13，IR(KBr)cm-1：
3 390(-OH),2 928,1 723(C=O),1 454,1 073，提示存在羟基、羰基。13C-NMR和DEPT谱可观察到32个碳原子，其中存在2个CH3，12个CH2 ，12个 CH，6个季碳。13C-NMR (DMSO)ppm谱δ175.5吸收峰证实羧基的存在，δ153.0和104.1说明结构中存在C=CH2片断,δ85.3为季碳，提示该碳可能连有氧原子。δ97.8，73.6，76.4，70.4，76.9，61.2是与 13-C相连的葡萄糖的碳信号，δ94.0，72.5， 77.0，69.5，77.6，60.5则是与19-C相连的葡萄糖的碳信号，两个甲基信号分别是δ15.2和δ28.1。1H-NMR13（DMSO）ppm谱δ0.87（3H,s），δ1.13(3H,s)证实有2个甲基，δ2.92-3.66（12H,m）是两分子葡萄糖上所连的12个氢，δ4.29（1H,d），4.45（1H,d）是C=CH2片段上的二氢，δ5.13(1H,d),δ5.27(1H,d)分别是两个葡萄糖端基碳上的质子。查阅相关文献［7］，发现其结构属于贝壳杉型四环二萜类化合物，且在13-C和19-C上分别连有一分子葡萄糖，光谱数据与悬钩子苷（rubusoside）一致，碳谱数据见表1。表1 化合物Ⅰ～Ⅳ的13C-NMR谱数据（略）
致谢 红外、核磁共振、质谱均由中山大学分析测试中心测定，谨致谢意！
【文献】
［1］刘明生,李 铣,朱廷儒. 悬钩子属植物化学成分的研究概况［J］.沈阳药科大学学报，1994,11（1）：68.
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［3］Wang H,Zhang X F,Luo X D. An ent-kaurane diterpene from Euphorbia wallichii［J］.Nat Prod Res Dev. 2006,18：53.
［4］Tanaka N,Murakami T,Saiki Y. et al. Chemical chemotaxnomiical studies of Filices.LⅢ.Chemical studies on the constituents of Dipteris conjugate Reinw［J］.Chem.Pharm. Bull.1985,33：152.
［5］Yamasaki K, Kohda H, Kobayashi T, et al. Application of nuclear magnetic resonance spectroscopy to chemistry of glycoside;structures of paniculosides-Ⅰ,-Ⅱ,-Ⅲ,-Ⅳ,and-Ⅴ,diterpene glucosides of Stevia paniculata Lag［J］. Chem.Pharm.Bull.1977,25(11)：2895.
［6］Hirono S,Chou W H,Kasai,R,et al. Sweet and bitter diterpene- glucosides from leaves of Rubus suavissimus［J］.Chem.Pharm.Bull. 1990,38(6)：1743.
［7］Ohtani K, Aikawa Y,Kasai R, et al. Minor diterpene glycosides from Sweet leaves of Rubus suavissimus［J］. Phytochemistry.1992,31(5)：1553.
