复方二甲双胍胶囊中盐酸二甲双胍的人体药代动力学与相对生物利用度研究

　　作者：王天奎，李晓天，王素军，刘秀梅，袁宏伟

【摘要】  目的  研究复方二甲双胍胶囊中盐酸二甲双胍的人体药代动力学与相对生物利用度。方法  20例健康男性志愿者，随机分为两组，分别交叉口服复方二甲双胍胶囊和盐酸二甲双胍胶囊，用反相离子对色谱法测定血浆中二甲双胍的浓度，进行相对生物利用度研究。结果  口服含500mg盐酸二甲双胍的复方制剂及其单独制剂的达峰时间（Tmax）分别为1.8±0.6h 和1.8±0.7h；峰浓度（Cmax）分别为2.11±0.48mg/L和2.06±0.52mg/L；消除半衰期（T1/2）分别为2.98±1.19h和2.70±0.58h ；药时曲线下面积（AUC）分别为10.87±2.61mg/(h·L)和10.28±2.44mg/(h·L)，经统计分析，两种制剂的药代动力学参数差异无显著性（P＞0.05）；口服复方二甲双胍胶囊对盐酸二甲双胍胶囊的相对生物利用度为(105.7±11.0)%。结论  两种制剂具有生物等效性。
   
    【关键词】  盐酸二甲双胍；药代动力学；相对生物利用度
   
    Pharmacokinetics and relative bioavailability of metformin hydrochloride in compound  metformin  capsules
        
    【Abstract】  Objective  To study the pharmacokinetics and relative bioavailability of metformin hydrochloride in compound metformin capsule in healthy male volunteers.Methods  A single oral dose of 500mg metformin hydrochloride in compound metformin capsule (CoMET) or in conventional metformin hydrochloride capsule (as reference formulation， MET)was give to 20 healthy male volunteers in a randomized crossover design. Drug concentration in plasma was assayed by reversed-phase iron-paired HPLC.Results  The pharmacokinetic parameters of CoMET and MET were as follows: Tmax1.8±0.6h， 1.8±0.7h； Cmax2.11±0.48mg/L， 2.06±0.52mg/L；AUC10.87±2.61mg/(h·L)，10.28±2.44mg/(h·L) respectively. The pharmacokinetic parameters showed no significant differences between the two capsule formulas (P＞0.05). The relative bioavailability of CoMET to MET was (105.7±11.0)%.Conclusion  The two capsule formulas of metformin hydrochloride are bioequivalent.
   
    【Key words】  metformin hydrochloride；pharmacokinetics；relative bioavailability
   
    二甲双胍（metformin，MET） 是双胍类口服降血糖药，它主要作用于胰岛外组织，抑制肠吸收葡萄糖，增加外周组织对葡萄糖的利用，减少肝糖原异生，从而达到降低血糖的目的。由于它降糖作用明显，不引起低血糖，可明显降低餐后高血糖，适合2型糖尿病患者；同时它还改善胰岛素抗性等［1，2］，因此其在临床得到广泛应用。为了进一步提高其疗效，增加适应证，降低其胃肠道不良反应，将其与格列本脲合用，用于各型糖尿病。笔者采用反相离子对色谱法对口服复方制剂后血浆中二甲双胍的浓度进行测定，以研究其在健康志愿者体内药物动力学与相对生物利用度，旨在为该药的临床应用提供依据。
   
    1  实验材料
   
    1.1  药品与试剂  复方二甲双胍胶囊：（250mg盐酸二甲双胍+1.25mg格列本脲）/粒，常州兰陵制药有限公司生产，批号：010723 。盐酸二甲双胍胶囊：250mg/粒，常州兰陵制药有限公司生产，批号：0207047。盐酸二甲双胍标准品：常州兰陵制药有限公司提供，批号：0207001 。乙腈为色谱纯，磷酸、三乙胺、高氯酸、十二烷基硫酸钠为分析纯，水为三蒸水。
   
    1.2  仪器  岛津LC-10A高效液相色谱仪；SPD-10AVP检测器；HS色谱数据工作站V4.0，CT-21处理器；SORVALL低温高速离心机。
   
    1.3  试验对象的选择  健康男性志愿者20例，平均年龄22.8±1.5岁，平均体重60±8.5kg，平均身高1.70±0.12m。所有受试者在参加试验前均接受全面体格检查，包括心、肝、肾功能、血象等，检查结果提示均正常。受试者无药物过敏史，并在3周内未有任何服药史及吸烟史。
   
    2  试验方法
   
    2.1  给药方法及样品采集  20例健康志愿者，随机分为A 、B两组，采用自身交叉对照，A组先给予复方二甲双胍胶囊２粒，经1周洗脱期后再给予盐酸二甲双胍胶囊２粒，B组则相反。受试者隔夜禁食，试验当日，清晨空腹口服复方二甲双胍胶囊（CoMET，受试制剂）或盐酸二甲双胍胶囊（MET，参比制剂） ，并饮水200ml ，服药后禁食4h。受试者在受试过程禁烟、酒和高脂肪食物，全日服用标准餐。每位受试者分别于服药前、服药后的0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、10、12、16h ，从肘静脉取血3ml，肝素抗凝，离心分离血浆，置-20℃储存，待测。
   
    2.2  标准溶液的配制  精密称取二甲双胍10mg，置于10ml量瓶中，加入三蒸水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得1mg/ml储备液，再分别稀释成一定浓度系列。
   
    2.3  色谱条件  色谱柱：Lichrospher C18 dp5μm，250mm×4.6mm ID，流动相：3mmol/L十二烷基硫酸钠(含0.5%三乙胺，用H3PO4调pH为3.8)-乙腈(65:35)，流速为：1.0ml/min，灵敏度0.01AUFS；紫外检测波长为232nm，测定温度16～18℃。
   
    2.4  样品处理  取肝素抗凝的待测血浆0.2ml，加入10%高氯酸0.08ml，涡旋2min，于18000rpm离心10min，取上清液150μl，再次离心后取20μl进样，色谱图见图1。

 

Fig.1  Chromatograms of  metformin hydrochlorideChromatograms of standard  metformin hydrochloride (A)， blank plasma (B)， volunteers’plasma(C)

    2.5  数据处理  采用药科大学新中新药研究中心编制BAPP2.0软件包对药时曲线进行模拟，并有关药代动力学参数。

    
    3  结果
   
    3.1  线性关系与检测灵敏度  取正常人血浆8份，每份0.2ml，1份留作空白对照，另7份分别加入盐酸二甲双胍标准液使成0.05，0.125，0.25，0.5，1，2，4mg/L的浓度系列，按前述方法提取进样，以MET浓度为X，峰面积为Y，得回归方程：Y=59290X+2690.6，相关系数：r=0.9995。MET在0.05～4mg/L范围内浓度与峰面积有良好线性关系。在本试验条件下，MET标准品的检测限为2ng，血浆MET的最低检测浓度为20μg/L。
   
    3.2  回收率和精密度测定  精确配制0.05、0.5、4mg/L MET血浆标准品，按样品处理方法进行处理，取20μl进样，并配制相同浓度的MET溶液标准品，同法处理，求得绝对与相对回收率。取上述3个浓度的MET血浆标准品，按样品处理方法进行处理，同一天内进样5次，求得日内变异，连续5天进样，求得日间变异。测得3种浓度的回收率分别为96.62%、98.03%、99.43%，3种浓度的日内RSD≤3.55%；日间RSD≤7.63%。
   
    3.3  血药浓度测定及药物动力学参数  20例受试者口服两种制剂后的平均药时曲线见图2，药代动力学参数见表1。受试制剂与参比制剂的达峰时间在1.8h左右，峰浓度分别为2.11±0.48mg/L和2.06±0.52mg/L，受试制剂与参比制剂的相对生物利用度为(105.7±11.0)%，统计分析： Cmax、AUC0-16用双单侧t检验分析，Tmax 采用非参数检验(Wilcoxon方法)，结果显示参比制剂和受试制剂的AUC0-16、Cmax、Tmax差异无显著性（P＞0.05）。因此2种制剂中MET具有生物等效性。

Table 1  Pharmacokinetics parameters in normal volunteers after oral administration of 500mg metformin in MET Capsule or CoMET Capsule

 

  
Fig2.  Mean plasma concentration-time curve of metformin after or al administration of 500mg metformin in MET Capsule or CoMET Capsule

    4  讨论
   
    有关二甲双胍的测定方法，报道有多种色谱方法［3～5］，但均有不同程度的缺点，如血样量大，样品处理繁琐或灵敏度低等。笔者采用反相离子对色谱法进行盐酸二甲双胍的血药浓度测定，10%高氯酸沉淀处理样品，简单方便，所用试剂少，成本低，且对环境造成的污染少，本法的灵敏度、精确度和回收率较高，并且每次测定所用的血浆量较少，适用于临床血药浓度测定和药代动力学研究。上述试验结果表明2种制剂的Cmax、Tmax 、AUC0-16及其他主要药动学参数相似，经统计学处理，差异无显著性（P＞0.05），说明两药间的药代动力学特性基本一致，也提示CoMET中格列本脲对二甲双胍体内药代动力学过程尤其是生物利用度未产生显著性影响，二者合用，有利于提高疗效，降低毒性。

【文献】

    1  Somogyi A， Stockley C， Keaf J，et al. Reduction of metformin renal tubular seretion by     cimetidine in man. Br J Clin Pharmacol， 1987， 23(5):545-551.
    2  Marchetti P， Benzi L， Cecchetti P，et al. Plasma biguanide levels are correlated with metabolic    effects in diabetic patients. Clin Pharmacol Ther， 1987，41(4):450-454.
    3  刘京， 申竹芳， 谢明智，等. HPLC法测定盐酸二甲双胍肠溶胶囊及片剂的人体药代动力学及其生物利用度. 临床药杂志， 1994， 10(3):165-170.
    4  范鲁雁， 仇益群， 汤震. 盐酸二甲双胍胶囊的药动学与相对生物利用度研究. 安徽医科大学学报， 1999，34(4):268-270.
    5  余继英，何林，孙世明，等. RP-HPLC测定盐酸二甲双胍的血药浓度. 华西药学杂志，2002，17(5):343-344.