非淋菌性尿道炎患者中Uu和CT感染情况分析
关键词:解脲脲原体;沙眼衣原体;非淋菌性尿道炎
解脲脲原体（Ureaplasma urealyticum，UU）和沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis，CT）是可寄居于人体并能引起疾病的病原体。它们都可致人体非淋菌性尿道炎 ［1］ 。采用实时定量PCR（Real-time quantity PCR）方法同时检测临床收集的887份NGU患者标本的UU和CT，分析NGU患者感染UU和CT的比例提供临床诊治。
1 材料和方法
1.1 标本来源 2005年来海南省就诊的887例NGU患者。其中，男性161例，女性726例。送检的标本包括宫颈分泌物、白带、精液、前列腺液。
1.2 主要仪器和试剂 7300real-time PCR system及其配套分析软件为美国Applied biosystems公司产品;模板提取液Ⅰ、Ⅱ，UU和CT的PCR反应液，UNG，Taq酶购自深圳匹基公司。
1.3 方法
1.3.1 模板的提取 将沾有标本的棉拭子与1ml生理盐水混匀，取100μl混匀的生理盐水加到100μl模板提取液Ⅰ中，振荡混匀，13000rpm离心10min。弃上清，沉淀中加入50μl模板提取液Ⅱ，瞬时振荡，100℃干浴10min后13000rpm离心10min，上清备用。
1.3.2 定量PCR ①反应体系组成:根据UU和CT操作说明，分别加入不同比例的PCR反应液，UNG和Taq酶，至38μl。加入2μl模板上清液，总反应体积40μl。②扩增反应:将反应管放入PCR扩增仪，37℃5min，94℃1min，95℃5s，60℃30s，进行40个循环。③溶解曲线分析:应用配套的分析软件，分别确定UU和CT反应的baseline和threshold，尽量降低本底反应的干扰。
1.3.3 统计分析 将得到的结果应用卡方χ 2 检验和scheffé可信区间法分析。
2 结果
2.1 887例标本的检测结果 见表1。
2.2 应用卡方χ 2 检验和scheffé可信区间法分析检测结果 根据以上表1结果求得χ 2 值为18.98（ν=2，P<0.005）。可确认NGU患者感染UU，CT和UU与CT混合感染的比率是存在显著差异的。再用scheffé可信区间法进行两两比较，结果见表2。
由表中结果可知，NGU患者感染UU和感染CT及UU与CT混合感染的比率两两都有所不同。感染UU的比率要明显大于感染CT及UU与CT混合感染的比率。以上结果表明，UU为非淋菌性尿道炎的主要感染微生物。
表1 887例NGU患者UU、CT阳性结果分布（略）
表2 3种感染类型占比率的两两比较（略）
3 讨论
NGU是一种常见的性传播疾病，是以衣原体和支原体为主要致病微生物引起的泌尿生殖系统感染，其主要病原体是UU和CT，少数可由一些其他病原体感染引起。
临床上对UU的检测方法有免疫荧光抗体法、培养法、直接染色检测法等，这些方法间或需要特殊设备，时间较长，操作复杂，敏感度低特异性不高等缺陷 ［1］ 。采用PCR法检测，其具有快速、特异、敏感等优点，可为临床提供较可靠的诊断依据 ［3～5］ 。
实验室检查CT的主要方法有:①细胞培养法检测CT包涵体，该法费时费事，成本高，且需要特殊的设备及技术，难于普及。②荧光抗体法或酶标抗体法，由于特异性差且阳性率低不能满足临床要求。③核酸探针法，特异性较高但敏感性太低。PCR法能在数小时内获得结果，具有灵敏度高，快速、特异性强等优点，检测标本种类多，为CT感染的临床诊断提供了准确可靠的方法 ［1，2，6］ 。
通过分析在NGU患者中UU和CT感染比例，比较这两种病原体感染存在的差别。结果在887例患者的标本中，检出UU和CT两种病原体，UU感染者明显多于混合感染型和CT感染者。目前，国内关于这方面的报道结果不一，早期的报道指出，CT感染率大于UU感染率 ［6，7］ ;近年来，UU感染率逐步上升，逐渐成为NGU的主要病原体 ［8～10］ 。本次结果与之吻合，给临床诊治NGU提供有益的启示。
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