清胃散中盐酸巴马汀等成分的含量测定
【关键词】 清胃散；盐酸巴马汀；盐酸药根碱；芍药苷
Determination the content of palmatine hydrochloride, jatrorrhizine hydrochloride and paeoniflorin in different decoctions of Qingwei San
SHAO Jin-ming,CAO Pei-xue,LIANG Guang-yi，et al.The Key Laboratory of Chemistry for Natural Products of Guizhou Province and Chinese Academy of Sciences,Guiyang 550002，China
【Abstract】 Objective To compare the content of palmatine hydrochloride, jatrorrhizine hydrochloride and paeoniflorin inthe mixed decoction and the separateddecoction and the antibacterialexperimentsof Qingwei San.Methods The three components was determined by HPLC and the qualitative test by the general agar of diffused cup-plate method and the quantitative assay by the test-tube method in the antibacterialexperiments Results The average content of the palmatine hydrochlorideand the jatrorrhizine hydrochloridewhich was the more 2.73times inthe separateddecoctionthan in the mixed decoction, and the paeoniflorinwas only 1.17 times in the separateddecoctionthan in the mixed decoction.Conclusion The resuls of this experiment for Qingwei San which is provided reference to clinic use.
【Key words】 Qingwei San;palmatine hydrochloride；jatrorrhizine hydrochloride; paeoniflorin
清胃散出自《脾胃论》，由黄连、当归、生地、丹皮、升麻等5味中药组成。主治胃火牙痛。用分煎法与合煎法制备的中药复方汤剂，其有效成分含量、药理作用有何变化，一直是中医药理论和临床实践中值得探讨的课题，本以中药经方清胃散中的有效成分盐酸巴马汀和盐酸药根碱及芍药苷作为考察指标，比较该方用合煎法与分煎法制得的汤剂中有效成分含量，探索中药复方汤剂不同制法对其有效成分溶出量影响。
1 实验处方、仪器和药品与试剂
1.1 实验处方［1］ 黄连6g，当归6g，生地6g，丹皮9g，升麻9g。
1.2 仪器 美国惠普HP1100型高效液相色谱仪，HP1100/ WIND3D 化学工作站。 DAD 检测器。
1.3 药品与试剂 黄连为毛茛科黄连(Coptis chinensis Franch.)根茎，产地四川；当归为伞形科当归［Angelica sinensis (Oliv.) Diels］根，产地甘肃；生地为玄参科生地(Rehmannia glutinosa Libosch.)块根，产地河南；丹皮为毛茛科牡丹(Paeonia suffruticosa Andr.)根皮，产地安徽；升麻为毛茛科升麻(Cimicifuga foetidaL.)根茎，产地辽宁；经贵阳中医学院何顺志教授鉴定且符合2005版《药典》一部收载。盐酸巴马汀对照品（批号732－9906）,盐酸药根碱（批号733－9906）芍药苷对照品(批号110736-200422)，购于中国药品生物制品检定所。乙腈(色谱纯)，水(重蒸)，其余试剂均为分析纯。
2 单味药中盐酸巴马汀和盐酸药根碱及芍药苷的含量测定［2］
按照2005版《药典》一部测定黄连生药中盐酸小檗碱的含量的方法测得黄连生药中盐酸巴马汀和盐酸药根碱的含量分别为2.45，1.35%；同样按照2005版《药典》一部测定白芍中芍药苷的含量的方法测定丹皮中芍药苷的含量为0.868%。
3 样品的制备
3.1 合煎液干膏的制备 按实验处方称取药材饮片，加8.5倍水［3］，浸泡30min，头煎保持微沸20min， 倒出煎液；药渣再加4.5倍量的水煎煮15min，倒出煎液，药渣以50ml水水洗3次，合并所有药液，减压浓缩回流至近干，真空减压干燥得干膏，出膏率见表1。
3.2 分煎液干膏制备 分别称取单味药材，按合煎液制法，制备各单味药材饮片配方颗粒，并干膏率（表1）。根据出膏率换算并称取相当于饮片合煎液组成药材用量的各单味药材配方颗粒，混匀，得配方颗粒汤剂干膏(汤剂分煎液干膏)。表1 合煎液出膏率和分煎液中单味药的出膏率
4 方法
4.1 色谱条件 Hypersil C18色谱柱，流速为1.0ml/min，盐酸巴马汀和盐酸药根碱的流动相为乙腈-0.08%磷酸二氢钾水溶液（含0.08%三乙胺，7% 四氢呋喃，以磷酸调pH 至3）（30∶70），检测波长346 nm，柱温25 ℃；芍药苷的流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液（15∶85），检测波长230 nm，柱温35 ℃。
4.2 标准曲线制备 分别精密称取适量盐酸巴马汀和盐酸药根碱对照品，以盐酸-甲醇(1:100) 溶解并配制成溶液，另精密称取适量芍药苷对照品，以70%甲醇溶解并配制成溶液，3种对照品溶液再分别稀释成6个不同浓度，不同浓度的同种对照品溶液进样相同体积，按相应色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值（A）对含量（C）作线性回归得测定结果见表2。 表2 线性关系测定结果
4.3 精密度试验 在各自色谱条件下对3种对照品溶液分别重复进样6 次，进样体积相同，三者峰面积RSD分别为0.60%，0.61%，0.50%。
4.4 稳定性试验 按各自合煎样品含量测定方法制备样品供试液，精密吸取同一样品供试液，每隔一定时间进样，按相应色谱条件测定盐酸盐酸巴马汀和盐酸药根碱及芍药苷含量，各测6次，RSD分别为1.0%，1. 0%，0.50%；表明3个成分分别在18h，18h，24h内稳定。
4.5 重复性试验 取同一批干膏，按合煎样品含量测定方法制备样品供试液，平行制备6份样品液，同法测定，用外标法盐酸巴马汀和盐酸药根碱及芍药苷含量，在饮片合煎液中3个成分RSD分别为0.81%，1.7%，0.50%；在分煎液中3个成分RSD分别为1.8%，1.1%，1.1%。
4.6 回收率试验 精密称取已知含量的合煎液干膏，分别加入样品中对应成分总含量80％、100％、120％的对照品各3份，按各自含量测定方法制备样品供试液，同法测定。测得盐酸巴马汀和盐酸药根碱及芍药苷的平均回收率为98%，98%，99%；RSD分别为1.2%，1.4%，1.1%。
5 合煎与分煎中的含量比较
5.1 用于盐酸巴马汀和盐酸药根碱测定的样品供试液制备
5.1.1 合煎液的制备 精密称取合煎汤剂干膏粉0.15g，置25ml量瓶中，加盐酸-甲醇(1:100)略低于25ml，超声处理15min，取出，冷至室温，以盐酸-甲醇(1:100)定容至刻度，摇匀，再从中精密吸取5ml于10ml量瓶中，以相同溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，过0.45μm滤膜，备用。
5.1.2 分煎液的制备 精密称取相当于5.1.1合煎液用量的分煎液干膏粉末置25ml量瓶中，同上法处理，即得。
5.2 测定芍药苷的样品溶液的制备
5.2.1 合煎液的制备 精密称取合煎液干膏粉0.1g，置25ml量瓶中，精密加入70%甲醇，摇匀，滤过，取续滤液，过0.45μm滤膜，滤液备用。
5.2.2 分煎液的制备 精密称取相当于5.2.1用量分煎液干膏粉，置25ml量瓶中，同法操作。
5.3 含量测定结果 精密吸取适量的样品供试液，分别按盐酸巴马汀和盐酸药根碱和芍药苷色谱条件平行测定6次，3成分在复方生药中的平均百分含量见表3。表3 清胃散中盐酸巴马汀和盐酸药根碱
6 讨论
分煎中盐酸巴马汀和盐酸药根碱的含量比合煎中的含量高2.73倍，说明有明显差异，而分煎中芍药苷的含量仅为合煎液中含量的1.17倍，则没有明显差异。这可能与合煎中药物之间的相互作用及有效成分本身的物理性质与化学性质有关。
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1 段富津.方剂学.上海：上海技术出版社,1995,87.
2 国家药典委员会.药典，一部.北京：化学出版社，2005,89，213.
3 程磐基.宋元明清药物剂量的考证与研究.上海中医药杂志,2004，38（7）：6-8.
