试剂红细胞的研究与应用

［摘要］目的：研制试剂红细胞用于血型鉴定反定型，保证临床输血安全。方法：制备效期长的红细胞保养液，再用该保养液制备4%的试剂红细胞，2℃～8℃冰箱保存，每周对其进行红细胞抗原性和免疫特异性测定及反定型试验，观察细胞凝集状况。结果：本法制备的试剂红细胞保存期为68 d，具有较好的抗原特异性和细胞稳定性，68 d以后凝集强度减弱。结论:该试剂红细胞凝集效能良好，红细胞抗原稳定性、免疫特异性好，具有成本低，制作易，操作简便等优点。?

　　［关键词］试剂红细胞；细胞稳定性；免疫特异性；反定型

　　Study and Application of the Reagent Red Blood Cells

　　CHEN Bo?lun?,ZHAO He?ping?,SUN Li?shan?,WANG Yi?xuan?,CHANG Ji?wen?,DING Li?,CHEN Yong

　　(Xi'an Red Cross Hospital,Xi'an ,Shaanxi 710054,China;Xi'an Clinic Laboratory Centre,Xi'an,Shaanxi 710054, China;?Xi'an Health Bureau,Xi'an， Shaanxi 710054， China) 

　　Abstract:Objective To study the reagent red blood cells which is used in the reverse typing of ABO insure the safety of clinical transfusion.Methods We make the nutrient liquor for keeping the red cell alive,and by using this nutrient liquor to produce the 4% the reagent rde blood cells that is kept under the 2 ℃～8 ℃ in the refrigerator.Every week we test the antigen, immunological specificity and dosome reverse typing experiments of the rde cells with the 4% the reagent red blood cells in order to observe the condensation of cells.Results The reagent red blood cells can exist sixty?eight days,by this method we have the better antigen specificity and stability of cells.After sixty?eight days the intensity of condensation will be brought down.The condensation of this reagent red blood cells is fine,the immunological specificity and the stable antigen of the red cells is good.At the same time this method have many advantages, such as the easy method and operation, the cheaper expense and so on.?

　　Key words:The reagent red blood cells;The stability of cells;Immunological specificity;Reverse typing

　　临床输血用于血型反定型的试剂红细胞购置较困难，且保存期、运输等问题常常影响工作，自制的试剂红细胞效期短，红细胞抗原稳定性和免疫特异性及凝集效能不能保证，导致血型鉴定错误，甚至出现溶血性输血反应。笔者探索了一种效期长的红细胞保养液，并制备出试剂红细胞，2 ℃~8 ℃保存期达68 d，具有良好的细胞稳定性和免疫特异性。?

　　1　材料与方法?

　　1.1　红细胞保养液　枸橼酸0.66 g、枸椽酸钠5.48 g、磷酸二氢钠2.22 g、腺嘌呤0.26 g、肌苷0.22 g、甘露醇7.5 g、葡萄糖19.9 g、氯化钠8.35 g、EDTA?2NA 120 mg、叠氮钠40 mg、防腐防霉剂400 mg、稳定剂适量、水加至1 000 ml，用3%碳酸钠调至pH 7.2～7.4,高压灭菌。?

　　1.2　仪器　净化工作台、离心机。?

　　1.3　试剂　单克隆抗?A、抗?B血型定型试剂， 由长春博德生物工程有限公司提供，批号：20060223,质量控制符合要求，在有效期内使用。?

　　1.4　人源抗?A、抗?B、抗?AB血清　均由3个同型人全血等到量混合,分离血清而成,无不规则抗体。?
　　1.5　4%试剂红细胞　分别将3个A型、B型、O型抗凝血液等量混合，离心，吸出上层血浆，沉淀用生理盐水2 000 r/min离心10 min，重复2次，用红细胞保养液配成4%的A型、B型、O型试剂红细胞，置2℃～8℃冰箱保存。?

　　1.6　试剂红细胞抗原性测定　用单克隆抗?A、抗?B血清分别与试剂红细胞作凝集试验，观察凝集状况，凝集强度以4+、3+、2+、1+、-表示；从试剂红细胞制备之日起每周做细胞抗原性测定。?

　　1.7　试剂红细胞特异性测定　用人源抗?A、抗?B、抗?AB血清分别与制备的试剂红细胞作凝集试验，观察其凝集强度，记录结果；从试剂制备之日起每周做1次细胞特异性试验。?

　　1.8　对1263例体检者用各型试剂红细胞及单克隆抗?A、抗?B血清做ABO血型反正鉴定，对比检测结果。?
　　1.9　将制备的A型、B型、O型试剂红细胞赠送给西安市辖区83所(三级11所、二级60所、一级12所)临床应用，定期反馈结果。?

　　2　结果?

　　2.1　ABO试剂红细胞稳定性测定结果　本法制备的各型试剂红细胞与相对应的抗血清发生特异性凝集反应，与不对应的抗血清均无凝集；ABO试剂红细胞保存至68天时凝集效价降低。?

　　2.2　ABO试剂红细胞特异性结果　各型试剂红细胞只与对应人源抗?A、抗?B、抗?AB血清发生凝集反应，与人源抗?A、抗?B、抗?AB血清的凝集反应效价至62天时不变，63天时凝集强度降低，68天时明显降低。?
　　2.3　1 263例体检者ABO血型正反鉴定结果一致　见表1。?

　　表1　1 263例体检者ABO血型正反鉴定结果（略）

　　2.4　西安市辖区83所医院应用本法制备的试剂红细胞后反馈效果良好，与正定型结果一致。?

　　3　讨论?

　　为临床输血安全，在输血前进行血型鉴定时，用已知抗体(抗?A、抗?B血清)查红细胞表面抗原成分(正定型)和用已知抗原(试剂红细胞)来查血清中的抗体成分(反定型)，只有正、反定型结果一致的情况下，才能正确判断ABO血型；由于患者多次输血及妊娠等原因而自身产生许多有临床意义的抗体，必须用谱细胞(多抗原的细胞组)进行抗体筛查和鉴定，才能保证输血安全，然而用于血型反定型的试剂红细胞购买困难、效期短、运输问题常影响工作，有些小型医疗单位不做血型反定型，易出现由于红细胞抗原性减弱或红细胞有类B抗原时导致血型鉴定错误，出现溶血性输血反应。因此急切需要研究保存效期长，抗原性稳定，免疫特异性好的试剂红细胞。?本法制备的各型试剂红细胞与相对应的抗血清发生特异性凝集反应，与不对应的抗血清均无凝集；ABO试剂红细胞保存至68天时凝集效价降低；各型试剂红细胞只与对应人源抗?A、抗?B、抗?AB血清发生凝集反应，与人源抗?A、抗?B、抗?AB血清的凝集反应效价至62天时不变，63天时凝集强度降低，68天后明显降低；1 263例体检者ABO血型正反鉴定结果一致；西安市辖区83所医院应用本法制备的试剂红细胞后反馈效果良好，与正定型结果一致。该试剂红细胞可保存68 d，有较好的细胞稳定性和免疫特异性，基本满足临床需要，但只能保存68 d，与预期计划的120 d以上还有距离，笔者设想采用新的技术和方法研制效期限超过120 d～180 d的试剂红细胞，需要更深入探讨。?

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　　［1］李勇，杨贵贞.人类红细胞血型学实用理论与实验技术［Ｍ］．北京：技术出版社，1999：125?198.

　　［2］刘景田，张洁.红细胞免疫学［Ｍ］．西安：陕西科学技术出版社，1995：72?93.

　　［3］孙丽山，王一选.西安市临床输血管理有关问题的调查研究［Ｊ］．检验医学杂志，2005：20(5)：70?72.