肌氨酸氧化酶法检测血清中肌酐含量的方法学评价

关键词：肌酐；酶学测定；苦味酸法；血清 

　　［摘要］ 目的：评价肌氨酸氧化酶法(简称酶法)检测血清中肌酐含量的准确度、特异性和精确度。方法：在设制好参数的前提下，取样本，于日立7170全自动生化分析仪上，进行重复、回收、干扰等一系列试验，同时用苦味酸法(Jaffe法)进行相同实验，对比其结果。结果：酶法测定肌酐的批内变异系数(CV)为0.67%，批间CV为0.83%，线性范围0 μmol/L～8 840 μmol/L，胆红素(≥165.5 μmol/L)和溶血(Hb<1 g/L )干扰接近零，回收率为101.7%。准确度、精确度和特异性均较Jaffe法高。结论:酶法抗黄疸干扰力强，操作简单、准确、重复性好，可作为常规测定方法。
　　［关键词］ 肌酐；酶学测定；苦味酸法；血清
　　To Evaluate the Enzymatic Method for Assaying Creatinine in Serum
　　　　Abstract：Objective To evaluate the precise、accurate and specific of enzymatic method for assaying creatinine in serum. Methods Both Enzymatic method and Jaffe’s method were used in HITACHI7170A automatic analyzr. After the pare meter of it was build them compared those results. Results The method affords a simple. Rapid and sensitive assay with good precision, extended linearity much better in clinical needs. Conclusion The method is easily automated and is suitable for routine work in clinical laboratories.
　　Key words:Creatinine;Enzymatic assay;Jaffe’s assay;Serum
　　肌酐是肌酸代谢的最终产物，它是由磷酸肌酸通过脱磷酸基并闭合成环而形成的内脱水物。肌酐是肌肉组织代谢产物的废物，它仅仅由肾小球排泄，不被肾小管重吸收。因此，测定血清肌酐浓度及根据血清肌酐与尿酐浓度所得的肌酐清除率，是既简单又可靠的肾小球滤过功能的指标，深受临床重视。本实验采用酶法进行肌酐含量的检测，并与苦味酸法(Jaffe法)比较，前者所受干扰较小，准确性、重复性等较好。现将实验结果报告如下。
　　1　材料和方法
　　1.1　材料　研究对象,本院住院及门诊患者共100例，日立7170A全自动生化分析仪，胆红素标准液8 840 μmol/L、肌酐酶法和Jaffe法试剂盒，由四川迈克科技公司提供，按说明书操作。
　　1.2　方法
　　1.2.1　取血样本　按《全国临床检验操作规程》中介绍的常规法制备好血清。
　　1.2.2　酶法　按日立7 170 A仪器操作规程进行，将试验样本放检测盘，检测参数：T 37.0 ℃；分析方法：二点终止法；测定点：14~34；测定波长：(次/主)700 nm/505 nm；样本量：10 μl；稀释液：水。完成后，结果直接由打印机输出。
　　1.2.3　Jaffe法　按日立7 170 A仪器操作规程进行，将试验样本放检测盘，检测参数：T 37.0℃；样本量：20 μl； 试剂量：试剂1 120 μl； 测定波长：(次/主)700 nm/520 nm； 测定方法：速率法；反应斜率：“+”；反应线性: 30%；测定点：11~14；校正系数：1.0。完成后，结果直接由打印机输出。
　　2　结果
　　2.1　重复实验结果　见表1。
　　表1　酶法与Jaffe法重复实验结果（略）
　　2.2　回收实验　基础物质：1.8 ml血清、0.2 ml水，分析物质1为1.8 ml 血清、0.2 ml 676.6 μmol/L肌酐，分析物质2为1.8 ml 血清、0.2 ml 233.3 μmol/L肌酐，分别用酶法和Jaffe法检测，其结果为：酶法总回收率101.7%，Jaffe法总回收率95.4%。
　　2.3　干扰实验
　　2.3.1　胆红素干扰　基础物质S 0.9 ml 血清、0.1 ml水，分析物A1∶0.9 ml血清、0.1 ml 862 μmol/L总胆红素，分析物A2∶0.9 ml血清、0.1 ml 1 308. μ mol/L总胆红素，分析物A 3∶0.9 ml血清、0.1 ml1 655.2 μmol/L总胆红素，分析物A4∶0.9 ml血清、0.1 ml2 159.3 μmol/L总胆红素，分析物A5∶0.9 ml血清、0.1 ml2 635.0μ mol/L总胆红素。检测结果见表2。
　　表2　酶法与Jaffe法干扰实验测定结果（略）
　　2.3.2　酮体干扰　当血清酮体效价1∶32稀释阳性时，Jaffe法检测肌酐值偏高27 μmol/L～35 μmol/L［1］，而酶法不受干扰。
　　2.3.3　溶血干扰　标本机械溶血前后肌酐检测:中度溶血(Hb<1 g/L)对酶法无影响［2］。
　　2.4　准确度测定　取肌酐校标液(132.4 μmol/L)分别用酶法和Jaffe方法测定20次。结果见表4。
　　表3　酶法与Jaffe法测定肌酐校标液结果（略）
　　2.5　线性范围　酶法：0 μmol/L～8 848μmol/L；Jaffe法：0μmol/L～3 683 μmol/L。
　　3　结论
　　现在临床实验室对于血和尿中肌酐的测定常用酶法或Jaffe法。前者是利用肌酐在肌酐氨基水解酶、肌酸脒基水解酶、肌氨酸氧化酶、过氧化物酶等酶及显色剂和水、氧的共同作用下生成醌亚胺(红色)，在505 nm波长下测定其吸光度A，其A值的大小和样品中肌酐的含量成正比的原理而设计的。由于酶本身具有的特异性及高效性，肌酐氨基水解酐在反应中针对肌酐而不受其他物质的干扰，这使测定结果接近于真值。同时与Jaffe法进行比较，前者具有更好的重复性及精确度，且线性范围为0 μmol/L～8 848 μmol/L。而Jaffe法虽然试剂较便宜、重复性、准确性也较好，但易受血清中其他假性肌酐物质的干扰［5］。尤其是当血清胆红素值≥165.5 μmol/L时开始出现负偏差，而且血清胆红素越高偏差越大。此外，Jaffe法受到酮体、乳糜血和溶血的严重干扰,头孢类和维他命C及多巴胺等药物也使其结果出现较大干扰［6］，其线性范围也只是0 μmol/L～3 683 μmol/L,远不及酶法。而酶法则不受胆红素、乳糜、溶血、酮体、药物及高浓度氨的影响［2，4，6］。虽然近年来出现了多种改良Jaffe方法以减少假性肌酐物的干扰，但仍无法与酶法相比，且多复杂。据此我们认为采用酶法检测肌酐代替Jaffe法更适用于各型全自动生化分析仪及临床需要。
　　:
　　［1］　Dufour, D.R.Clinical Use of Laboratory Data,1999，10 :62?63.
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　　［6］　徐国宾,朱立华,夏铁安.用肌酐亚氨水解酶偶联谷氨酸脱氢酶的肌酐酶法测定,2001,19(3):149?151.