束缚应激对小鼠全血铁锌钙镁含量影响
作者：滕文锋，施丽飞，侯殿东，孙卫民，刘辉
【摘要】 目的 观察束缚应激后小鼠全血中铁、锌、钙和镁含量的变化，研究束缚应激对全血4种元素的影响和。方法 建立小鼠束缚应激模型，原子吸收分光光度法测定小鼠全血中铁、锌、钙和镁的含量。结果 对照组小鼠全血铁、锌、钙、镁含量分别为（391?20±16?01），（5?90±0?56），（59?44±10?71），（45?12±3?38）μg/ml；实验组小鼠全血铁、锌、钙、镁含量分别为（351?23±35?22），（5?05±0?70），（59?68±7?40），（43?99±4?31）μg/ml。与对照组比较，接受应激的小鼠全血中铁、锌含量显著降低（P＜0?05），钙含量略有升高，镁含量降低，但差异均无统计学意义（P＞0?05）。结论 束缚应激可使小鼠全血铁、锌含量显著降低；微量元素铁、锌与束缚应激反应之间存在一定的联系。
【关键词】 应激
应激是机体对各种外界应激原作用的反应，适度的应激是机体保护机制的一部分，有益于健康。但过度的应激往往成为疾病的诱因〔1〕。研究证实，应激能够影响动物和人体的免疫功能〔2，3〕。机体免疫系统功能的紊乱又是感染性疾病、肿瘤等发生或恶化的直接原因〔4，5〕。实验研究表明，应激可引起机体细胞因子、蛋白、酶等的变化〔6，7〕，而有关应激与元素之间关系的研究较少。铁、锌、钙和镁是人体中的必需元素，在人体生理生化过程中起着重要作用。因此，研究应激与元素之间的关系有重要意义。原子吸收光谱法具有灵敏度高、选择性好、精密度高、分析速度快等优点。本文采用原子吸收光谱法测定了束缚应激后小鼠全血中铁、锌、钙和镁4种元素的含量，旨在探讨束缚应激对全血中元素的影响。
1 材料与方法
1?1 动物与分组 选用32只健康C57BL/6纯系小鼠，体重20～25g，雌雄兼用，随机分为对照组和束缚组，每组16只。
1?2 应激模型的制备 应激模型的制备按［8］进行。将小鼠装入带有通气孔的可以限制其各个方向的束缚器中，室温下维持12h。正常对照组小鼠留置原饲养笼中正常饲养。实验期间2组小鼠均禁食禁水。
1?3 标本采集 解除束缚后恢复2h，摘除眼球采血，肝素抗凝。
1?4 全血元素含量测定
1?4?1 样品处理 取肝素抗凝血0?5ml用去离子水稀释定容,测定铁、钙、镁稀释100倍，锌稀释30倍。
1?4?2 标准溶液的配制 铁、钙、锌的工作液（100μg/ml）及镁的工作液（50μg/ml）分别由1mg/ml的铁、镁、钙、锌储备液稀释而成。用工作液稀释成不同浓度的标准溶液。标准溶液系列：铁标准溶液为1?0，2?0，3?0，4?0，6?0μg/ml；钙标准溶液为0?1，0?2，0?4，0?8，1?2μg/ml；锌标准溶液为0?05，0?1，0?2，0?3，0?4μg/ml；镁标准溶液为0?05，0?1，0?2，0?3，0?4μg/ml。
1?4?3 元素测定 用AA370MC原子吸收分光光度计测定样品中4种元素的含量，优化后的仪器工作条件为空气流量：7L/min；乙炔流量：1?7L/min；灯电流：铁和锌为6mA，钙和镁为4mA；狭缝宽度：铁为0?2mm,锌、钙和镁为0?7mm；波长：铁为248?3nm,锌为213?9nm,钙为422?7nm,镁为285?2nm。对标准溶液进行测定，绘制标准曲线，各元素线性关系良好。各元素回归方程为铁：C=13?83A-0?4848；锌：C=5?815A-0?02241；钙：C=16?13A+0?01452；镁：C=1?038A-0?02035。相关系数铁：0?9942；锌：0?9979；钙：0?9994；镁：0?9996。
1?5 统计分析 应用SPSS 10?0 统计软件进行分析，测得数据经SPSS?explore去除奇异值后得到有效数据（即分组时各组均为16只，去奇异值后有的少于16只）采用独立样本t检验分析2组差异，检验水平为P＜0?05。
2 结果
2?1 小鼠全血铁含量测定 应激后16只小鼠全血中铁含量为(351?23±35?22)μg/ml，与对照组〔15只小鼠结果为(391?20±16?01)μg/ml〕比较，显著降低，差异有统计学意义(P＜0?05)。
2?2 小鼠全血锌含量测定 应激后16只小鼠全血中锌含量为(5?05±0?70)μg/ml，与对照组〔15只小鼠结果为(5?90±0?56)μg/ml〕比较，显著降低，差异有统计学意义(P＜0?05)。
2?3 小鼠全血钙含量测定 应激后16只小鼠全血中钙含量为(59?68±7?40)μg/ml，与对照组〔16只小鼠结果为(59?44±10?7)μg/ml〕比较，钙含量略微升高，差异无统计学意义(P＞0?05)。
2?4 小鼠全血镁含量测定 应激后小鼠15只全血中镁含量(43?99±4?31)μg/ml，与对照组〔15只小鼠结果为(45?12±3?88)μg/ml〕比较，镁含量降低，差异无统计学意义(P＞0?05)。
2?5 实验组元素间相关分析 采用Pearson进行相关分析。元素间相关性分析结果表明，相关性Fe-Zn,Fe-Ca,Fe-Mg,Zn-Ca,Zn-Mg,Ca-Mg的r值分别为0?877，0?135，0?770，0?073，0?493，0?388；P值分别为0?000，0?617，0?001，0?788，0?062，0?153。
3 讨论
钙、镁都参与水盐代谢，对维持内环境的稳定有重要作用。应激可能通过影响这些元素的代谢，重新维持内环境的平衡〔9〕，这可能是本文中引起钙镁变化的原因。铁主要用于合成血红蛋白，构成各种金属酶的必需成分或活化某些金属酶和它的辅助因子，在机体运送氧和细胞内传递中发挥极其重要的作用。在应激条件下，肌肉处于紧张的运动，代谢率增加，耗氧量随之增加〔10〕，而运载氧及氧化磷酸化和三磷酸腺苷(ATP)的生成均需要大量铁的参与，这可能是血中铁水平下降的原因。锌是多种酶的组成成分，在激素的产生、储存和分泌中起着重要作用。有研究表明，锌有应激保护作用。其应激保护机制可能与其参与构成机体抗氧化防御系统有关。锌可能通过提高机体抗氧化能力来实现其应激保护作用〔11〕。有研究表明，应激会引起体内锌的损耗〔12〕。应激小鼠血中锌下降可能是因为应激机体对锌的需求量增加，血中锌转移到发挥其生理作用的靶器官。对4种元素进行相关性分析，发现铁与镁、铁与锌有显著的相关性，可能应激对铁与镁及对铁与锌的影响机制相同。综上分析，微量元素铁、锌在应激中有着重要作用，其具体机制有待进一步探讨。
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