乳腺癌雌、孕激素受体与PCNA表达
【摘要】 目的 探讨增殖细胞核抗原(PCNA)的表达与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)之间的相互关系及联合检测对乳腺癌术后内分泌方案制定和预测、预后的意义。方法 采用免疫组织化学链霉素生物蛋白过氧化物酶(S-P)法检测80例乳腺癌组织中PCNA、ER和PR的表达。结果 (1)80例乳腺癌组织中，ER、PR、PCNA的阳性表达率分别为65.0％,57?5％和63?75％。(2)乳腺癌有淋巴结转移组PCNA阳性表达率显著高于无淋巴结转移组(P<0.01)，且呈正相关(P<0.01)，即淋巴结转移程度越低,PCNA阳性表达率亦越低。(3)PCNA阳性表达率在乳腺癌ER与PR阴性组均明显高于乳腺癌ER与PR阳性组(P<0.01)，且均呈负相关(P<0?01)，即ER与PR阴性则PCNA阳性表达率高。结论 PCNA阳性表达率与ER、PR阳性或阴性结果有关，PCNA与ER、PR联合检测，可为乳腺癌术后内分泌治疗方案的制定和预测预后提供辅助依据。
【关键词】 乳腺癌
乳腺癌为妇女恶性肿瘤死因首位，其预后的判断及与预后相关的生物标志物的测定倍受关注。乳腺癌雌激素受体(Estrogen Receptor，ER)、孕激素受体(Progesterone Receptor，PR)水平是公认的估测乳腺癌患者预后和选择治疗方案的指标,而增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen，PCNA)是一种表达细胞增殖周期的36kd多肽，直接参与细胞增殖过程中DNA的复制，其表达程度能客观反映肿瘤细胞的增殖活性，过度表达增加了瘤细胞转移趋势的危险性，因此，认为PCNA也可作为判断乳腺癌预后的指标〔1〕。为分析乳腺癌激素受体状态及其与肿瘤细胞增殖活性之间的关系，肿瘤细胞增殖活性的强弱与乳腺癌生物学行为的关系，对80例乳腺癌同时检测PCNA、ER和PR的表达，探讨其相互关系及在评估预后上的意义。
1 对象与方法
1?1 对象 收集我院1992～2002年女性乳腺癌根治标本病理检查存档资料80例，年龄32～72岁，平均年龄48?46岁。全部资料经2位病理医师审核，患者术前未做过放、化疗。所有标本均经10％福尔马林固定，石蜡包埋，4μm连续切片。乳腺癌分类根据“常见恶性肿瘤诊治规范”分为非浸润性癌、早期浸润性癌、浸润性特殊癌、浸润性非特殊癌4类。
1?2 试剂 鼠抗人ER、PR，Ⅰ抗PCNApc10和链霉素生物蛋白过氧化物酶(S-P)试剂盒及过氧化物酶底物作用液二氨基联苯氨(Diaminobenzidine，DAB)(北京中山生物技术有限公司)；用己知乳腺癌组织阳性切片(中山公司赠)为阳性对照，用磷酸盐缓冲液(PBS)代替I抗做阴性对照。
1?3 方法 采用（S-P）法染色，按试剂盒说明书操作：二甲苯脱蜡，梯度酒精至水化后高压锅热处理5～8min，过氧化物酶阻断血清封闭，加I抗60min，磷酸盐缓冲液洗3次，每次2min；Ⅱ抗15min，磷酸盐缓冲液洗3次，每次2min;Ⅲ抗同Ⅱ抗。DAB显色5～10min，苏木素复染5～10s，脱水，透明胶封片。
1?4 结果判断 ER、PR阳性表达以细胞核内有棕色颗粒为阳性细胞，并根据着色程度和比例划分反应等级，≤30％为阴性，30％～40％为轻度阳性，40％～60％为中度阳性，>60％为重度阳性反应；PCNA以细胞核内出现清晰的棕色或棕黄色颗粒为阳性诊断标准，每例切片至少观察5个高倍视野。
1?5 统计分析 采用SPSS10?0 软件对各组ER、PR及PCNA阳性表达率进行χ2检验、Fisher确切概率检验和Kendall等级相关分析。
2 结果
2?1 乳腺癌ER、PR、PCNA的阳性表达率 80例乳腺癌中，ER、PR、PCNA的阳性表达率分别为65?0％(52／80)，57?5％(46／80)和63?75％(51／80)。
2?2 PCNA与乳腺癌淋巴结转移及组织类型的关系 在80乳腺癌标本中，有淋巴结转移52例，PCNA阳性表达率为75?0％(39／52)，无淋巴结转移28例，PCNA阳性表达率为42?0％(12／28)；有淋巴结转移组PCNA阳性表达率显著高于无淋巴结转移组(χ2=8?137,P<0?01)，且呈正相关(rs=0?293,P<0?01)，即淋巴结转移程度越低、PCNA阳性表达率亦越低。非浸润性癌、早期浸润性癌、浸润性特殊癌、浸润性非特殊癌组织类型与其PCNA阳性表达率［37?5％(3/8)，40?0％(4／10)，60?0％(6／10)，73?08％(38／52)］呈正相关(rs=0?286,P<0?05)，即肿瘤恶性程度越高，PCNA阳性表达率亦越高，但组织类型各组间差异无统计学意义(χ2=6?845,P>0?05)。
2?3 ER、PR与PCNA在乳腺癌中阳性表达的关系(表1) ER阴性组PCNA阳性表达率显著高于ER阳性组（P<0?01）；PR阴性组PCNA阳性表达率显著高于PR阳性组(P<0?01)；无论ER组或PR组均与PCNA阳性表达率呈负相关(P<0?01)，即ER或PR阴性表达则PCNA阳性表达率上升。
表1 ER、PR表达情况与PCNA阳性表达率关系（略）
注：*P<0?01;rs Kendall等级相关系数
3 讨论
乳腺作为女性激素的靶器官，其生长、发育和增殖均受女性激素的调控。通常激素依赖性乳腺癌占全部乳腺癌的50％～60％〔2〕。本研究结果的ER、PR阳性表达率分别为65?0％，57?5%，与此接近。另外，ER、PR阳性乳腺癌一般分化好、慢，进行内分泌有效率可达78％；ER、PR阴性乳腺癌则分化差、侵袭性强、恶性度高，进行内分泌治疗有效率仅为10％。因此，ER、PR受体的检测对判断乳腺癌的预后和指导内分泌治疗有重要意义。PCNA作为DNA聚合酶的辅助蛋白，直接参与细胞增殖过程中的DNA复制，其在DNA合成期开始升高，S期达到高峰，G2期开始下降，由于PCNA这一分布特点，故其表达程度能较客观地反映肿瘤细胞的增殖活性。有报道〔3〕，肿瘤细胞增殖活性高者，PCNA高表达，易发生淋巴结转移，说明PCNA过度表达增加了瘤细胞转移的危险性。本研究结果显示，PCNA阳性表达率在乳腺癌淋巴结有转移组与无转移组分别为75?0％和42?86％，差异有统计学意义(P<0?01)，且PCNA阳性表达率与淋巴结转移情况呈正相关(P<0?01)。PCNA阳性表达率在乳腺癌ER与PR阴性组均明显高于乳腺癌ER与PR阳性组(P<0?01)，且均呈负相关(P<0?01)，此结果与张喜卿〔4〕报道的结果一致。PCNA阳性表达率与乳腺癌组织类型间虽有一定的正相关趋势(P<0?05)，但各组间PCNA阳性表达率差异均无统计学意义(P>0?05);可能与本次研究样本量较少有关。总之，由上述结果可见，PCNA与ER、PR联合检测，可为乳腺癌术后内分泌治疗方案的制定和预测预后提供辅助依据。
【文献】
〔1〕 Takashima T，Onoda N，Ishikawa T，et al.Proliferating cell nuclear antigen labeling index and p53 expression predict outcome for breast cancer patients with four or more lymph node metastases［J］.Int J Med，2001，8(2)：159-163.
〔2〕 刘复生.肿瘤病［M］.北京：北京医科大学协和医科大学出版社，1997：1648-1649.
〔3〕 黄建康，陶仪声，马玲.乳腺癌中PCNA的表达及其临床意义［J］.解剖与临床，2005，10(2)：113-114.
〔4〕 张喜卿，张同全，孙明祥，等.乳腺癌C-erbB-2、PCNA的表达与激素受体的关系及其临床意义［J］.实用医技杂志，2005，12(7A)：1688-1690.
