卵巢上皮性肿瘤组织中PI3K和p?AKT蛋白的表达

【摘要】  　　目的： 探讨3羧基磷脂酰肌醇激酶（PI3K）和磷酸化蛋白激酶B（p?AKT）在上皮性卵巢肿瘤组织中的表达、相互关系及其意义. 方法： 应用免疫组化方法，检测20例正常卵巢、20例卵巢良性上皮肿瘤、60例卵巢癌组织中PI3K和p?AKT蛋白的表达. 结果： PI3K在卵巢癌组织中阳性表达率为58.3%，高于正常卵巢和良性上皮肿瘤组织的5%, 20%（P<0.01）. p?AKT在卵巢癌组织中阳性表达率为53.3%，高于正常卵巢和良性上皮肿瘤组织的10%, 20%（P<0.01）. PI3K和p?AKT蛋白表达与卵巢癌临床分期、病理分级、有无淋巴结转移和远处转移有关（P均<0.05），而与年龄、病理类型、有无腹水无关（P均>0.05）. 卵巢癌组织中PI3K和p?AKT蛋白间的表达呈正相关（rs=0.501, P<0.001）. 结论： AKT是PI3K的一个重要靶基因，PI3K/AKT信号传导通路异常活化与卵巢癌的发生、有关.

【关键词】  卵巢肿瘤 1?磷脂酰肌醇3?激酶 AKT

      0引言

    PI3K/AKT信号传导通路的异常活化可以使肿瘤细胞逃避凋亡，异常增殖分化，促进肿瘤血管新生和肿瘤发生. 已经发现在卵巢癌细胞中PI3K催化亚单位（P110）的扩增和AKT的变异. AKT的上游调节基因是PI3K，一旦PI3K激活AKT，AKT可磷酸化一些和细胞凋亡直接或间接相关的底物蛋白，促进卵巢癌的发生. 化疗药物可以通过PI3K/AKT途径使DNA修复及细胞产生调亡. 人们一直希望通过卵巢癌发生、发展分子机制的研究寻找新的靶基因，为此我们应用免疫组化方法探讨PI3K/AKT通路中PI3K和磷酸化AKT（p?AKT）在卵巢癌组织中的表达及相互关系，为进一步加深对卵巢癌发病机制的理解，并为卵巢癌的治疗提供新思路.

    1材料和方法

    1.1材料2000?01/2007?01手术切除和病理检查确诊的上皮性卵巢癌60例，其中浆液性囊腺癌37例，黏液性囊腺癌23例，年龄16～78（中位47）岁；正常卵巢组织20例，来源于同期因子宫肌瘤手术的标本；卵巢良性上皮性肿瘤组织20例，其中浆液性囊腺瘤12例，黏液性囊腺瘤8例. 上皮性卵巢癌按组织学分级分为：高分化（G1）15例，中分化（G2）22例，低分化（G3）23例；按FIGO(1988年)的分类标准,Ⅰ~Ⅱ期39例，Ⅲ~Ⅳ期21例. 有淋巴结转移者36例，无淋巴结转移者24例. 所有患者均为初发，术前均未接受过放化疗. 兔抗人PI3K多克隆抗体（工作浓度为1∶100），购自北京中杉金桥生物技术有限公司. 兔抗人p?AKT多克隆抗体（工作浓度为1∶50），购自美国CST公司.

    1.2方法免疫组化SP法. 每批染色均设阴性和阳性对照. 阴性对照采用磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗，阳性对照取PI3K和p?AKT表达阳性的乳腺癌组织的石蜡切片. 光学显微镜下随机选取5个视野，每个视野记数100个细胞，阳性细胞数占总细胞数的百分比，取5个视野的算术平均值. ① 根据显色细胞的比例计分：0分(显色癌细胞为0％)；1分(显色细胞<10%);2分(显色细胞10%～50%);3分(显色细胞51%～80%)；4分(显色细胞>80%). ② 根据细胞染色强度计分：0分(癌细胞无显色)；1分（浅黄色）；2分（棕黄色）；3分（黄褐色）. 积分=染色强度×阳性细胞数，积分范围0～12分，≥4分定义为阳性表达.

    统计学处理： 采用SPSS 10.0统计软件进行统计学分析. 采用统计学方法为χ2检验和Spearman等级相关.

    2结果

    2.1PI3K和p?AKT蛋白在卵巢组织中的表达PI3K和p?AKT蛋白在正常组和良性组的阳性表达率明显低于卵巢癌组（P<0.01）. PI3K的阳性表达为黄棕色或黄褐色均匀颗粒状，以胞质为主部分细胞核着色. p?AKT的阳性表达为黄棕色或黄褐色均匀颗粒状，细胞质着色.

    2.2PI3K和p?AKT表达与卵巢癌临床病理的关系PI3K和p?AKT蛋白表达与卵巢癌临床分期、病理分级、有无淋巴结转移和远处转移有关（P<0.05），而与年龄、病理类型和有无腹水无关（P﹥0.05，表2），而且两者相关（rs=0.501, P<0.001）. 表2PI3K和p?AKT蛋白的表达与卵巢癌临床病理的关系

    3讨论

    PI3K/AKT信号传导通路参与多种肿瘤的发生［1］. PI3K是异二聚体，由催化亚基（P110）和调节亚基（P85）组成［2］. AKT是位于PI3K下游的一个重要激酶，二者均是促进细胞生存和维持细胞正常功能关键的信息分子，并且构成细胞对外应激反应过程中促进细胞生长、抑制细胞凋亡和维持细胞重要功能的信号传递链. 有研究表明,P110α干扰RNA可以显著减少卵巢癌细胞的迁移、侵袭和增殖. PIK3CA在约80％的早期卵巢癌细胞和一些上皮性卵巢癌中表达增高. Levine等［3］在198例高分期卵巢上皮癌组织中对编码PI3CA高度保守区域进行基因测序，发现PI3CA在卵巢癌的发生中起重要作用. PI3K信号通路通过AKT和其他效应器起作用，参与了多种细胞的发生发展进程，包括细胞周期调整、细胞生存、细胞黏附和运动、血管发生、葡萄糖代谢的稳定等. AKT由氨基端的PH结构域、中间的激酶活性区及羧基端的尾部三部分构成. 目前已发现至少存在3种PKB家族成员：PKBα/β/γ(AKT?1/2/3) . Thr308和Ser473两个位点同时磷酸化是AKT活化所必需的. 许多刺激因子如生长因子、白介素等均可激活AKT. 卵巢癌组织中常有PKBβ基因扩增和过度表达以及PKBβ激酶活性的增高，且与卵巢癌的恶性生物学行为密切相关. 有研究证实PI3K和AKT2的频繁激活和（或）过度表达在卵巢癌中普遍存在［4］，导致细胞抵抗死亡或死亡延迟［5］. AKT活化促使肿瘤细胞对化疗药物和放射产生耐受［6］. 这表明AKT的活化可以抑制细胞调亡，进一步说明p?AKT参与卵巢癌的发展. 因此p?AKT可能和卵巢癌患者的预后有关，并可能为卵巢癌提供新的治疗靶点.

　　我们发现，PI3K和p?AKT蛋白在正常卵巢组织中的阳性表达率显著低于在卵巢癌中的表达，临床期别越晚、病理分级越高，蛋白阳性表达率越高. 两者的表达还与淋巴结转移、远处转移有关，而与患者的年龄、病理类型、有无腹水无关，提示PI3K和p?AKT与卵巢癌细胞的增生、转移、浸润及预后有关. 其机制可能与AKT通过激活其底物如增加细胞周期素D转录、还可以通过磷酸化P21使细胞周期加速，促进肿瘤发展有关. 总之，这些研究提示，抑制PI3K/AKT信号通路可能对癌症患者具有治疗价值.

【】
  ［1］郭瑞霞，魏丽惠. 磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号传导通路与妇科恶性肿瘤的研究进展［J］. 中华妇产科杂志，2005，40：358-360.

［2］Gao J, Flynn DC, Bellone S, et al. G1 cell cycle progression and the expression of G1 cyclins are regulated by PI3K/AKT/mTOR/p70S6K1 signaling in human ovarian cancer cells［J］.Am J Physiol Cell Physiol,2004,287:281-291.

［3］Levine D, Bogomolniy F, Yee C, et al. Frequent mutation of gene PI3KCA in ovarian and breast cancers［J］. Clin Cancer Res, 2005,11:2875-2878.

［4］Cheng J, Chou C, Kuo M, et al. Radiation?enhanced hepatocellular carcinoma cell invasion with MMP?9 expression through PI3K/Akt/NF?kappaB signal transduction pathway［J］. Oncogene,2006,25:7009-7018.

［5］Fresno A, Casado E, Castro J, et al. PI3K/Akt signaling pathway and cancer［J］.Cancer Treat, 2004,30:193-204.

［6］Vivanco I, Sawyers C. The phosphatidylinositol 3?Kinase AKT pathway in human cancer［J］.Nat Rev Cancer, 2002,2:489-501.