川芎嗪对大鼠实验性急性胰腺炎的作用

                                            作者：王成果, 马庆久, 鲁建国, 何显力, 王青, 杜锡林

【关键词】  胰腺炎；,血小板活化因子；,川芎嗪；,肿瘤坏死因子；,白细胞介素

　　Therapeutic effect of tetramethylpyrazine for experimental acute pancreatitis in rats

　　【Abstract】 AIM: To study the effect of tetramethylpyrazine (TMP) on inflammatory mediators during acute pancreatitis (AP) in rats. METHODS: A total of 96 SD male rats weighing 280-320 g were randomized into 3 groups: control group (n=24), AP group (n=36) and TMP group (n=36). The models of AP in the latter 2 groups were established by the injection of 35 g/L sodium taurocholate ip into the rats. The animals in the 3 groups were killed 3, 6, 12 and 24 h after operation to test the serum levels of plateletactivating factor (PAF), TNFα and IL6 in different phases. RESULTS: The serum levels of PAF, TNFα and IL6 of AP group significantly increased (P<0.01), and the serum  level of TNFα got to a peak at 6 h and the serum IL6 reached the highest level at 12 h after operation (P<0.01 vs control group). After TMP was used in AP rats, the serum levels of PAF, TNFα and IL6 were significantly decreased (P<0.05). CONCLUSION: TMP can inhibit inflammatory mediators and relieve the damages of the pancreas or lung in AP rats.

　　【Keywords】 pancreatitis; plateletactivating factor; tetramethylpyrazine; tumor necrosis factorα; IL6

　　【摘要】 目的：研究川芎嗪(TMP)对急性胰腺炎（AP）炎症介质的影响及其作用. 方法: 雄性SD大鼠96只，体质量280～320 g，随机分为对照组(n=24)，AP组(n=36)和TMP治疗组(n=36). 其中，AP组和TMP治疗组均利用大鼠AP模型，该模型采用ip 35 g/L牛磺胆酸钠方法建立，每组造模后又按3，6，12和24 h分为4个时间点. 分别在3个组的不同时间点抽血，检测血清中血小板活化因子(PAF), TNFα, IL6等水平的变化并进行分析. 结果: AP组各时段血清PAF，TNFα，IL6升高，其中PAF在各时段持续升高，TNFα在6 h时达高峰，而IL6在12 h达高峰，与对照组各个时段比较差异有统计学意义 (P<0.01)；用药后TMP治疗组在3，6，12和24 h 4个时间点血清PAF，TNFα，IL6的水平都可降低 ( P<0.05). 结论: TMP可抑制炎症介质，明显减轻胰腺/肺组织病理损害.

　　【关键词】 胰腺炎；血小板活化因子；川芎嗪；肿瘤坏死因子；白细胞介素6

　　0　引言

　　川芎嗪(tetramethylpyrazine，TMP)化学名为四甲基吡嗪，系从伞科蒿本植物川芎中分离提纯的一种生物碱单体，具有行气活血、散风止痛之功效，药理研究证实，TMP可抑制巨噬细胞、淋巴细胞及内皮细胞产生TNFα, IL6,IL8等炎性细胞因子和炎性递质等，阻止免疫复合物形成［1］. 而急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)是一种并发症多、病死率高的严重危害人类健康的疾病，其发病机制复杂，有多种因素和炎性因子参与，一些细胞因子及炎性递质在AP的发生中起重要作用［2-4］. 我们研究TMP对急性胰腺炎合并肺损伤大鼠炎症介质血小板活化因子(platelet activating factor, PAF), TNFα, IL6的影响,为该药在临床上治疗AP提供理论和实验依据.

　　1　材料和方法

　　1.1材料

　　雄性SD大鼠96只,体质量180～320 g, 由第四军医大学实验动物中心提供；动物实验前禁食12 h, 自由进水.注射用TMP购自北京第五制药厂；牛磺胆酸钠，PAF标准品购自美国Sigma公司；过氧化物酶检测试剂盒购自南京建成生物公司；大鼠IL6 ELISA试剂盒，TNFα ELISA试剂盒购自武汉博士德公司.

　　1.2方法

　　随机96只大鼠分为3组，对照组(n=24), AP组(n=36)和TMP治疗组(n=36). 对照组大鼠术前12 h禁饮食,采用氯胺酮1.5 mL/kg ip麻醉,仰卧固定,剪毛后常规消毒、铺巾，腹正中开腹，轻微刺激胰胆管后,关腹; AP组大鼠采用［5］的方法制备AP模型;TMP组大鼠造模后立即腹腔内注射TMP,注射量为80 mg/g，用生理盐水稀释成25 mL/L的TMP溶液.对照组及AP组均于术后腹腔内注射等量的生理盐水. 每组建模后又按3，6，12和24 h分为4个时间点. 3组大鼠分别在术后3，6，12和24 h麻醉后开腹，经下腔静脉抽血4～8 mL,不加抗凝剂,凝血后离心3000 r/min，18℃，10 min，取血清1.5～3 mL, -8℃保存,留待进行生物法检测PAF. ELISA检测TNFα和IL6,全自动生化仪检测血清淀粉酶.同步取胰腺组织和肺组织,部分制成组织匀浆,测定过氧化物酶的活性，部分用Bouin液固定，石蜡包埋、切片,HE染色，光镜下观察胰腺及肺的炎症病理变化.
　　
　　统计学处理：采用SPSS 12.0软件包进行统计分析，实验数据以x±s表示；组间比较用非参数秩和检验, P<0.05为差异有统计学意义.

　　2　结果

　　2.1血清淀粉酶活性AP组

　　血清淀粉酶显著升高,到12 h达高峰，与对照组相比较差异具有统计学意义(P<0.01)；TMP治疗组与AP组各时相段比较血清淀粉酶降低，差异有统计学意义，但仍高于对照组各时相段( P<0.05,表1).表1AP大鼠血清淀粉酶浓度的变化(略)

　　2.2胰肺组织过氧化物酶活性对照组

　　各时段胰腺及肺组织过氧化物酶活性相比较无统计学差异( P>0.05); 注射35 g/L牛磺胆酸后，AP组，TMP治疗组胰腺肺组织过氧化物酶活性升高，到12 h时达高峰，与对照组相比较有差异统计学意义( P<0.01)；给药后3,6,12和24 h时，TMP治疗组与AP组组间比较差异有统计学意义( P<0.05，表2).表2AP大鼠胰腺及肺组织过氧化物酶活性的变化(略)

　　2.3血清PAF,TNFα, IL6变化

　　AP组各时段血清PAF，TNFα, IL6升高，其中PAF持续升高，TNFα在6 h时达高峰，而IL6在12 h 达高峰，与对照组各时段比较差异有统计学意义( P<0.01)；TMP组与AP组给药后各时段比较，血清PAF，TNFα，IL6水平的降低程度差异有统计学意义( P<0.05, 表3).表3血清中PAF, TNFα, IL6水平变化(略)

　　2.4胰肺病理组织学

　　结果显示对照组大鼠胰腺/肺组织未见明显病理改变.AP组3 h后胰腺水肿加重，于12 h达高峰，腺泡呈孤岛样分布，片状出血坏死，大量多核粒细胞浸润；6，12 h肺以多核粒细胞增多为主，肺泡间隔增厚，可见少量红色蛋白渗出物，并可见肺泡壁破裂，肺间质充血、水肿、明显增宽，肺泡和肺间质中有大量的中性粒细胞浸润. 使用TMP治疗后，可显著减轻胰腺/肺组织的病理损害，红细胞浸出和炎性细胞浸润减少，水肿、出血、坏死减轻，表现为点状坏死.

　　3　讨论

　　AP的发病机制十分复杂，早期胰腺细胞损伤可导致局部的炎症反应，随着疾病进展，全身炎症反应综合征严重时可出现多脏器功能不全甚至多脏器功能的衰竭，病死率很高［6-7］.胰腺损伤后,除传统的胰酶在胰腺内被激活，引起自身消化外，多项研究发现胰腺腺泡释放多种受激活的胰酶及炎症细胞因子，有多种细胞的过度激活和相互作用，产生氧自由基和炎症介质引起胰腺的血管通透性增加，最后导致胰腺炎的发生.

　　药理研究证实，TMP能有效地抑制组织缺血时血小板聚集和活性，故能扩张外周血管,改善微循环,降低血液粘稠度，改善血流变，增加脏器微循环的血流［4］.最新的研究还发现［4］，TMP可抑制巨噬细胞、淋巴细胞及内皮细胞产生TNFα， IL6，IL8等炎性细胞因子和炎性递质等，阻止免疫复合物形成,抑制病菌生长.
　　
　　本研究结果显示,注射牛磺胆酸钠后，AP组各时段血清PAF，TNFα，IL6升高，其中PAF持续升高TNFα在6 h时达高峰，而IL6在12 h达高峰与对照组各时段比较差异有统计学意义(P<0.01)，说明胰腺损伤后胰腺腺泡产生氧自由基和炎症介质引起胰腺的血管通透性增加，最后导致了胰腺炎的发生和进展；用药后TMP治疗组与AP组相应时段比较差异有统计学意义(P<0.05)，说明TMP能够抑制血清PAF，TNFα，IL6等多种氧自由基和炎症介质的水平，减轻胰腺的病理损害.我们的研究结果提示，TMP可以通过减轻炎性因子变化阻止病变的继续，为该药在临床上治疗AP提供了理论和实验依据，对TMP在AP临床治疗具有一定的积极意义.但是, TMP减轻AP时炎性因子变化的具体机制还有待进一步研究探讨.

　　【】

　　［1］都本敏,荆进红. 川芎嗪的临床应用［J］.中西医结合杂志, 2006, 15(10): 1398- 1399.

　　［2］Komatsu K, Shimosegawa T, Uchi M, et al. Erythropoietic protoporphyria with severe liver dysfunction and acute pancreatitis ［J］. J Gastroenterol, 2000, 35（5）:391-395.

　　［3］史学深,方驰华,朱明德,等.重症急性胰腺炎大鼠DDFA对肺损伤细胞凋亡及Bax,Bcl2表表达的影响［J］. 第四军医大学学报,2006,27(12):1093-1096.

　　［4］AbuZidan FM, Bonham MJ, Windsor JA. Severity of acute pancreatitis: A multivariate analysis of oxidative stress markers and modified Glasgow criteria ［J］. Br J Surg,2000, 87（8）: 1019-1023.
 
　　［5］张群华,蔡瑞,吴树强,等.急性坏死性胰腺炎大鼠的炎性介质变化和生长抑素的作用［J］.中华医学杂志,1997,77（5）: 355-358.

　　［6］Hartwig W, Werner J, Jimenez RE, et al. Trypsin and activation of circulating trypsinogen contribute to pancreatitisassociated lung injury ［J］. Am J Physiol, 1999, 277(5): 1008-1016.

　　［7］Raraty MG, Connor S, Criddle DN, et al. Acute pancreatitis and organ failure: Pathophysiology, natural history and management strategies ［J］. Curr Gastroenterol Rep, 2004, 6(2): 99-103.