胃癌组织P53, P16和P73表达的意义

                                               作者：王伴青，肖凤，温永顺，唐和生，胡煜辉，廖义林

【关键词】  胃癌

　　【关键词】   胃肿瘤；腺癌；P53蛋白；P16蛋白；P73蛋白； 免疫组织化学

　　【摘要】  目的： 探讨抑癌基因P53, P16和P73在胃癌组织中的表达及其意义. 方法： 采用免疫组织化学SP法检测正常胃黏膜组织15例，不典型增生轻度20例，中度16例，重度12例，胃癌早期12例和42例进展期胃癌中P53, P16和P73蛋白的表达情况. 结果： P53, P16和P73蛋白在正常胃黏膜组织、不典型增生轻度、中度、重度、早期胃癌及进展期胃癌中阳性率分别为0, 100%, 6.7%; 0, 90.0%, 5.0%; 6.2%, 81.2%, 12.5%; 16.7%, 50.0%, 16.7%; 58.3%, 41.7%, 25.0%; 73.8%, 35.7%, 65.8%. 在正常胃黏膜至重度不典型增生的组织中，P53和P73蛋白呈低表达，其差异均无显著性意义（P＞0.05）；而两者在胃癌早期与进展期中的表达均具有显著性差异(P均＜0.05)，并且P53和P73蛋白表达与胃癌的分化程度和进展情况关系密切（P均＜ 0.05）； P73蛋白在胃癌组织中表达与P53蛋白表达呈正相关(r=0.341)；但P16蛋白的阳性率随着胃黏膜病变的进展而逐渐下降，P16蛋白在胃癌癌前病变与胃癌之间的阳性表达以及其在胃癌无转移组和转移组之间的表达均有显著差异(P＜0.05)，并与P53及P73的表达呈明显负相关系(r=-0.537, P＜0.01). 结论： P53蛋白的过表达及P16蛋白缺失在癌前病变向胃癌转变过程中起着重要的作用，综合分析P53, P16和P73蛋白表达有助于胃癌的早期诊断及其患者预后的估计.

　　0引言

　　胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发生是一个多因素和多阶段逐步演化的过程，该过程涉及多种原癌基因的激活和抑癌基因的失活. 我们应用免疫组化SP法检测正常胃黏膜、各级胃黏膜不典型增生、早期及进展期胃癌组织中P53, P16和P73蛋白表达，分析其与胃癌发生发展的关系.

　　1材料和方法

　　1.1材料

　　1996/2003年胃切除标本104例，胃镜活检标本15例，尸解10例. 其中，不典型增生轻度20例，中度16例，重度12例；胃癌组织66例，早期12例，进展期54例；无区域淋巴结转移28例，区域淋巴结转移38例,男性48例,女性18例,平均年龄51.4岁,高分化腺癌18例,中分化腺癌24例,低分化腺癌18例和未分化腺癌6例. 正常胃黏膜15例. 鼠抗人P53，鼠抗人多克隆抗体P16，鼠抗人多克隆抗体P73, DAB（棕黄色）及SP试剂盒均购自DAKO公司.

　　1.2方法

　　每例选取1～3张4 μm厚的切片行HE和免疫组化SP法染色.  染色步骤严格按试剂盒说明进行. 以已知阳性切片作阳性对照，以PBS液置换一抗作阴性对照. P53, P16和P73阳性细胞均为肿瘤细胞核或细胞质内呈棕黄色颗粒，其他部位出现棕黄色颗粒定为非特异性染色. 高倍镜下每张切片选取5个视野，每个视野计数100个细胞，其中阳性细胞数≥25%肿瘤细胞者为阳性(+),<25%为阴性表达.
   
　　统计学处理： 采用χ2检验及Ridit分析，P＜0.05表示差异有统计学意义.

　　2结果

　　P53, P73蛋白在正常胃黏膜、各级不典型增生胃组织中呈低表达（0～16.7%; 6.7%～16.7%）,而在胃癌早期与进展期中的阳性表达均具有显著性差异（P<0.01）, P53, P16和P73在胃癌组织中的阳性检测率分别为71.2%, 36.3%和57.6%，与患者年龄、性别无相关性；P53和P73表达与胃癌组织类型密切相关(P<0.01)，并与胃癌的浸润深度相关(P<0.05)，而P16的阳性表达与胃癌组织类型及浸润深度无相关性；3种基因蛋白表达均与淋巴结转移相关(表1).P53阳性表达与P73阳性（r=0.341, P<0.01)呈正相关，与P16阴性（r=-0.537, P<0.01)呈负相关.表1胃黏膜病变P53, P16, P73蛋白的表达（略）

　　3讨论

　　P53基因是细胞生长周期中负调节因子，我们发现，在所有正常胃黏膜、轻度不典型增生的胃黏膜组织中，P53蛋白均不表达，在中、重度不典型增生分别仅有1例和2例表达，但在早期胃癌中P53的表达显著高于中、重度不典型增生，并随着胃癌进展，P53的表达明显增高，提示P53蛋白的过度表达在胃黏膜细胞癌变过程中起重要作用，并与胃癌进展有关. P16基因是一种新型抑癌基因，我们发现，所有正常胃黏膜均表达P16蛋白，随着胃黏膜病变进展，P16蛋白表达率逐渐下降，至进展期胃癌表达率达最低点. 另外，淋巴结未转移组的P16蛋白表达阳性率（51.6%）显著高于淋巴结转移组（23.8% ）,提示胃癌组织中P16蛋白的表达与淋巴结转移状况有关，与刘新兰等［1］报道基本一致. P73基因是新抑癌基因. 我们发现P73蛋白在正常胃黏膜以及胃癌癌前病变中均呈低表达（6.7%~16.7%），而早期胃癌（25.0%）与进展期胃癌(65.8%)相比，具有显著性差异(P<0.05)；淋巴结转移组的P73蛋白表达阳性率明显高于淋巴结未转移组，分别为73.7%和35.7% (P<0.01)；低、未分化胃癌分别为72.2%和100%，明显高于高分化胃癌（28.0%），提示P73蛋白阳性率越高，胃癌的恶性程度就越高，就越易发生淋巴结转移，其结果与［2］报道较一致. 因此，临床上联合检测P53, P16和P73蛋白表达，可较为准确监测胃黏膜的病变状况以及判断胃癌恶性程度和估计其预后.

　　【文献】

　　［1］ 刘新兰，秦景，吕怀盛，等. 胃癌组织P16基因蛋白表达的意义［J］. 第四军医大学学报, 2002,23(4):351-354.

　　［2］  Mutl GL, Lin MC, Fitzgerald JT, et al. Altered PTEN expression as a diagnostic marker for the earlist endometrial precancers ［J］ . J Natl Carcer Inst, 2000,92(11):924-930.