芦荟对小鼠恶性腹水模型的影响

来源:岁月联盟 作者: 时间:2010-07-12
                   作者: 陈丽宏,路凡,沈新,陈葳,李旭,黄剑峰,杨春荣

【关键词】  恶性腹水

    Effect of Aloe on rat models of malignant ascites

  【Abstract】  AIM: To investigate the effect of Aloe, a kind of traditional Chinese drug, on the rat models of malignant ascites. METHODS:  The malignant ascites model of Balb/c rat was induced by S180 cells and then was treated with the different doses of whole leaf, gel and peel of Aloe for 2 weeks. The therapeutic effect was evaluated by comparing the change of rat body mass, protein content in ascite and changes of S180 cell cycle in the rats. RESULTS:  The Aloe delayed the rapid increase of the body mass in rat models(P<0.05)and decreased the albumin in ascites(P<0.05). The analysis of cell cycle displayed that the G1 phase cells were decreased and the S phase cells were increased in the Aloe treatment group compared with those in the blank group. CONCLUSION:  Aloe showsa great potential in the treatment of malignant ascites.

  【Keywords】  Aloe;  mice, inbred BALB C; malignant ascites; cell cycle

  【摘要】 目的: 探讨中药芦荟对小鼠恶性腹水模型的影响.  方法: 将S180细胞接种于Balb/c小鼠腹腔,制备小鼠恶性腹水模型;分别用芦荟全叶汁、凝胶汁、皮汁的不同剂量组灌胃2 wk,同时设阳、阴性对照;检测治疗前后小鼠的体质量、腹水蛋白质含量的变化,用流式细胞仪分析腹水中S180细胞的细胞周期变化.  结果: 芦荟全叶汁、凝胶汁、皮汁的高、低剂量组均可使模型小鼠体质量的快速增长减缓(P<0.05)、腹水中白蛋白含量减少(P<0.05);S180细胞周期中: G1期细胞减少,S期细胞增多,与未治疗组比较有统计学差异(P<0.05).  结论: 芦荟对恶性腹水的治疗有良好的应用前景.

  【关键词】 芦荟;小鼠,近交BALB C;恶性腹水;细胞周期

  0引言
    
  芦荟是百合科多年生、常绿、肉质草本植物. 作为一种天然药用植物,具有杀菌、抗炎、免疫、抗肿瘤、解毒等多种作用. 恶性腹水可出现腹胀、胃纳下降,甚至呼吸困难等症状.  本文旨在探讨芦荟对恶性腹水的影响,以探讨芦荟对治疗恶性腹水的可能性.

  1材料和方法

  1.1材料

  S180肉瘤细胞株(腹水型肉瘤细胞),西安大学第一分子生物学中心提供,常规在体培养传代,定期抽取腹水,离心弃上清后加入冻存液,液氮冻存. Balb/c小鼠48只,全部为雌性,体质量18~22 g,由第四军医大学实验动物中心提供. 环磷酰胺,由上海华联制药有限公司生产,批号: 000211. 芦荟凝胶汁,将芦荟鲜叶清洗后在无污染条件下剥皮,剥皮后的凝胶捣碎、减压过滤,取过滤液备用. 芦荟皮汁,将芦荟鲜叶清洗后在无污染条件下剥皮,取皮层捣碎、减压过滤,保留过滤液备用. 芦荟全叶汁,将芦荟凝胶汁和芦荟皮汁均匀混合. 日立7170型全自动生化分析仪,西安交通大学第一医院检验中心提供,用于蛋白测定. 流式细胞仪,美国Colllter公司生产,西安交通大学第一医院分子生物学实验中心提供,用于细胞周期测定.

  1.2方法

  1.2.1小鼠恶性腹水模型将S180肉瘤细胞复苏后用生理盐水稀释成1∶4的混悬液,无菌条件下注射到小鼠腹腔,每鼠注入0.2 mL,制备小鼠恶性腹水模型.

  1.2.2灌胃小鼠腹腔注射S180肉瘤细胞3 d后给与灌胃治疗. 将48只Balb/c小鼠随机分为全叶汁高剂量组(A1组),全叶汁低剂量组(A2组),凝胶汁高剂量组(B1组),凝胶汁低剂量组(B2组),皮汁高剂量组(C1组),皮汁低剂量组(C2组),药物对照组(D组)和空白对照组(E组)共8组,每组6只. A1亚组、B1亚组、C1亚组分别灌服芦荟凝胶汁、芦荟皮汁和芦荟全叶汁,20 mg/kg;A2亚组、B2亚组、C2亚组分别灌服生理盐水稀释过的芦荟凝胶汁、芦荟皮汁和芦荟全叶汁(生理盐水占2/3,芦荟浸出液占1/3),20 mg/kg;D组灌服环磷酰胺,20 mg/kg,E组灌服生理盐水,20 mg/kg,均为1次/d, 14 d.

  1.2.3指标15 d时处死小鼠,称量体质量. 无菌条件下抽取腹水,一部分用全自动生化分析仪测定蛋白总量、白蛋白、球蛋白、A/G比值. 另一部分用流式细胞仪检测: 1000 r/min离心5 min,弃上清;3 mL PBS洗涤1次,离心去除PBS;加入冰预冷的700 mL/L的乙醇固定,4℃, 1~2 h;离心弃去固定液,3 mL PBS重悬5 min;400目的筛网过滤1次,1000 r/min离心5 min,弃去PBS;用碘化丙啶(PI)染液1 mL染色,4℃避光30 min;上机检测腹水中S180细胞的细胞周期.
 统计学处理: 实验结果采用完全随机设计的方差分析,均数两两比较采用Dunnett检验. 以α=0.05为检验水准,通过SPSS 11.5数据统计软件结果.

  2结果

  阴性对照组小鼠自接种S180肉瘤细胞后腹水快速增长,有液波感,呈现腹围增大、少动、皮毛枯燥、精神萎靡等症状. 其余各组小鼠接种后腹围也增大,触之有液波感;给与药物灌胃后腹围增大不明显甚至有所减小,日常行为未见明显异常,皮毛顺滑. 芦荟对小鼠恶性腹水模型治疗后的平均体质量有一定影响(表1). 灌注不同剂量的芦荟浸出液,模型小鼠腹水中的总蛋白、白蛋白含量较空白对照组均显著降低,而灌注环磷酰胺后,模型小鼠腹水中只有白蛋白有较明显变化(表2). 对小鼠恶性腹水中S180细胞的细胞周期均有影响(表3).表1芦荟对小鼠体质量的影响(略)表2芦荟对小鼠恶性腹水中蛋白的影响(略)表3芦荟对小鼠恶性腹水中细胞增殖状态的影响(略)

  3讨论

  恶性腹水作为常见的肿瘤并发症,是临床上一直困扰着人们的难题,一旦出现腹水多数已属晚期,治疗困难. 患者可出现腹胀、胃纳下降,甚至不能平卧和出现呼吸困难等症状. 目前治疗方法常采用腹腔穿刺抽腹水,虽然立即改善症状,但不能去除病因,很快又产生更多的腹水,并非长久之计. 化学药物治疗、放射治疗和免疫治疗. 常用的药物有环磷酰胺、顺铂、卡铂、5氟脲嘧啶、丝裂霉素、平阳霉素、阿霉素、米托蒽醌、依托泊苷、紫杉醇等,还有干扰素、白细胞介素2、肿瘤坏死因子等. 但这些药物/射线在杀死肿瘤细胞的同时,无选择性的杀死正常细胞,特别是造血组织细胞,常常导致机体发生严重并发症. 全身放化疗毒性大,往往使治疗无法进行或被迫中断;腹腔化疗常诱发化学性腹膜炎,形成粘连使药物作用局限而影响疗效. 这种无法回避的甚至是致死性的毒副作用限制了放疗/化疗的广泛应用. 而免疫治疗疗效有限. 所以,国内外学者不断探索新的药物,试图发现一种对恶性腹水安全、有效的治疗方法.

  芦荟作为天然药用植物,临床广泛用于治疗刀伤、烫伤等[1]. 芦荟至少含有140多种成分,已经研究清楚的化学成分大约有70多种,包括碳水化合物、蒽醌类化合物、酶(多肽)和氨基酸、维生素、甾体类化合物以及其他化合物. 芦荟所含的碳水化合物中具有重要活性的是多糖. 多糖是芦荟中凝胶的构成成分,对国产芦荟的研究发现,其多糖主要为β(1→4)连接的甘露聚糖,在2,3或6位上部分乙酰化. 众多研究表明[2-7],芦荟多糖主要通过有效激活免疫细胞、调节机体免疫力而抑制肿瘤,而不像一般化学药物那样直接杀死肿瘤细胞,对正常细胞没有直接毒副作用,是一种非常有用的生物反应调节因子(BRM). 其次,多项研究指出[8-9],芦荟所含的蒽醌类化合物也具有抗肿瘤作用. 有研究以L929为靶细胞测芦荟蒽醌类衍生物的杀伤活性,得知芦荟蒽醌类衍生物在0.3 mg/L浓度对L929细胞杀伤活性(CT值)仍达50%以上,对动物肿瘤细胞和人类肿瘤细胞均具有很强的杀伤作用. 另外,芦荟中的植物血凝素(alotin A)也可通过提高机体的免疫力而抗肿瘤[10]. 从木力芦荟中分离出来的aloctin A可通过提高淋巴细胞的促有丝分裂活性、补体C3激活活性而抗肿瘤. 另有报道aloctin A能增加脾细胞和腹膜渗出细胞的细胞毒性,增强脾细胞分泌IF2的能力,增强NK细胞的活性,保护T淋巴细胞的功能,增强细胞毒性T细胞对多发性骨髓瘤MM102细胞的杀伤力.

  环磷酰胺为目前广泛应用的抗癌药物,抗瘤谱广,对多种肿瘤有抑制作用. 在体外无活性,进入体内被肝脏或肿瘤内存在的过量的磷酰胺酶或磷酸酶水解,变为活化作用型的磷酰胺氮芥而起作用. 其作用机制与氮芥相似,与DNA发生交叉联结,抑制DNA的合成,也可干扰RNA的功能,属细胞周期非特异性药物.

  我们研究了芦荟对恶性腹水的治疗作用,并与环磷酰胺进行了对比,结果表明:芦荟皮汁、凝胶汁、全叶汁均可明显降低恶性腹水小鼠体重的快速增加、降低腹水中白蛋白含量,并可使恶性肿瘤细胞生长停止于细胞周期的S期,从而抑制恶性腹水的生长,达到对恶性腹水的治疗作用,且对正常细胞没有直接毒副作用,与环磷酰胺等细胞周期非特异性药物的作用机制不完全一样,因此本研究提示芦荟有助于临床恶性腹水的治疗,具有良好的应用前景,具体的作用机制尚待进一步研究.

  【】

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