卵裂球的存活状况对冻融胚胎种植率的影响

              作者：罗亚宁，王晓红，李丽，杨艳红，黄剑磊，张远强，姚元庆

【关键词】  冻融胚胎；卵裂球存活；胚胎移植；种植率

　　Impact of blastomere survival on implantation rate of frozenthawed embryo transfer

　　【Abstract】 AIM: To study the impact of blastomere survival on the implantation rate of frozenthawed embryo transfer (FET). METHODS：We conducted a retrospective analysis of 134 FET cycles from September 2003 to September 2005. According to blastomere survival rates, all FET cycles were categorized into 3 groups: group A (n=46) included cycles in which all their original blastomeres remained intact；group B (n=65) refered to mixed transfer of fully intact embryos together with partially damaged ones；group C (n=23) was composed of all transferred embryos with partially damaged blastomere. RESULTS:  Out of 642 thawed embryos, 455 survived, survival rate being 70.8%. The pregnancy rate was 24.6% per FET cycle. The pregnancy rate and the implantation rate of group A, B,and C were respectively 34.7% and 18.5%, 23.1% and 8.2%, 8.7% and 3.8%. There was a significantly higher implantation rate in group A than in group C（P<0.05）. Along with the increase of intact embryos in FET cycles (0, 1, 2, 3), there was a significant increase in the pregnancy rate （8.7%， 15.0%， 31.4%， 38.9%） and the implantation rate（3.8%， 6.1%， 16.2%， 18.5%, P<0.05）. CONCLUSION：Blastomere survival status is a most important factor influencing the implantation rate of frozenthawed embryo transfer.

　　【Keywords】 frozenthawed embryo；survival blastomere；embryo transfer；implantation rate

　　【摘要】 目的：观察冻融胚胎卵裂球存活状况与冻融胚胎种植率的关系. 方法：对134个冻融胚胎移植周期进行回顾性分析. 根据冻融胚胎移植周期中卵裂球存活状况分为3组：A组(n=46)为所有移植胚胎卵裂球全部存活；B组(n=65)为混合移植；C组(n=23)为所有移植胚胎均有卵裂球受损. 结果：在134个FET周期中，共解冻胚胎642个，复苏胚胎455个. 有33个周期获临床妊娠，每个冻融胚胎移植周期的临床妊娠率为24.6%. A组的临床妊娠率和种植率为34.7%和18.5%，B组的临床妊娠率和种植率为23.1%和8.2%，C组的临床妊娠率和种植率为8.7%和3.8%. A组种植率明显高于C组（P<0.05）. 随着移植胚胎中含100%卵裂球存活胚胎数的增加（0，1，2，3），其临床妊娠率（8.7%，15.0%，31.4%，38.9%）和种植率（3.8%，6.1%，16.2%，18.5%）均明显增加（P<0.05）. 结论：卵裂球的存活状况是影响冻融胚胎种植率的重要因素.

　　【关键词】 冻融胚胎；卵裂球存活；胚胎移植；种植率

　　0引言

　　自从人类冻融胚胎移植技术取得临床妊娠成功以来［1］，冻融胚胎移植已广泛应用于人类辅助生殖技术领域. 特别是在目前为了降低多胎妊娠的发生，减少了新鲜胚胎移植回子宫的数目，胚胎冻融技术在保持每取卵周期妊娠率方面发挥了非常重要的作用. 在胚胎冻融过程中经常会观察到卵裂球受损的现象，在临床实践中，也往往移植部分卵裂球受损的胚胎. 本研究回顾性地比较了移植卵裂球存活状况不同的各组，在新鲜取卵周期以及冻融胚胎移植周期的特点，观察卵裂球的存活对冻融胚胎移植周期种植率的影响.

　　1材料和方法

　　1.1材料200309/200509间进行冻融胚胎移植134个周期（胚胎来自106例不孕症患者的新鲜取卵周期），根据冻融胚胎移植周期中卵裂球存活状况分为3组：A组46个周期为所有移植胚胎卵裂球全部存活；B组65个周期为混合移植；C组23个周期为所有移植胚胎均有卵裂球受损.

　　1.2方法这106例不孕症患者接受体外受精或单精子卵母细胞浆内显微注射（intracytoplasmic sperm injection，ICSI）技术的促超排卵、取卵、体外受精、胚胎培养和移植均按本中心操作常规进行，剩余的胚胎采用程序化慢速冷冻法保存. 在冻融胚胎移植周期中采用快速法解冻胚胎［2］. 有一半以上的卵裂球存活的胚胎定义为存活胚胎，才可以移植. 于移植后15 d查尿或血HCG，若阳性则于停经7 wk行B超检查，见孕囊及原始心管搏动诊断为临床妊娠，继续随访至妊娠结束.

　　统计学处理：采用SPSS 10.0软件对数据进行处理，方差分析和χ2检验. P<0.05为有统计学差异.

　　2结果

　　2.1FET134个FET治疗周期，年龄(31.4±3.2)（23~40)岁，不孕时间(6.0±3.0)（1~15) a. 解冻胚胎642个，复苏胚胎455个，胚胎复苏率为70.8%. 每周期移植胚胎数(2.7±0.6)（1~3)个）. 临床妊娠33例，临床妊娠率为24.6%（33/134）.

　　2.2新鲜取卵周期基本情况新鲜取卵周期中年龄、继发不孕比例、不孕原因、不孕时间、取卵数、2PN数、胚胎数、冷冻胚胎数等情况均无差异（表1）.

　　表1新鲜取卵周期基本情况（略）

　　2.3冻融胚胎移植周期中影响因素三组在每周期解冻胚胎数、平均内膜厚度等因素上无差异（P>0.05）. 而在复活胚胎数、存活率、平均移植胚胎数、种植率上有显著性差异（P均<0.05，表2）.

　　表2冻融胚胎移植周期中影响因素（略）

　　在三组数据进行方差分析后，再作两两比较分析，显示：AC组间在复活胚胎数、存活率、移植胚胎数、种植率上有显著性差异；BC组间在复活胚胎数、ET胚胎数上有显著性差异；AB组间在复活胚胎数、移植胚胎数、种植率、临床妊娠率上均没有显著性差异.

　　2.4移植全部卵裂球存活胚胎个数与临床妊娠率随着移植胚胎中含100%卵裂球存活胚胎数的增加（0，1，2，3），其临床妊娠率为8.7%，15.0%，31.4%，38.9%；种植率为3.8%，6.1%，16.2%，18.5%（P均<0.01）. 每周期移植2-3个全部卵裂球存活胚胎组的临床妊娠率、种植率显著高于移植0~1个全部卵裂球存活胚胎组（P<0.01）.

　　3讨论

　　我们研究表明，卵裂球的存活状况是影响冻融胚胎移植周期种植率的重要因素. 移植100%卵裂球存活胚胎组的种植率显著高于移植全部为受损胚胎组. 与既往的研究结果相似［3-5］. 虽然本组FET的临床妊娠率较低（24.6%），但移植100%卵裂球存活胚胎组的临床妊娠率（34.7%）与本中心新鲜周期的临床妊娠率（36.5%）相近. 并且随着移植胚胎中含100%卵裂球存活胚胎数的增加，其临床妊娠率、种植率相应增加. 全部为受损胚胎组与其相比较，在解冻胚胎数无显著差别的情况下，复活胚胎数、ET胚胎数明显减少，差别显著. 此结果也说明在冻融过程中，卵裂球的存活状况对冻融胚胎移植临床结局有非常重要的影响.

　　人类胚胎在8细胞以前，被认为是全能的，在目前的胚胎种植前遗传学诊断（PGD）中，通常在8细胞期胚胎中取出1~2个卵裂球进行基因检测，排除致病基因的胚胎后,将正常的已去掉1~2个卵裂球的胚胎移植回母体，已有近千名健康婴儿出生，表明PGD是安全的，经证实的. 但是为什么FET周期中卵裂球受损会影响种植率、临床妊娠率呢？有学者研究提示：受损卵裂球的毒性作用会阻碍其余存活卵裂球的进一步发育. 这个毒性作用会是新陈代谢方面或者是机械性的损伤或者是细胞骨架的解体而导致死亡［6-7］. 许多动物和人类的研究支持这一毒性作用理论：在老鼠胚胎的研究报告证实部分受损胚胎经去除这些坏死部分后，其发育能力和进一步孵出的能力将重新恢复. 在人类胚胎中，去除这些坏死部分后，可以明显提高部分受损冻融胚胎的种植率［8-9］. Archer研究显示，<50%卵裂球受损组囊胚形成率为25%，晚期囊胚细胞数为45；而卵裂球完整组囊胚形成率为41%，晚期囊胚细胞数为58.4. 两组比较相差显著（P<0.01）. 说明卵裂球受损组是由于囊胚形成率降低，晚期囊胚细胞数减少，从而导致了种植率降低.

　　在冻融过程中，得到 100%存活卵裂球是非常重要的. 一方面，应该进一步改良冷冻、解冻方案，找到卵裂球在冷冻解冻过程脱水和保护剂的平衡点及最合适剂量的冷冻解冻保护剂及最合适的冷冻解冻速率，以达到卵裂球最大限度地存活. 另一方面，对于卵裂球部分受损的胚胎，应尽量去除这些坏死部分，减少其对胚胎的潜在毒性作用，同时也为细胞再次分裂腾出空闲的空间［8］.

　　【】

　　［1］ Testart J，Lassalle B，BelaischAllart J，et al. High pregnancy rate after early human freezing［J］. Fertil Steril, 1986,46(2): 268-272.

　　［2］  王晓红，罗亚宁，李丽，等. 人类冻融胚胎移植技术的临床应用［J］.第四军医大学学报，2005，26（16）：1503-1505.

　　［3］  Guerif F，Bibault R，Cadoret V，et al. Parameters guiding selection of best embryo for transfer after cryopreservation: a reappraisal［J］. Hum Reprod, 2002, 17(5): 1321-1326.

　　［4］  ElToukhy T，Khalaf Y，AlDarazi K，et al. Effect of blastomere loss on the outcome of frozen embryo replacement cycle［J］. Fertil Steril, 2003, 79(5):1106-1111.

　　［5］ 周颖，黄学锋，林金菊，等. 冻融胚胎复苏状态对移植周期临床结果的影响［J］. 生殖医学杂志, 2003, 12(5):279-282.

　　［6］  Van den Abbeel E，Camus M，Van Waesberghe L，et al. Viability of partially damaged human embryos after cryopreservation［J］. Hum Reprod,1997,12 (9):2006-2010.

　　［7］  Van den Abbeel E，Van Steirteghem A. Zona pellucida damage to human embryos after cryopreservation and the consequences for their blastomere survival and invitro viability［J］. Hum Reprod, 2000,15 (2)： 373-378.

　　［8］  Rienzi L, Ubaldi F, Iacobelli M,et al. Developmental potential of fully intact and partially damaged cryopreserved embryos after laserassisted removal of necrotic blastomeres and postthaw culture selection［J］. Fertil Steril, 2005, 84(4):888-894.

　　［9］  刘伟信，黄萍，王丽，等. 去除人类冷冻胚胎中坏死细胞对其移植结局的影响［J］. 实用妇产科杂志，2005，21（2）：99-102.