宫颈癌同步放化疗前后HPV DNA及TNF

【关键词】  中晚期宫颈癌；同步放化疗；HPV；TNF

　　Changes of  HPV DNA and TNFα levels in patients with advanced cervical cancer before and after concurrent chemoradiotherapy

　　【Abstract】 AIM: To analyze the changing of HPV DNA in cervical secretions and serum TNFα level in patients with advanced cervical cancer before and after concurrent chemoradiotherapy. METHODS: The level of HPV DNA was tested by HC2 and TNFα by ABCELISA in 30  patients with advanced cervical cancer(reseach group) before and after chemoradiotherapy and 20  healthy women as the controls. RESULTS: The HPV infection rate before treatment(96.7%) was higher than that after treatment (20%) and  in normal controls(10%). The negative conversion rate at the end of treatment  was 79.3%(23/29). The levels of serum TNFα before and after chemoradiotherapy ［(134.15±77.99) and (113.14±79.99) pg/mL respectively］were both higher than that in normal controls［(54.91±13.19) pg/mL, P<0.01］. Serum TNFα levels had no significant difference between pretreatment and posttreatment (P>0.05), but a tendency of decreasing existed. CONCLUSION: The detection of HPV DNA in cervical secreations and serum TNFα might be useful reference indexes for diagnosis and judging prognosis or curative effect.

　　【Keywords】 advanced cervical cancer; chemoradiotherapy; human papilloma virus; tumor necrosis factor α

　　【摘要】  目的： 观察中晚期宫颈癌患者同步放化疗前、后宫颈分泌物HPV DNA及血清TNFα含量的变化趋势. 方法： 采用第二代杂交捕获技术(HC2)和双抗体夹心ABCELISA法检测30例中晚期宫颈癌患者（实验组）同步放化疗治疗前、后宫颈分泌物HPV DNA及血清TNFα的含量，并与20例健康妇女作对照（健康对照组）. 结果： 实验组治疗前宫颈分泌物HPV DNA阳性率为96.7%，显著高于健康对照组（10%）；治疗后HPV DNA阳性率20%(P＜0.01），转阴率为79.3%（23/29）. 实验组治疗前血清TNFα含量为（134.15±77.99）pg/mL，治疗后为（113.14±79.99）pg/mL，均显著高于健康对照组（54.91±13.19）pg/mL，P＜0.01. 实验组治疗后血清TNFα含量与治疗前比较无显著差异(P＞0.05)，但有下降趋势. 结论： 检测子宫颈癌患者宫颈分泌物HPV DNA及血清TNFα的含量，可作为宫颈癌辅助诊断，判断治疗效果和预后的指标.

　　【关键词】 中晚期宫颈癌；同步放化疗；HPV；TNFα

　　0引言

　　高危型HPV生殖道持续感染是宫颈癌发生的致病因素，HPV DNA在检测宫颈癌和筛查中的作用也得到了肯定［1］，但其在病情监测中的作用却少见相关报道. 肿瘤坏死因子是一种肿瘤杀伤因子，与机体的免疫反应有关. 有报道称宫颈癌患者的血清TNFα含量与HPV感染相关［2］. 本研究旨在通过检测宫颈癌患者同步放化疗前、后宫颈分泌物中HPV DNA及血清TNFα含量的变化，为寻找能早期诊断宫颈癌、复发及判断治疗效果、预后的分子学指标奠定基础.

　　1对象和方法

　　1.1对象200306 /200406，首次经病理确诊行同步放化疗的中晚期宫颈癌患者30例为实验组，按FIGO（2002年）标准进行临床分期:Ⅱb1期3例，Ⅱb2期13例，IIIa期2例，IIIb期12例. 病理类型：鳞癌29例，腺癌1例. 患者一般情况： 心、肾、肝等脏器功能正常，年龄40～50（中位45.3）岁. 健康对照组20例（均为江西省妇幼保健院健康普查妇女），年龄38～49（中位44.6）岁.

　　1.2方法

　　1.2.1放射治疗采用60Co外照射机和192Ir后装放疗机.  体外照射： 全盆DT30～40 Gy，中央遮盖DT15～25 Gy. 腔内照射： A点25～35 Gy. 放疗同时进行化疗，化疗方案分为A（15例）：DDP20 mg/m2 （ivgtt, 30 min）＋BLM30 mg（im）及B（15例）： 泰素40 mg/m2（ivgtt，3 h）＋CBP80 mg/m2 (ivgtt, 0.5～1 h)，两组皆每周1次，共6个周期. 每次化疗结束后0.5 h内进行放疗. 实验组在治疗前、后及健康对照组用Digene宫颈刷在患者的宫颈管内顺时针旋转3圈后放置在保存液中以备HPV的检测. 实验组在治疗前、后及健康对照组取静脉血2 mL，分离血清后，-40℃保存待测TNFα.
 
　　1.2.2宫颈分泌物HPV DNA含量的检测采用第2代杂交捕获技术(HC2)试剂盒（美国Digence公司），按说明书进行. 实验中要求预设阴性对照及阳性对照，所有对照需一式三份，检测的判断标准最终由三份阳性对照产生出阳性定标的阈值（cut off, CO）,待检标本的相对发光度单位（relative light unit,RLU）与该标准的比值RLU/CO即是待测标本的检测结果，如RLU/CO≥1.0即为阳性结果，相对于标本中检出的DNA负荷量≥1.0 ng/L，反之为阴性.
 
　　1.2.3血清TNFα含量的检测采用双抗体夹心ABCELISA法试剂盒（上海森雄科技实业有限公司产品）. 用抗人TNFα mAb包被于酶标板上，标准品和样品中的TNFα与mAb结合，加入生物素化的抗人TNFα抗体，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入酶底物OPD，出现黄色，加终止液硫酸，颜色变深，在A492 nm处测Δ值，TNFα浓度与Δ值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中底TNFα浓度. 操作步骤按说明书进行，所有Δ值都应减除空白值后在行. 以标准样品1000, 500, 250, 125, 62.5, 32, 16, 0  ng/L之Δ值在半对数纸上作图，画出标准曲线. 根据样品A值在该曲线图上查出相应TNFα含量.
 
　　统计学处理： 数据采用均数x±s标准差 ，应用SPSS12.0统计软件进行单因素方差分析、多个样本率的χ2检验，检验水准α=0.05.

　　2结果
　　
　　2.1治疗前、后HPV  DNA水平的变化实验组治疗前HPV DNA阳性率为96.7%,治疗后HPV DNA阳性率为20%，健康对照组HPV DNA阳性率为10%. 实验组治疗前HPV DNA阳性率与健康对照组比较有统计学意义（χ2=38.3，P＜ 0.01）；实验组治疗后HPV DNA阳性率下降，与治疗前比较有统计学意义（χ2=36.3，P＜ 0.01），但与健康对照组比较无统计学意义（χ2=0.892，P＞0.05）. 29例HPV DNA阳性患者中，在治疗结束后HPV转阴率为79.3%,HPV持续感染率为20.7%. 治疗结束后HPV DNA阴性患者共23例，CR率为100%；而HPV DNA阳性患者共6例，CR率为66.7%，两者比较无统计学意义（P＞0.05）.