食管癌术前化疗与p27及Ki67表达的关系

【关键词】  ,食管肿瘤

    Relation between preoperative chemotherapy and expression of p27 and Ki67 in tissues of esophageal carcinoma

　　【Abstract】 AIM: To study the relation between preoperative chemotherapy and expression of p27 and Ki67 in tissues of esophageal carcinoma. METHODS:  A total of 48 patients with esophageal carcinoma were assigned to 2 groups: a control group (n=24) that received esophagectomy without chemotherapy and a preoperative chemotherapy group that received preoperative chemotherapy before esophagectomy (n=24). All the patients were followed up for 40 months. Immunohistochemical staining was used to determine the expression of p27 and Ki67 in the 48 cases. RESULTS:  We found that the expression of p27 in esophageal tumor was associated with the histology grade of tumor (χ2=4.021, P=0.045), but not with carcinoma invasion degree (χ2=0.062, P=0.961), lymph node metastasis (χ2=0.006, P=0.936) and neoadjuvant chemotherapy (χ2=0.035, P=0.551). The expression of Ki67 was associated with the invasion degree (χ2=4.48, P=0.034) and lymph node metastasis (χ2=4.002, P=0.045) and neoadjuvant chemotherapy (χ2=5.371, P=0.02), but not with differentiation (χ2=0.488, P=0.4851). The median survival time was prolonged to 17 months in those who received neoadjuvant chemotherapy, but compared with the 14 months for those not receiving neoadjuvant chemotherapy there was no statistical significance (P>0.05). CONCLUSION:  The expression of p27 and Ki67 can be used as important markers in assessing the prognosis and preoperative chemotherapy effect in patients with esophageal carcinoma.

　　【Keywords】 esophageal neoplasms； p27； Ki67； preoperative chemotherapy

　　【摘要】 目的: 探讨食管癌组织中p27和Ki67表达与术前新辅助化疗（neoadjuvant chemotherapy）的相互关系. 方法: 应用免疫组织化学方法（SP），检测48例食管癌组织中p27，Ki67的表达，其中行术前化疗+手术+术后放疗食管癌患者24例，单纯手术+术后放疗患者24例，并随访40 mo；分析与术前化疗和生存时间的相互关系. 结果：癌组织中p27表达与肿瘤浸润深度，淋巴结转移和术前化疗无关，与食管癌组织学分级相关(χ2=4.021, P=0.045)；Ki67表达与食管癌组织学分级无相关性(χ2=0.488, P=0.4851)，与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及术前化疗相关（P<0.05）. 患者生存时间与p27表达呈显著正相关关系（P<0.05），与Ki67表达呈负相关关系（P<0.05）. 术前化疗组与对照组患者的中位生存时间差异无统计学意义（P>0.05）. 结论：联合检测p27及Ki67是评价食管癌患者预后及术前化疗疗效的有效指标.

　　【关键词】 食管肿瘤；p27蛋白；Ki67；术前化疗

　　0引言

　　食管癌术前新辅助化疗（neoadjuvant chemotherapy）在诱导肿瘤细胞凋亡，降低疾病分期以及提高手术切除率等方面具有明显优势［1］， Ki67和p27在肿瘤的发生和预后中有重要作用. 我们应用免疫组化方法检测经过BPF方案进行术前化疗的食管癌组织中p27和Ki67的表达，探讨p27和Ki67的表达与化疗、生存时间的相互关系，指导术前新辅助化疗在临床上的合理应用.

　　1材料和方法

　　1.1材料

　　2000/2002收治Ⅱb-Ⅲ期食管癌患者48(男36，女12)例，年龄49～72(中位56.4)岁，胃镜病理证实为鳞状细胞癌，随访40 mo. 免疫组化标本取自石蜡标本. 术前化疗+手术治疗+术后放疗24例，单纯手术+术后放疗患者24例作为对照. 两组患者年龄、性别、疾病分期差异均无统计学差异，组间均衡可比. 北京中山试剂公司提供的鼠抗人p27蛋白mAb和鼠抗人Ki67核抗原mAb，工作浓度1∶100. SPplus免疫组化染色试剂盒和DAB显色试剂盒. 利用链霉菌抗生物素蛋白过氧化酶连接法(SP)免疫组化染色，按试剂盒说明书进行.

　　1.2方法

　　术前化疗组给予BPF方案化疗：顺铂20 mg/m2，d 1～5，iv；5氟脲嘧啶500 mg/m2，d 1～5，iv；平阳霉素8 mg/m2，im，隔日1次，共40 mg. 化疗结束后7～14 d复查上消化道钡片及血常规，有效者再行化疗1周期. 化疗结束后10 d行手术治疗. 术前化疗2周期者15例，化疗1周期者9例. 两组患者术后均接受术后辅助放疗，照射野包括全纵隔、吻合口. 放射源为60Coγ线或15 MVX线,常规分割放疗40 Gy后补量5～10 Gy,总量DT 45～50 Gy/4.5～5 wk,脊髓受量小于40 Gy. 化疗临床效果评定标准依据化疗前后食管钡片病灶测量进行比较，分为：完全缓解（CR）：肿瘤完全消失；部分缓解（PR）：符合下列条件之一:①病灶长度缩短50%以上; ②病变长度缩短25%以上且两侧壁黏膜破坏有明显改变; ③肿瘤侵犯两壁时，一侧壁变光滑，另一侧壁也有改变；稳定（NC）：肿瘤缩小不够PR条件但无新病灶出现；进展（PD）：病灶变大25%或有新病灶出现. 化疗毒性反应根据世界卫生组织（WHO）所制定的毒性反应分级标准进行评价. p27表达以肿瘤细胞核内呈明显棕黄或棕褐色颗粒沉着为阳性细胞，每张切片均在40×10高倍显微镜下选择肿瘤细胞密集区观察4个视野，计数每个视野中着色肿瘤细胞的百分率，取其平均值,作为该例阳性细胞百分率，以着色细胞数≥25%判定为阳性；Ki67阳性为肿瘤细胞核内见到棕黄色颗粒沉着，以<20%为(-)，≥20%为(+)分级.

　　统计学处理： 采用SPSS 10.0统计软件处理数据. 定性资料采用χ2检验，生存率分析采用KaplanMeier方法，P<0.05为具有统计学差异.

　　2结果

　　实验组24例患者进食症状明显好转19例，无变化5例，无症状加重者. 化疗副反应表现为恶心呕吐，Ⅰ度16例，Ⅱ度3例，Ⅲ度1例，无Ⅳ度患者，对症处理后均可完成化疗. 骨髓抑制表现为白细胞下降，Ⅰ度6例，Ⅱ度2例，无Ⅲ度及以上者，药物后，多在2 wk内恢复正常，血小板无1例低于10×109/L. 肝功轻度损害1例，博来霉素致高热3例，无肾功能损害者. 化疗效果：CR 4例，PR 17例，NC 3例，无病灶进展者. 两组患者均行手术治疗，手术路径据肿瘤部位选择,胸上段食管癌行三切口颈部吻合；中、下段食管癌行左胸切口,消化道重建方式均应用机械吻合器行胃食管吻合. 术中无肉眼病灶残留、术后病理检查证实切缘无癌细胞残留者定义为根治性切除,否则为姑息性切除. 实验组患者行根治性切除20例(83.3%),姑息性切除4例(16.6%)；单纯手术治疗组患者行根治性手术切除16例(66.7%),姑息性切除6例(25.0%),剖胸探查2例(8.3%). 经统计学处理,实验组比对照组根治性切除率未见明显提高(χ2=1.778,P=0.182). 两组患者并发症发生率相似，分别为8和9例. 癌组织中p27表达与肿瘤生长部位、浸润深度、淋巴结转移无关，与肿瘤组织学分级密切相关，细胞分化程度与p27蛋白表达呈负向相关；Ki67表达与肿瘤部位和组织学分级无关，与肿瘤浸润深度、淋巴结转移密切相关. 癌组织中p27表达与术前化疗无关（χ2=0.035,P=0.551）；Ki67表达与术前化疗密切相关（χ2=5.371，P＝0.02, Tab 1).表1食管鳞状细胞癌p27,Ki67表达与病理特征的关系（略）

　　3讨论

　　术前新辅助化疗，具有降低病期、提高手术切除率和复发率、抑制微转移灶等优点［2］. 主要不良反应为胃肠道反应及骨髓抑制，并不影响实施手术［3］. 进展期食管癌患者行新辅助化疗，meta分析显示可有效提高根治性手术切除率、并不增加术后并发症的发生率［4］. 本试验由于观察病例数量较少，结果显示根治性手术切除率、术后并发症并无显著性差异. p27基因抑制G1期激酶复合物，阻止细胞从G1期进入S期，进而发生调亡，是乳腺癌的独立预后因子［5］. BPF方案可能对表达p27阳性的食管癌患者具有更大益处，p27可以作为肿瘤是否对化疗敏感的一项筛选指标. Ki67阳性表达的肿瘤可能更加容易浸润及转移［6］，Ki67可作为评价术前化疗疗效和判定预后的生物学指标之一.

　　术前新辅助化疗对患者长期生存率并无明显影响，可降低局部复发率［7］. 本实验两组患者随访40 mo，化疗组与对照组的中位生存时间分别为17和14 mo，统计无显著差异（P>0.05）.

　　KaplanMeier生存曲线分析显示，p27阳性表达患者中位生存时间（19 mo），显著高于阴性表达患者中位生存时间（13 mo）（P<0.005）. 提示p27阳性表达与患者预后具有相关性，可作为判断预后的一项指标. Ki67阳性和阴性表达患者的中位生存时间分别为15和20 mo（P<0.05）. Ki67表达水平与患者的术后生存时间呈显著负相关关系. 联合检测p27，Ki67在食管鳞状细胞癌组织中的表达可作为评价术前化疗疗效和判定患者预后的生物学指标.

　　【】

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