支气管肺泡灌洗液中3种肿瘤标志物的含量检测及意义

          作者：黄芳，王香玲，荫斌霞，展淑琴

【关键词】  肺肿瘤

    Clinical significance of determination of 3 tumor markers in bronchoalveolar lavage fluid

　　【Abstract】 AIM: To investigate the clinical value of 3 tumor markers  ［carcinoembryonic antigen (CEA), cytokeratin19fragments (CYFRA211) and tissue polypeptide specific antigen (TPS)］ in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) in patients with lung cancer. METHODS:  The levels of CEA, CYFRA211 and TPS in serum and BALF were measured in 62 patients with lung cancer and 36 patients with benign lung disease by electrochemiluminescence (Elecys2010) and ELISA respectively. RESULTS:  The levels of the 3 tumor markers measured in BALF were much higher in lung cancer group than that in benign lung disease group (P<0.05) and they were higher in patients in stage III and IV than those in stage I and II. The tumor markers increased to different degrees among the patients in various pathological classifications. It was also found that the levels of these tumor markers were higher and more sensitive in BALF than those in serum, especially in TPS. CONCLUSION:  The measurement of the tumor markers in BALF is of more significant value than the measurement in serum, which helps the early diagnosis, pathological classification and prognosis evaluation of lung cancer.

　　【Keywords】 lung neoplasms; bronchoalveolar lavage fluid; tumor markers, biological

　　【摘要】 目的： 研究支气管肺泡灌洗液（BALF）中3种肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白片段211(CYFRA211) 、组织多肽特异性抗原（TPS）对肺癌的临床诊断意义. 方法： 采用电化学发光免疫分析仪法（Elecys2010）、酶联免疫吸附法分别检测62例肺癌患者、36例肺部良性病变患者血清及BALF中CEA和CYFRA 211，TPS的含量. 结果： 肺癌患者BALF中3种肿瘤标志物的含量明显高于肺部良性病变患者(P<0.05)，且随着TNM临床分期升高，肿瘤标志物的含量也明显升高. 在不同病理类型的肺癌中，3种肺癌肿瘤标志物升高的程度均有所不同. BALF中肿瘤标志物的含量与同期血清中的含量相比，出现更早且浓度更高，尤以TPS升高最为明显. 结论： BALF中3种肺癌标志物的检测在肺癌的早期诊断、病理类型的推断及预后判断方面都有一定的意义，其临床价值优于血清.

　　【关键词】 肺肿瘤；支气管肺泡灌洗液;肿瘤标记，生物学
　
　　0引言

　　血清肿瘤标志物在肺癌中的应用已作过大量研究，表明肺癌患者血清中癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA)、细胞角蛋白片段211(CYFRA211)、 组织多肽特异性抗原（tissue polypeptide specific antigen, TPS）均较肺部良性病变患者和正常对照有所升高. 但相关的临床意义，各家报道不一［1，2］. 随着经纤维支气管肺泡灌洗术(BAL)的广泛应用，纤支镜对肺癌的诊断除了常规活检、刷检外，支气管肺泡灌洗液（BALF）中肿瘤标志物的检测亦可协助临床提高对肺癌的检测率. 我们拟测定血清及BALF中CEA，CYFRA211，TPS，的含量，探讨其对肺癌的临床诊断价值.

　　1对象和方法

　　1.1对象

　　选择西安大学第二附属呼吸科2001/2003住院患者62（男55，女7）例，年龄50~83（60.7±9.4）岁，全部经组织学或细胞学证实为肺癌患者. 其中鳞癌24例，腺癌20例，小细胞癌18例. 按照1997年UICC和ATCC肺癌TNM分期标准分期： Ⅰ~Ⅱ期21例，Ⅲ期25例，Ⅳ期16例. 肺部良性病变组36（男29，女7）例，年龄47~73（61.0±7.7）岁，其中慢性支气管炎急性期13例，支气管扩张伴感染8例，急性支气管炎9例，支气管肺炎6例. 正常对照35（男30，女5）例，年龄50~67（59.3±4.6）岁，为我院门诊体检正常者. 3组受检对象的年龄、性别做均衡性检验，无显著性差异. 因肺癌患者男性多于女性，故所选对照男性多与女性.
 
　　1.2方法
                                       
　　1.2.1采集及储存① 血清： 所有受检者均采清晨空腹静脉血3 mL，分离后的血清于70℃冰箱保存待测. ② BALF: 按常规支气管镜检查术，将纤维支气管镜远端插入病变所在段支气管，而良性病变均选用镜下所见炎症最重部位的段或亚段做灌洗. 先经活检孔注入20 g/L利多卡因1~2 mL做灌洗的局部麻醉. 然后从分检孔分次注入37℃无菌生理盐水30~50 mL，停留在6~7.3 kPa,吸引回抽适量的BALF，1500 r/min离心10 min,取上清液检测肿瘤标志物,细胞成分涂片作病检查,置-70℃低温冰箱待检.
 
　　1.2.2检测方法CEA和CYFRA211采用Elecys 2010电化学发光法，检测试剂盒购自Boche公司；TPS采用ELISA法，检测试剂盒购自瑞典CanAg公司. 测定前所有样品恢复至室温，严格按照说明书进行测定.
 　　
　　统计学处理： 所有数据以x±s表示. 用SPSS10.0统计软件进行统计分析,所用统计方法为KruskalWallis非参数检验，组间两两比较用Nemenyi法手工.

　　2结果

　　2.1血清和BALF中肿瘤标志物的测定血清中肺癌组3种肿瘤标志物的含量均显著高于肺部良性病变组和正常对照组（P<0.05）. BALF中3种肿瘤标志物的含量亦显著高于肺部良性病变组（P<0.05）. 尤以TPS升高最为显著(Tab 1).表1血清和BALF三种肿瘤标志物测定结果比较（略）

　　2.2血清和BALF中3种肿瘤标志物水平与肿瘤临床分期的关系从Tab 2可看出，临床分期越高，3种肿瘤标志物的含量越高. Ⅰ~Ⅱ期和Ⅲ期比较血清3种肿瘤标志物差异均无显著性，而Ⅳ期和Ⅰ~Ⅱ期比较，3种肿瘤标志物均有显著性差异(P<0.05）. 此外，与肺部良性病变组比较，仅Ⅲ, Ⅳ期的肿瘤标志物含量有显著性差异（P<0.05），而Ⅰ~Ⅱ期与之比较，血清3种肿瘤标志物均无显著性差异（P>0.05）. 在肺泡灌洗液中，随着临床分期的增高，3种肿瘤标志物升高更为显著，Ⅲ,Ⅳ期与Ⅰ~Ⅱ期比较，3种肿瘤标志物均有显著升高（P<0.05），与肺部良性病变组比较，Ⅰ~Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ期的3种肿瘤标志物含量均有显著性升高（P<0.05）.表2血清和BALF中三种肿瘤标志物水平与肿瘤临床分期的关系（略）

　　2.3血清和BALF中3种肿瘤标志物水平与肿瘤病理类型的关系在血清和肺泡灌洗液中,CEA在腺癌中均有明显升高（P<0.05）， CYFRA211在鳞癌中均有明显升高（P<0.05）. TPS在3种病理类型中无显著差异（Tab 3）. 表3血清和BALF中三种肿瘤标志物水平与肿瘤病理类型的关系（略）

　　3讨论
　　　
　　肺癌是当今世界最常见的恶性肿瘤，且死亡率极高，因环境污染、吸烟等因素导致的肺癌的发病率和死亡率均呈上升趋势［3］. 肺癌早期症状不明显，往往错过最佳的诊断和时机， 肺癌肿瘤标志物的研究是实现肺癌早期诊断的重要途径.

　　TPS是一种与细胞角蛋白18(cytokeratin 18)呈高度相关的蛋白类抗原物质. 因恶性肿瘤患者存在细胞角蛋白18片段的过度表达并被运输到患者的血流中，故用TPS可对血清中的细胞角蛋白片段上的相应抗原进行定量测定. 国外已将TPS测定广泛应用于肺癌患者的诊断、疗效观察及预后的判断［4-6］，而陈名声等［2］报道TPS与肺癌生物学行为有关. 我们亦发现肺癌患者血清和BALF中TPS含量均显著高于肺部良性病变组和健康对照组. CEA是基因编码于19号染色体上的相对分子质量（15～30）×104的糖蛋白,为胚胎性致癌抗原,有研究发现肺腺癌细胞能直接产生CEA［7］. 我们的结果中肺癌患者血清和BALF中CEA含量均明显高于对照组，且在肺腺癌中显著高于鳞癌和小细胞肺癌. CYFRA211是由正常上皮细胞表达的CK19的一个可溶性片段,主要存在于肺肿瘤上皮细胞质内，是检测非小细胞肺癌（NSCLC）尤其是鳞癌的重要肿瘤标志物［8］. 我们的结果也显示肺癌患者血清及BALF中CYFRA211含量明显高于肺部良性病变，且在鳞癌中升高尤为明显.
　　
　　对于三种标志物和肿瘤分期关系的研究发现，随着肿瘤分期的升高，CEA、TPS和CYFRA211的浓度和阳性率逐渐升高，尤以BALF中肿瘤标志物升高更为明显. 表明中晚期患者肿瘤标志物的含量均比早期患者高. 在BALF中，Ⅲ、Ⅳ期与Ⅰ~Ⅱ期比较，三种肿瘤标志物均有显著升高，而在血清中，仅Ⅳ期与Ⅰ、Ⅱ期比较有显著升高，这提示肿瘤标志物含量与肿瘤负荷大小、肿瘤的浸润以及肿瘤的远处转移均有一定的关系，与报道一致［9，10］. 与肺部良性病变组比较，血清仅Ⅲ、Ⅳ期的肿瘤标志物含量有显著性差异，而Ⅰ~Ⅱ期与之比较， 3种肿瘤标志物均无显著性差异. 而在BALF中，与肺部良性病变组比较，Ⅰ~Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期的三种肿瘤标志物含量均有显著性升高. 由此可见，在肺癌早期，肿瘤标志物量少时，在血清中难以检出，因此与炎症组难以区别，而BALF是取自病变部位的支气管肺泡内，所以其内肿瘤标志物含量比血清出现早，浓度高，相对来说其检测结果对肺癌的早期诊断更有意义.
 　　　
　　上述结果表明，三种肿瘤标志物在BALF中含量的检测比血清更为敏感，BALF中肿瘤标志物的检测对肺癌的早期诊断价值优于血清，因而BALF作为肿瘤标志物的标本来源，在临床应用及肺癌研究中有重要的临床价值.

　　【文献】

　　［1］  王国洪,万文徽,刘波，等. 四种肿瘤标志物检测非小细胞肺癌的临床应用研究［J］. 中华检验医学杂志，2003；26（8）：491-494.

　　Wang GH, Wan WH, Liu B, et al. To investigate the value of four tumor markers in nonsmall cell lung cancer ［J］. Chin J Leb Med, 2003; 26(8):491-494.

　　［2］  陈名声,刘建新,于文彬，等. 血清组织多肽特异抗原水平与肺癌生物学行为的关系［J］. 中华结核呼吸杂志，2002；25（5）:262-264.
   
　　Chen MS, Liu JX, Yu WB, et al. Relation between the serum tissue polypeptide specific antigen level and biological demeanour of lung cancer ［J］. Chin J Tuberc Respir Dis, 2002;25(5):262-264.

　　［3］  Landis SH, Murray TM, Bolden S, et al. Cancer statistics 1999 ［J］. CA Cancer J Clin, 1999;49:44-46.

　　［4］  Kulpa J, wojcik E, Radkowski A, et al. CYFRA211, TPAM, TPS, SCCAg and CEA in patients with squamous cell lung cancer and in chemical industry workers as a reference group ［J］. Anticancer Res, 2000;20:5035-5040.

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　　［7］  Mitauhashi N, Takahashi T, Sakruai H, et al. Establishment and characterization of new human lung pooly differentiated adenocarcinoma cell line, GII1 producing carcinombryonic antigen (CEA) and CA199 ［J］. Lung Cancer, 1995;12:13.

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　　Chen R, Hu HC, Hu YZ, et al. Clinical significance of determination of 3 tumor markers in bronchoalveolar lavage fluid ［J］. Suzhou Univ J Med Sci, 2003;23(3):336-338.

　　［10］ Pujol JL, Boher JM, Grenier J, et al. Cyfra211,neuron specific enolase and prognosis of nonsmall cell lung cancer: Propective study in 621 patients ［J］. Lung Cancer, 2001;31:221-231.