妊娠高血压综合征胎盘组织中细胞凋亡的观察

              作者：王林 辛晓燕 王哲 冯骥良

【关键词】  ,细胞凋亡

    Study on increased apoptosis in placental tissue from gestations complicated by PIH

　　【Abstract】  AIM:  To investigate a possible role of apoptosis in the pathophysiologic mechanisms of PIH (pregnancy induced hypertension syndrome). METHODS:  Placental samples were obtained from 16 uncomplicated thirdtrimester pregnancies and from 16 cases of PIH. Light microscopy, electron microscopy and TUNEL were used to identify apoptosis. Light microscopy was used to quantify their incidence of apoptosis. Electron microscopy was used to confirm the occurrence of apoptosis. RESULTS:  Apoptosis was conclusively demonstrated within human thirdtrimester placental tissue. Medians and interquartile ranges of normal placenta (n=16) were 0.12% (0.08%-0.19%) and medians and interquartile ranges of PIH group (n=16) were 0.37% (0.15%-0.49%). In comparison to that of normal placentas, the incidence of apoptosis was higher in placentas from gestations complicated by PIH (P<0.05). CONCLUSION:  Placental apoptosis increases significantly in PIH and it may play a role in the pathophysiologic mechanisms of this syndrome.

　　【Keywords】  apoptosis; placenta; pregnancy complications, cardiovascular

　　【摘要】 目的：  观察妊娠高血压综合征(妊高征)胎盘组织中的细胞凋亡现象，探讨胎盘细胞凋亡在妊高征发生中的作用. 方法：  选取妊高征患者胎盘组织及正常晚孕胎盘组织各16例，用光镜、电镜及TUNEL法观察计数细胞凋亡现象. 结果：  在晚孕胎盘组织中可观察到凋亡细胞，妊高征组细胞凋亡发生率的中位数及四分位数范围为0.37%（0.15%～0.49%），正常对照组为0.12%（0.08%～0.19%）. 二者之间有显著性差异 （P<0.05）.  结论：  妊高征胎盘组织中细胞凋亡增多，可能在妊高征发生发展过程中有重要作用.

　　【关键词】 细胞凋亡；胎盘；妊娠并发症，心血管

　　0引言

　　凋亡是细胞死亡的正常生理过程，可见于各种生物体的生理或病理过程中［1］. 近年来，胎盘的细胞凋亡已有报道. Stephen等［2］证实了胎盘组织中存在着细胞凋亡现象，并检测了整个孕期胎盘细胞凋亡的发生率. 我们观测妊娠高血压综合征（妊高征）与正常晚孕胎盘组织中的细胞凋亡现象，并探讨细胞凋亡在妊高征发生中的作用.

　　1对象和方法

　　1.1对象

　　选取200109/200203在西京妇产科住院分娩的妊高征患者16例，平均年龄(27.3±2.8)岁，平均孕周为(36.2±3.7) wk；另选择同时期入院分娩的正常妊娠妇女16例，平均年龄（26.3±3.4）岁，平均孕周为（39.0±2.2） wk. 两组均行均衡性检验，无显著性差异（P>0.05）. 妊高征的诊断标准以乐杰主编的第五版全国统编教材为准. 所有病例均为单胎妊娠. 两组病例均无其他妊娠合并症、并发症；无胎膜破裂时间延长，亦无孕期宫内感染史. 胎盘样本取自分娩或选择性剖宫产，产程无延长.

　　1.2方法

　　1.2.1标本收集胎盘娩出后，立即从母体面选取2块大小约为1.0 cm×1.0 cm×1.0 cm的组织（避开梗死钙化灶）. 生理盐水冲洗后，迅速放入40 g/L的PBS甲醛溶液中固定. 用于电镜检查的组织放入25 g/L的戊二醛液中固定.
 
　　1.2.2光镜检查所有标本均行光镜检查. 苏木素伊红染色. 观察计数，双盲操作. 采用Stephen等［2］的方法，光镜观察切片时，显微镜上下调节，以保证能观察到异染色质均匀一致的凋亡细胞核. 每一标本检查3×10个视野，约观察3×1000个细胞核，即每个胎盘样本约检查6000（2×3×1000）个细胞核. 除了蜕膜组织以外，镜下的各种细胞均计数在内.
 
　　1.2.3电镜检查用透射电镜检查10例正常的晚孕胎盘及10例妊高征胎盘组织. 其标本与相对应的光镜检查切片均取自同一胎盘组织. 每一标本大小约为2.0 mm×2.0 mm×2.0 mm，固定制片.

　　1.2.4TUNEL方法及步骤按Boehringer Mannheim公司的操作流程进行： 组织切片脱蜡脱水，蛋白酶K温育，加入50 μL的TUNEL反应液；37℃温育60 min；伊文氏蓝衬染后，荧光显微镜观察.
 
　　统计学处理：  两组间差别显著性检验用Wilcoxon秩和检验.

　　2结果

　　2.1凋亡细胞的确认妊高征及正常晚孕胎盘中均有细胞凋亡的存在（Fig 1）. 在滋养细胞、间质细胞、内皮细胞可见到凋亡细胞核，且两组凋亡细胞多见于合体滋养层细胞中. 电镜下可见到凋亡的合体滋养细胞核，其染色体在完整的核膜边缘聚集浓缩（Fig 2A）. 妊高征的合体滋养层凋亡细胞核被排出绒毛合胞体，进入母血循环中，核周胞质已消失（Fig 2B）.

　　2.2凋亡细胞的检测凋亡细胞核占所检细胞核的比例. 妊高征组胎盘细胞凋亡发生率的中位数及四分位数范围为0.37%（0.15%～0.49%），正常对照组为0.12%（0.08%～0.19%）. 二者之间有显著性差异（P<0.05）. 前者的凋亡细胞较后者明显增多.

　　3讨论

　　细胞凋亡是细胞主动参与自身分解的过程之一，对组织内环境稳定有重要作用. 而凋亡发生的异常是许多疾病的病因之一，诸如阿尔海默氏病等［3］. 已知细胞凋亡是胎盘正常的老化过程. 我们观察到妊高征胎盘组织细胞凋亡较正常晚孕胎盘组织增高［4］.

　　妊高征胎盘组织中凋亡细胞的增多可能是其最初的病理改变；亦可能继发于胎盘氧合作用的变化［5］. 而子宫螺旋动脉滋养细胞侵入不完全或急性动脉粥样硬化的形成导致胎盘缺血缺氧，是妊高征细胞凋亡增多的原因之一.  凋亡细胞可被吞噬细胞如巨噬细胞，或被实质细胞（条件吞噬细胞）清除［6］. 理论上，合体滋养细胞不是由明确的个体细胞构成的，并无吞噬作用. Smith等［7］指出合体滋养细胞的凋亡细胞核可能被排除到母体血循环中，并且由母体的网状内皮系统吞噬处理. 我们在电镜下观察到凋亡的细胞核被排出合胞体，进入母血循环，支持这一理论.
 
　　在孕期，母体血循环中有些物质来源于胎盘［8，9］. 且在缺氧条件下，这些物质的释放增多. 合体滋养细胞微小片段（STBM）存在于母体血循环中，它在正常孕妇的血浆中可被检出，且在妊高征时显著升高［10］. 有研究显示它们可损坏内皮，有初步的致炎性［11］. 而其他领域的研究［12］证实，存在于血循环中的部分微粒是凋亡细胞的碎片. 妊高征合体滋养细胞凋亡增高，与报道的STBM在母体血循环量中的含量也较高有一致性. 电镜下观察到凋亡的合体滋养细胞核被排出绒毛滋养层，证实妊娠期存在于母体血循环中的STBM可源自胎盘组织细胞凋亡；合体滋养细胞脱落一定量的胎盘组织碎屑进入母体血循环，主要基于胎盘组织细胞凋亡. 母体循环系统对这些碎屑的清除，可引起包括内皮细胞损伤在内的系统性炎性反应，这种反应可在所有的晚孕妇女中存在. 当反应失代偿时，妊高征发生.

　　【文献】

　　［1］  Sinkovics JG, Horvath JC. Role of apoptosis in health and disease［J］. JAMA, 1998;279(12):1699-1707.
 
　　［2］  Stephen CS, Philip NB, Malcolm S. Placental apoptosis in normal human pregnancy ［J］. Am J Obstet Gynecol, 1997;177(1): 57-63.

　　［3］  Savill J. Review:  Apoptosis in disease ［J］.  Eur J Clin Invest, 1994; 24(3): 715-732.

　　［4］  王林，辛晓燕，王哲，等. 重度妊高征胎盘组织细胞凋亡与HSP70, bax的表达［J］. 第四军医大学学报， 2003; 24(6): 549-552.

　　Wang L, Xin XY, Wang Z, et al.  Study on apoptosis and expression of HSP70 and bax in placental tissue of serious pregnancy induced hypertension ［J］.  J Fourth Mil Med Univ, 2003; 24(6): 549-552.

　　［5］  Gary C, Normal FG, Kenneth JL, et al. Williams Obstetrics, 21sted ［M］.  Beijing: Science Press and McGrawhill. 2002:567.

　　［6］  Nagata S. Apoptosis by death factor ［J］. Cell, 1997;88(5):355-365.

　　［7］  Smith SC, Baker PN, Symonds EM.  Increased placental apoptosis in intrauterine growth restriction ［J］. Am J Obstet Gynecol, 1997;177(10):1395-1401.

　　［8］  Hayman R, Brockelsby J, Kenny L. Preeclampsia: The endothelium, circulating factor（s） and vascular endothelial growth factor ［J］. J Soc Gynecol Investig, 1999; 6(1): 3-10.

　　［9］  Walsh SW. Maternalplacental interactions of oxidative stress and antioxidants in preeclampsia ［J］. Semin  Reprod Endocrinol, 1998;16(1):93-104.

　　［10］  Knight M, Redman CWG, Linton EA. Shedding of syncytiotrophoblast microvilli into the maternal circulation in preeclamptic pregnancies ［J］. Br J Obstet Gynaecol, 1998;105(4):632-640.

　　［11］  Smarason AK, Sargent IL, Starkey PM. The effect of placental syncytiotrophoblast microvillous membranes from normal and preeclamptic women on the growth of endothelial cells in vitro［J］. Br J Obstet Gynaecol, 1993;100(7):943-949.

　　［12］  Aupeix K, Hugel B, Martin T. The significance of shed membrane particles during programmed cell death in vitro, and in vivo, in HIV1  infection ［J］. J Clin Invest, 1997;99(10):1546-1554.