脑胶质瘤中PCNA nm23的表达及临床意义
作者：李素清 马小彬 郑辉宇
【摘要】 目的：研究增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)和肿瘤转移抑制基因nm23在脑胶质瘤中的表达与肿瘤病理分级的关系，探讨在胶质瘤预后判断上的价值。方法：应用免疫组织化学SP法检测47例脑胶质瘤和12例正常脑组织中PCNA和nm23的表达。结果：PCNA在胶质瘤中绝大部分阳性表达，在正常脑组织中全部阴性表达，PCNA在胶质瘤的表达明显升高(P<0.01)，并随恶性程度增高而升高(P<0.01)；nm23基因在正常脑组织中全部阳性表达，胶质瘤中部分阳性表达，nm23在胶质瘤的表达明显降低(P<0.01)，且随恶性程度增高而降低(P<0.05)。两者呈负相关。 结论 ：PCNA、 nm23检测可能成为脑胶质瘤诊断及判断恶性程度与预后的指标。
【关键词】 脑胶质瘤 增殖细胞核抗原 nm23基因 免疫组织化学 表达
The Expression and Significance of PCNA and nm23 in Brain Glioma
Abstract：Objective：To investigate the expression of the proliferating cell nuclear antigen(PCNA) and metastasis suppression gene nm23 and their relation to pathology in brain glioma,to discuss the value in brain glioma prognosis estimation. Method： Immunohistochemical staining method was used to study the expression of PCNA and nm23 in 47 cases of brain gliomas and 12 cases of normal brain tissues. Result：PCNA almost positively expressed in gliomas and all negatively expressed in normal brain tissues,the expression in gliomas was more higher than in control group (P<0.01)and increased along with the growing of pathology grade(P<0.05);nm23 gene all positively expressed in normal brain tissues ,partly positively expressed in brain gliomas ,the expression in gliomas distinctly decreased(P<0.01)and decreased along with the growing of pathology grade(P<0.05). Conclusion：This study indicate that the expression of PCNA and nm23 may be a useful tool for assessment of degree of malignant and prognosis.
Key words： Glioma； PCNA； nm23； Immunohistochemical； Expression
脑胶质瘤是颅内常见的恶性肿瘤，报道增殖细胞核抗原(PCNA)是细胞DNA合成期必不可少的一种因子，能反映细胞增殖活动；肿瘤转移抑制基因nm23与肿瘤的浸润和转移有关。本文应用免疫组织化学方法，检测47例手术切除的脑胶质瘤组织标本中PCNA及nm23基因的表达情况，以探讨它们的表达情况、相关关系以及在判断肿瘤恶性程度及预后中的意义。
1 材料与方法
1.1 组织标本：收集本院1999年至2002年手术切除脑胶质瘤标本47例，其中男性25例，女性22例，年龄6~76岁，平均年龄44.5岁；26例术后获得随访，其中Ⅰ~Ⅱ级9例，Ⅲ~Ⅳ级17例，12例正常脑组织作为对照组。所有标本均用10%福尔马林固定，石蜡包埋，制成5μm厚切片。
1.2 分组：正常对照12例，脑胶质瘤47例，病理分级按kernohan法［1］。Ⅰ、Ⅱ级为低级别组，共21例，Ⅲ、Ⅳ级为高级别组，共26例。
1.3 试剂与染色方法：PCNA、nm23抗体均为鼠抗人单可隆抗体，通用型SP试剂盒及DAB显色盒均系Zymed公司产品，由北京中山生物制品公司提供。切片常规脱蜡后，常规SP法免疫组化染色，苏木素复染，每组均用已知阳性片作对照，用PBS液代替一抗作阴性对照。
1.4 结果判定：PCNA阳性反应产物位于细胞核内，呈均匀分布的棕黄色或棕褐色颗粒状结构，nm23基因蛋白阳性反应产物位于胞质和/或胞膜，为棕黄色颗粒。随机选择10个高倍镜视野，当出现阳性细胞且≥10%为阳性病例，否则为阴性病例。直接以(×400) 1000个肿瘤细胞中阳性细胞的百分率表示。
1.5 统计学处理：采用方差不齐两小样本均数比较的t检验、X2检验，应用SPSS软件包进行统计学处理。
2 结果
2.1 PCNA、nm23基因蛋白在脑胶质瘤中的表达情况见表1。
表1 正常脑组织、脑胶质瘤PCNA、nm23阳性表达率（略）
表2 正常脑组织、脑胶质瘤平均阳性细胞率（略）
注：NB与Ⅰ~Ⅱ、Ⅲ~Ⅳ比较，P<0.01；Ⅰ~Ⅱ与Ⅲ~Ⅳ比较，P<0.05
由表1可看出，PCNA在正常脑组织中全部阴性表达，而在脑胶质瘤中绝大数病例阳性表达，且表达呈明显上升趋势，各级别之间具有显著差异性(P<0.01)；nm23基因蛋白表达在正常脑组织中全部阳性表达，而在脑胶质瘤中呈明显下降趋势，各级别之间具有显著差异性(P<0.01)。
2.2 脑胶质瘤各级别平均PCNA、nm23阳性细胞率见表2。
由表2可看出，随着病分级的升高，PCNA阳性细胞率升高，nm23阳性细胞率降低，各级别均有显著差异性(P<0.05)。
2.3 胶质瘤PCNA、nm23表达之间的相关性见表3。
表3 PCNA、nm23表达之间的相关关系（略）
2.4 胶质瘤中PCNA、nm23表达与复发的关系：获得随访的26例病人中，PCNA阴性表达组手术后一年复发率20.0%(1/5)，阳性表达组手术后一年复发率71.43%(15/21)，两组间有显著差异性(P<0.05)；而nm23阳性表达组手术后一年复发率14.28%(1/7)，阴性表达组手术后一年复发率68.42%(13/19)，两组间有显著差异性(P<0.05)；Ⅰ~Ⅱ级胶质瘤手术后一年复发率33.33%(3/9)，Ⅲ~Ⅳ级胶质瘤手术后一年复发率76.47%(13/17)，两组间有显著差异性(P<0.05)。
3 讨论
PCNA 是存在于细胞核内的酸性蛋白，目前已将它视为S期细胞的标志物，用于细胞增殖动力研究。国内不少学者将PCNA表达情况用于脑星形细胞瘤增殖活动性的研究，均发现随着病理学分级的增加，PCNA阳性表达率也增高，说明PCNA表达的研究是评估是星形细胞瘤增殖活性的良好指标［2，3］。本研究对47例脑胶质瘤PCNA表达现象也发现同样，47例胶质瘤中有40例阳性表达(占40/47)，Ⅰ~Ⅱ级阳性率66.67%(14/21)，Ⅲ~Ⅳ级阳性率100%(26/26)，而12例正常脑组织全部阴性表达，PCNA在胶质瘤中表达较正常脑组织明显增高(P<0.01)。
PCNA在许多肿瘤中都有高表达［4］,并随着肿瘤浸润深度增加及转移，其表达呈明显上升趋势［5］。PCNA在胶质瘤中表达的意义多有报道，结论不一，但一般认为其蛋白表达与肿瘤的病理学分级有密切关系。谢季［6］等对星形细胞瘤的研究发现：PCNA阳性率随着组织学分级增加而增高，且染色强度也增强，PCNA在各级胶质瘤间有非常显著性差异，而正常脑组织PCNA基本不表达，表明各组织学分级中的脑胶质瘤增殖活性有明显的差别，推测它可作为判断胶质瘤发生及其恶性程度的指标。本研究结果与以往研究结果基本一致，PCNA的表达在组织学分级间有显著差异(P<0.01)，表明胶质瘤细胞增殖活性与胶质瘤恶性程度密切相关，而且PCNA阳性表达率与胶质瘤术后1年复发率呈正相关，因此，PCNA可作为判断胶质瘤发生、恶性程度以及预后的重要指标。
nm23基因是Steeg等在1988年分离出来的一种与恶性肿瘤转移有关的基因。它的表达可以影响细胞增殖分化，而且影响细胞骨架蛋白的生物活性，从而抑制癌的转移，如果nm23失活可能导致细胞浸润和转移［7］。本文47例胶质瘤中有10例阳性表达(占10/47)，Ⅰ~Ⅱ级阳性率38.10%(8/21)，Ⅲ~Ⅳ级阳性率7.69%(2/26)，统计学分析两者的差异有显著性(P<0.05)。12例正常脑组织均有阳性表达，和胶质瘤比较差异具有显著性(P<0.01)。并且nm23基因蛋白阳性表达率与胶质瘤术后1年复发率呈负相关。所以本实验结果显示nm23基因在高度恶性胶质瘤中的低表达可能是胶质瘤发生浸润性生长和自发种植转移的原因之一。
从这两项指标的关系可以看出PCNA的表达与肿瘤恶性程度呈正相关，而nm23表达则与此呈负相关；PCNA与nm23表达呈负相关。它们都与胶质瘤的分化程度、恶性程度、浸润与转移等有关。综合分析这些指标对于胶质瘤的诊断、鉴别诊断及判断其恶性程度与预后均能提供有用的参数，为临床提供指导。
【】
［1］ Ozawa M，Baribault H，Kemler R.The cytoplasmic domain of the cell adhesin molecules uvomorulin associates with three independent protein structurally related in different species ［J］.EMBO，1989，8（6）:1711.
［2］ 李光宝，刘薇，林国宏.增殖细胞核抗原在星形细胞瘤中的表达及其预后意义［J］.医科大学学报，1998，27(2)：181-182.
［3］ 徐燕杰，王政民，张玉芝.增殖细胞核抗原在星形细胞瘤中的表达［J］.中华神经外科杂志，1994，100(4)：216-217.
［4］ Robbins BA，Vega D，Ogata K，et al.Immunohistochemical detection of proliferating cell nuclear antigen in solid malignancies［J］.Arch Pathol Lab Med，1987：111：841-845.
［5］ Maeda K，Chung YS，Onoda N，et al.Proliferating cell nuclear antigen labeling index of preoperative biopsy specimens in gastric carcinoma with special reference to prognosis［J］ .Cancer，1994,73：528-533.
［6］ 谢季，李代强，胡守兴，等.脑星形胶质瘤nm23、PCNA、GFAP、EGFR的表达及临床意义［J］.实用癌症杂志，1998，13（1）：6-8.
［7］ Florenes VA，Amdal S，Myklebost O，et al.Level of nm23 messenger RAN in metastatic malignant melamomas：riverse correlation to disease progression［J］.Cancer Res,1992,52（21）：6088.
