单纯疱疹病毒2型感染与非淋菌性尿道炎的病因关系

【摘要】  目的 探讨非淋菌性尿道炎(NGU)患者单纯疱疹病毒2型(HSV2)感染的流行病学状况及实验室诊断方法。方法 实验分为NGU患者组和健康对照组。免疫快速测定法(C?C快速法)检测沙眼衣原体(CT)，培养法检测解脲支原体(UU),血清酶联免疫吸附法(ELISA法)检测血清HSV2抗体，荧光定量聚合酶链反应(FQ?PCR)检测尿道分泌物HSV2。结果 NGU患者组的CT、UU感染率分别为23.27%和30.91%。NGU患者组和健康对照组的HSV2 IgG、IgM、HSV2DNA阳性率分别为38.18%/18.03%、10.91%/1.64%、19.63%/4.92%，两组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。NGU患者组无CT、UU、阴道毛滴虫、念珠菌感染的HSV2阳性率为33.33%，与对照组相比差异亦有统计学意义(P<0.05)。结论 HSV2是NGU的重要病原体之一。FQ?PCR法作为HSV感染的实验室诊断技术具有很好的临床应用价值。

【关键词】  非淋菌性尿道炎；单纯疱疹病毒2型；血清学酶联免疫吸附实验；荧光定量聚合酶链反应

　　非淋菌性尿道炎(nongonococcal urethritis, NGU)为最常见的性传播疾病之一，在欧美国家的发病率已经超过淋病。近年来，NGU发病率在我国逐年上升，占报告病例总数的第3位，仅次于淋病和尖锐湿疣。其病原体复杂多样，沙眼衣原体(chlamydia trachomatis, CT)和解脲支原体(ureaplasm urealtyticum, UU)是其中最主要的病原体[1?3]，但临床上相当部分的患者无明显病因。有研究报道单纯疱疹病毒(herpes simplex virus, HSV)与NGU发病有一定关系[4]。为明确HSV感染与NGU发病的病因学关系，我们进行了NGU人群中HSV2感染的流行状况的研究，现报告如下。

　　1  材料与方法

　　1.1  临床资料  275例NGU患者(NGU患者组)来源于我院皮肤科、性病专科及妇科门诊，其中男165例，女110例，均按卫生部制定的NGU的诊断标准选择病例[3]。临床症状为尿痛、尿频、分泌物多、尿道口红、尿道痒、尿道不适、排尿不尽感等，每例至少有以上3种症状。患者年龄20-63岁，平均34.9岁。已婚192例，未婚83例，有婚外性行为者78例。平均NGU病程6.5月。对既往有生殖器疱疹病史及本次就诊时有可疑疱疹皮损者予以剔除。对照组61例，为健康体检人员，男24例，女37例，年龄27-44岁，平均36.1岁，CT、UU、阴道毛滴虫、念珠菌检测均为阴性。

　　1.2  标本采集和处理

　　1.2.1  血清标本  NGU患者组及对照组均抽取静脉血2mL，离心后留取，-80℃保存。

　　1.2.2  分泌物标本  按常规方法用无菌一次性棉拭子自男性尿道2-3cm处和女性宫颈管内1-2cm处取材，拭子停留10s旋转取出。NGU患者组留取3份，分别接种UU培养基及用于CT和HSV2检测；正常对照组取1份，用于HSV2检测。余置-4℃保存。

　　1.3  方法

　　1.3.1  HSV2血清抗体检测  血清样本以ELISA血清试剂盒(海南华美生化公司产品)检测HSV2血清抗体，具体方法参照试剂盒使用说明。

　　1.3.2  分泌物CT、UU等检测  采用英国“立明”衣原体抗原免疫快速测定法(C?C快速法)检测CT；以支原体培养鉴定试剂盒(广东珠海市朗峰生物技术有限公司产品)检测UU；阴道毛滴虫及念珠菌镜检由性病门诊实验室完成。

　　1.3.3  FQ?PCR检测HSV2DNA  PE Gene Amp 5700 型PCR仪为美国Perkin Elemer公司产品。所用的HSV2荧光定量PCR诊断试剂盒购自中山医科大学达安基因诊断中心(卫生部生物试剂定点生产单位)，试剂盒包括DNA提取液、HSV?PCR反应管、阳性定量品(107基因拷贝/mL)。标本处理后，加入PCR反应管，放入仪器样品槽。设置循环条件：93℃ 2min预变性，93℃ 45s-55℃ 60s先做10个循环后，再以93℃ 30s-55℃ 45s做30个循环，保存文件，运行。反应结束后保存检测数据，分析结果。

　　2  结果

　　2.1  NGU的病因学构成  NGU患者组中CT感染率为23.27%(64/275),UU感染率为30.91%(85/275)，阴道毛滴虫感染率为0.73%(2/275)，念珠菌感染率为1.09%(3/275)，HSV2感染率为19.63%(54/275)；两种以上病原体感染率为 20.46%(56/275)；原因不明者为24.73%(68/275)。

　　2.2  两组HSV2 IgG、IgM、HSV2DNA阳性率的比较  NGU患者组中HSV2IgG阳性105例，占38.18%，正常对照组HSV2IgG阳性11例，占18.03%，两者比较差异有统计学意义(χ2=8.966, P<0.005)；NGU患者组中HSV2IgM阳性30例，占10.91%，正常对照组HSV2IgM阳性1例，占1.64%，两者比较差异有统计学意义(χ2=4.075, P<0.05)；NGU患者组中HSV2DNA阳性54例，占19.63%，正常对照组HSV2DNA阳性3例，占4.92%，两者比较差异有统计学意义(χ2=6.669, P<0.01)；NGU患者组中102例无CT、UU、阴道毛滴虫、念珠菌感染，占37.09%。这102例患者中HSV2DNA阳性34例，占33.33%，正常对照组HSV2DNA阳性3例，占4.92%，两者比较有显著性差异(χ2=17.565, P<0.001)。

　　3  讨论
   
　　NGU是由多种病原体(除淋球菌外)感染而引起的尿道炎的总称,其中CT是最常见的病原体。NGU中30%-50%的病例由CT引起，10%-20%的病例由UU引起，约1%-17%的病例由阴道毛滴虫引起，还有小于10%的病例与HSV、白色念珠菌、细菌性阴道病有关[5]。由于检测技术、病例选择、病例数量及地理分布的差异，各研究报告存在较大差异。本研究结果显示，以CT、UU感染阳性率较高，其次为HSV2，与Chen等[6]的研究结果相近。其中有24.73%患者查不出上述病原体，因缺乏实验条件，未做鉴定。有报道认为大肠杆菌、表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌等可能成为NGU的致病菌。本研究中是否也存在这种情况，有待于进一步证实。