新疆地区维吾尔族和汉族血液淋巴细胞免疫表型参考值范围的调查
作者：张琰，温浩，张朝霞，曹玲，张琼，林仁勇，
卢晓梅，王星，马旭东，张静平
【摘要】 为了建立新疆维吾尔族和汉族健康成人血液淋巴细胞免疫表型分析值，并比较两民族在族别，性别等方面上是否存在差异，用单克隆抗体对75例维吾尔族和104例汉族健康成人外周血进行标记，用流式细胞术进行采集分析，读取数据并对比结果，应用SPSS11.0软件进行统计学分析。结果表明： 新疆地区20-50岁的维吾尔族和汉族健康成人外周血淋巴细胞亚群参考值范围：总T细胞分别为（67.85±8.97）%和（69.98±10.14）%；辅助性T细胞分别为（36.86±5.74）%和（40.07±6.10）%；抑制性T细胞分别为（26.67±6.15）%和（27.16±6.29）%；CD4/CD8比值分别为（1.46±0.47）和（1.56±0.47）；NK细胞分别为（16.91±9.89）%和（12.81±7.34）%；B细胞分别为（10.09±3.33）%和（11.78±3.81）%；CD3+/HLA-DR+分别为（10.05±2.95）%和（11.27±4.98）%；CD25+细胞分别为（1.76±5.26）%和（4?10±4.30）%。两民族在辅助性T细胞水平、NK细胞、B细胞及CD25+细胞上的差异有统计学意义；维吾尔族健康人群的男性与女性在辅助性T细胞及CD4/CD8比值水平上的差异有统计学意义，而汉族男女性T细胞亚群的差别则见于抑制性T细胞和NK细胞水平；维吾尔族与汉族男性在辅助性T细胞及CD4/CD8比值上的差异有统计学意义，前者略低于后者；维吾尔族女性NK细胞显著高于汉族（P＜0.01)，而CD25+细胞水平较低(P＜0.01)。结论： 族别和性别因素可影响健康人淋巴细胞表型分布，本研究建立了新疆维吾尔族和汉族健康成人血液淋巴细胞免疫表型分布参考值，并查明两民族在族别、性别方面的差异。
【关键词】 淋巴细胞免疫表型
Reference Values of Blood Lymphocyte Immunophenotype in the Normal Healthy Adults of Ugyur and Han Nationalities in injiang
Abstract This study was aimed to establish the reference values of blood lymphocyte immunophenotype in healthy adult between Ugyur and Han nationalities in Xinjiang and to compare the difference between these two nationalities in respect to nationality and gender，anticoagulated peripheral blood samples of 75 Ugyur people and 104 Han people were stained with monoclonal antibodies；the lymphocytes were analyzed by flow cytometery for the expression of lymphocyte-population bearing surface markers，the data were analyzed by SPSS 11.0. The results showed that the reference ranges of blood lymphocyte subsets in Uygur and Han adults were as follows: total T cells amounted to 67.85±8.97% and 69.98±10.14% respectively；helper T cell to 36.86±5.74% and 40.07±6.10% respectively；inhibitor T cell to 26.67±6.15% and 27.16±6.29% respectively；CD4/CD8 ratio to 1.46±0.47 and 1.56±0.47 respectively；NK cell to 16.91±9.89% and 12.81±7.34% respectively；B cell to 10.09±3.33% and 11.78±3?81% respectively；CD3+/HLA-DR+ to 10.05±2.95% and 11.27±4.98% respectively；CD25+ cell to 1.76±5?26% and 4.10±4.30% respectively. The differences of those two nationalities were mainly in total T cells，NK cell，B cell and CD25+ cell. Furthermore there were also some differences between male and female. There might exist differences in helper T cells，CD4/CD8 ratio between Ugyur male and female，while this difference in Han lied in inhibitor cell and NK cell. Compared to those of two nationalities，the helper T cell percentage and CD4/CD8 ratio of Uygur male were lower than those in Han male. And in female，Uygur people had higher percent of NK cell (P＜0?01)，but lower CD25+ cell than those in Han’s (P＜0.01). In conclusion，the nationalities and gender could influence the reference value of lymphocyte immunophenotype， the reference values of blood lymphocyte
immunophenotype in the normal healthy adults of Ugyur and Han nationalities in Xinjiang were defined，and the differences between these two nationlities in respect to nationality and gender were elucidated.
Key words lymphocyte immunophenotype；reference value；flow cytometry；Ugyur；Han
近年来，淋巴细胞免疫表型分析在免疫缺陷疾病，恶性血液病，自身免疫系统疾病的辅助诊断和移植免疫的监测中具有重要作用［1-3］。健康人群中的淋巴细胞免疫表型在国内外已有报道［4-6］。研究发现，淋巴细胞免疫表型在种族、年龄、性别等水平存在差异［7-10］。另外，不同的检测分析方法，结果也存在差异。随着流式细胞仪的广泛应用，采用流式细胞术进行淋巴细胞免疫表型分析已逐渐成为临床检验的常规工作之一。各国的流式细胞术实验室均建立了自己的参考值，并就种族、性别、年龄等影响因素进行了探讨［7-10］。目前，新疆还没有用四色流式细胞术分析维吾尔族和汉族淋巴细胞免疫表型及其差异的报告。因此，我们对新疆75例维吾尔族及104例汉族成人进行了淋巴细胞免疫表型的分析，现报告如下。
材料和方法
研究对象
所有健康人标本取自无免疫性疾病，无发热、咳嗽、感染等症状，体检健康，血压正常，血细胞计数及肝肾功能检查正常的成人，他们均来自我院门诊体检健康者和市中心血站健康献血者。维吾尔族75例，男女比例为42∶33，年龄20-50岁，平均年龄29岁；汉族104例，男女比例58∶46，年龄19-54岁，平均年龄32岁。
主要仪器和试剂
荧光校准微球： FLOW-CHECKTM Fluorospheres；荧光抗体： IgG1-FITC/ IgG1-PE/ IgG1-PC5，CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PC5/CD19-ECD；CD3-FITC/CD16，CD56-PE；CD3-FITC/HLA-DR-PE细胞裂解液：OptiLyse?C；鞘液：ISOTON Ⅲ的血细胞稀释液；流式细胞仪：COULTER?EPICS?ALTRATM FLOW CYTOMETER，以上试剂及仪器均购自美国Beckman Coulter公司。
淋巴细胞亚群比例测定
流式细胞仪样本制备：取肘静脉血1 ml，肝素或EDTA-Na2抗凝，混匀标本；按照抗体检测程序，用可调移液器将20 μl抗体加入不同试管，再加100 μl抗凝全血，充分混匀，避光室温孵育30分钟；加Opti-Lyse?C 500 μl，充分混匀，溶血10分钟后加等量PBS，离心（315×g，10分钟），弃上清，每管加入500 μl鞘液，混匀，待测，所有标本均在5小时内检测。
流式细胞仪测定
开启流式细胞仪，激光预热20分钟后，荧光微球检测CV值小于2%，调整光路和流路，上样检测。在前向散射光（FS）和侧向散射光（SS）散点图中圈定淋巴细胞群，然后分析CD3+、CD4+ 和CD8+和CD3-CD19+等细胞的表达。每份标本检测10 000个细胞。T细胞亚群的结果判定：应用EXPO32 v 1?2 Analysis软件分析淋巴细胞CD3+、CD4+和CD8+、CD3-/CD19+细胞的表达，从FSC/SSC双参数点图中圈出淋巴细胞群体设门，在不同散点图中计数细胞，根据所占总淋巴细胞的百分比判断结果。
统计学分析
本实验数据均经SPSS 11.0软件分析，数据采用x±SD表示。
结 果
维吾尔族和汉族淋巴细胞亚群的比较
维吾尔族和汉族成人淋巴细胞亚群值范围见表1。维吾尔族和汉族在总T淋巴细胞、抑制性T细胞、CD4/CD8及CD3+/HLA-DR+水平上无统计学差别，但是在辅助性T细胞、NK细胞、B细胞及CD25+细胞水平两民族存在统计学差异，其中除B细胞以外的3个指标差异较显著(P＜0.01)。Table 1. Comparison of lymphocyte subsets between Ugyur and Han nationalities in Xinjiang（略）
不同民族不同性别淋巴细胞亚群的比较
同一民族不同性别淋巴细胞亚群的比较 维吾尔族人群的男性的辅助性T细胞水平及CD4/CD8比值低于女性。汉族男女性T细胞亚群的差别则存在于抑制性T细胞和NK细胞水平，前者男性略低于女性，但男性NK细胞水平高于汉族女性(表2）。Table 2. Comparison of lymphocyte subsets between different gender of Ugyur and Han（略）
不同民族同一性别的比较 维吾尔族的辅助性T细胞及CD4/CD8比值低于汉族男性；维吾尔族与汉族女性差别主要在NK细胞和CD25+ 细胞水平，维吾尔族女性NK细胞水平显著高于汉族女性(P＜0?01)，而CD25水平较低﹙P＜0.01)（表2）。
讨 论
在目前流式细胞术已广泛用于医学临床领域，这就要求我们建立符合技术水平的正常参考值。由于淋巴细胞免疫表型参考值受到生态环境、社会因素如种族、性别、年龄、精神状态、吸烟与否、每日变异等影响，故不同的地域和种族应建立自己的参考值。
本研究建立了新疆维吾尔族和汉族健康成人血液淋巴细胞免疫表型分析参考值，并比较了两民族在族别、性别等方面是否存在差异。在人群免疫表型的分布上可见到两民族的CD3、CD4、CD8基本呈正态分布，而CD19、CD16和CD56、CD4/CD8比值均呈偏态分布，且峰值向底值方向漂移。
本研究首次揭示了维吾尔族和汉族两民族在辅助性T细胞、NK细胞、B细胞及CD25+细胞等水平有差别，维吾尔族的NK细胞水平显著高于汉族，而其它3个指标均低于汉族。产生这些差别的原因何在？一些研究已经发现种族、环境对T细胞亚群有影响，如亚洲人群（人、日本人和其他东方人种）的CD3+淋巴细胞和CD4+淋巴细胞明显低于非亚洲人群（如白种人，西班牙人，美国黑人），然而NK细胞比较的结果却截然相反［11］。Senju等［12］研究发现，由于CD8水平较高，日本人的CD4/CD8比值较白种人低，而CD3+T细胞及NK细胞水平均高于后者。Choong等［13］报告，华人的NK细胞水平高于印度人，Prince等［11］研究也证实，NK细胞在亚裔华人、日本人中比白种人高，Kam等［14］的研究分别发现泰国人、新加坡亚裔、香港华人NK细胞水平均较高。维吾尔族在遗传背景上与汉族不同，属不同民族，这可能是他们在免疫水平及免疫状态上有所差别的原因。
与广州和北京健康人群相比，新疆的维吾尔族和汉族两人群检测结果均有差别，其中CD3+CD4+以及CD3+CD8+检测值均较广州人群高，而B细胞水平较北京人群低［15，16］。分析其产生原因如下： ①淋巴细胞免疫表型受到地域、环境等的影响；②各实验室操作技术、操作程序和所用试剂及其量的不同也会影响结果的差异。
许多研究都涉及到男女性别在表型分布中的差异，女性的CD3+CD4+细胞水平高于男性，而CD3+CD8+细胞低于男性［17］。我们的研究中也发现到这一细微变化，维吾尔族人群的女性的CD3+CD4+T细胞水平高于男性，因此其CD4/CD8比值也较高。CD3+CD8+水平在汉族人群中则是女性较高，与前述结果相反，其原因有待进一步研究。关于CD3+细胞的研究结果众说不一［10，13］，Reichert等［10］的研究显示无性别和年龄差异，我们的研究与之相同。
由于淋巴细胞免疫表型与种族和性别都有关，因此我们排除性别对各指标的干扰，进一步比较了相同性别不同民族对淋巴细胞亚群的影响，结果发现，维吾尔族男性辅助/诱导性T细胞较汉族低，因此CD4/CD8也较低。女性中，维吾尔族人群的NK细胞较汉族的高，而CD25+细胞则较低。此结果与维吾尔族和汉族两民族总体比较的结果相同。
致谢： 衷心感谢乌鲁木齐市中心血站文国新站长、供血科吕霞主任及参与采血工作的所有工作人员给予的热情帮助，感谢新疆医科大学第一附属院检验科张朝霞主任、张琼、曹玲及门诊采血室所有工作人员给予的大力配合和支持！
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