口服加替沙星在大鼠体内的排泄
【摘要】 目的：观察大鼠单剂量口服加替沙星后的体内排泄情况。方法：选取20只Wistar大鼠，随机分为尿液、粪便和胆汁排泄组，分别单剂量（63 mg/kg）灌服加替沙星后，收集72 h内尿液、粪便和胆汁排泄量。采用HPLC法测定尿液、粪便和胆汁中加替沙星浓度。结果：大鼠单剂量灌服加替沙星后尿液中排出量为17%，粪便中排泄量为11.2%，胆汁中排泄量为2%。结论：加替沙星口服后主要由尿液、粪便排泄。
【关键词】 加替沙星；排泄；高效液相色谱法
加替沙星（Gatifloxcin, GAT）是一个新的氟喹诺酮类药物，具有广谱抗菌活性，对革兰阴性菌、革兰阳性菌及厌氧菌均有较好的抗菌作用。其抗菌活性较诺氟沙星、氧氟沙星和环丙沙星强［1］。加替沙星对氟喹诺酮高度耐药的淋球菌抗菌活性分别为妥氟沙星和氟罗沙星的2～4倍，对氟喹诺酮中度耐药的淋球菌抗菌活性分别为妥氟沙星、氟罗沙星的4～6倍，对氟喹诺酮敏感的淋球菌活性较其他氟喹诺酮类抗药药物高2～4倍［2］。已有报道加替沙星口服后的人体药代动力学研究［3］，但至今有关口服加替沙星体内排泄文献报道较少。本实验观察了大鼠单剂量口服加替沙星后的体内排泄，供临床。
1 材料与方法
1.1 药物与试剂
甲磺酸加替沙星原料药为白色粉末，味极苦，纯度99.7%，易溶于水，由河南康泰制药集团公司提供，批号990714。称量前经90 ℃烘6 h，精确称取，按原药实际重量浓度（未去除酸根），用双蒸水配为624 μg/mL标准储备液备用，低温（3～6 ℃）保存。内标诺氟沙星（NF），批号030404，纯度99.8%，西南药业股份有限公司提供，精密称取，用双蒸水配为204.0 μg/mL标准储备液备用，低温（3～6 ℃）保存。其余试剂均为AR级。
1.2 动物
健康合格一级Wistar大鼠20只，雌雄各半，体重180～200 g，由重庆医科大学实验动物中心提供。
1.3 仪器
高效液相色谱仪（大连依利特仪器有限公司），配UV20Ⅱ检测器；HP3295积分仪（惠普上海分析仪器有限公司）；岛津UV?265紫外检测器；液体快速混合器；内切式组织匀浆机；可控沉淀器；高速台式离心机。
1.4 试验方法
取健康合格一级Wistar大鼠10只，于实验前12 h禁食，实验时按动物体重计算每只动物应给口服剂量，给药剂量为63 mg/kg（小鼠灌服LD50的1/10量按动物等效剂量换算），将所给药物精确称取，用蒸馏水配制为加替沙星溶液，按1 mL/100 g体重容量灌胃给药，然后送回代谢笼中，自由饮水和觅食。分别在0～1、1～2、2～4、4～6、6～8、8～12、12～24、24～36、36～48、48～60、60～72以及72～84 h不同时间段收集尿液和粪便，量取尿液和粪便，尿液和粪均需用蒸馏水稀释为一定的浓度或匀浆测定药物浓度，未测定标本低温冰箱（?20℃）保存。
取健康合格一级Wistar大鼠10只，雌雄各半，体重180～200 g，于实验前12 h禁食。用乙醚将大鼠麻醉后，仰位固定于鼠板上，在剑突下作腹正中切口，分离胆总管，将内径1 mm塑料导管插入总胆管，固定，缝合切口，由导管引流胆汁，实验时给药剂量和容量同前。给药后8 h再供食。术后分别于0～2、2～4、4～6、6～8、8～12、12～24、24～36、36～48、48～60、60～72 h不同时间段收集、量取和记录胆汁量，及时测定胆汁中药物浓度，未测定胆汁低温冰箱保存，待测。
2 药物浓度测定
2.1 色谱条件
色谱柱：Bondapak C18 10 μm粒径，150 mm×4.6 mm ID，由大连依利特科学仪器有限公司生产。预柱：C18由大连依利特科学仪器有限公司生产。流动相：甲醇∶0.08 mol/L磷酸盐缓冲液∶四丁基溴化铵（25∶75∶4）。柱温：室温；流速：1.5 mL/min；检测波长：278 nm；20 μL固定进样环。
2.2 样品处理及测定
分别取尿液、胆汁经双蒸水适当稀释后，取0.1 mL加0.3 mL甲醇，旋摇30 s，15 000转/min离心5 min，取上清液进样。取粪便，称重，加双蒸水制为粪便匀浆，取0.1 mL加0.3 mL甲醇，余下处理同尿液和胆汁。加替沙星与杂质分离良好，如图1所示。
2.3 标准曲线、回收率及精密度试验
分别在大鼠空白尿液、胆汁和粪便匀浆中加入加替沙星，浓度相当于2.08、6.24、18.72、56.16、112.36和168.48 μg/mL，按样品处理及测定办法进行测定，所得数据用加权最小二乘法进行线性回归。尿液回归方程Y=1 087.95X-390.83，r=0.9994，检测范围2.08～168.48 μg/mL；粪便回归方程Y=1164.12X-780.04，r=0.9990。检测范围2.08～168.48 μg/mL；胆汁回归方程Y=150.75X-2885.26；r=0.9990；检测范围2.08～112.36 μg/mL。。
3 结果
3.1 加替沙星大鼠尿液中的累积排泄量
大鼠单剂量灌服加替沙星后，不同时间段尿排泄量、尿累积排泄量及累积排泄率见表1，结果表明，大鼠单剂量灌服加替沙星后尿中累积排泄量为给药量的17%左右。表1 大鼠单剂量灌服加替沙星原料药后不同时间段尿液中药物排泄情况（略）
3.2 加替沙星大鼠粪便中累积排泄量
大鼠灌服加替沙星后，不同时间段粪便中药物排泄量见表2，结果表明，大鼠单剂量灌服加替沙星后粪便中累积排泄量为给药量的11.2%。表2 大鼠单剂量灌服加替沙星后不同时间段粪便中排泄量（略）
3.3 加替沙星大鼠胆汁中累积排泄量
大鼠单剂量灌服加替沙星后不同时间段胆汁中排泄量见表4，结果表明，大鼠单剂量灌服加替沙星后胆汁中累积排泄量为给药量的2%。
4 讨论
报道［4］，组织粪便中加替沙星药物浓度采用微生物杯碟法测定。本研究采用沉淀杂质后，HPLC方法测定胆汁和粪便中药物浓度，准确性高，完全能满足试验要求，其回收率分别为（101.91±6.05）%和（105.92±8.56）%，检测范围均在2.08～112.36 μg/mL和2.08～168.48 μg/mL，达到较高的准确性。表4 大鼠单剂量灌服加替沙星后不同时间段胆汁中药物排泄量（略）
文献报道，健康人口服加替沙星后8 h尿液中浓度达高峰，72 h尿平均累积排出率约为79%～82%左右［5］。本实验中发现大鼠灌胃后2 h达高峰浓度，累积排出量达62.47%，24 h累积排出量为总排出量的93.80%，72 h达累积总排出量的99.60%，而文献报道［6］大鼠口服加替沙星20 mg/kg后48 h内尿累积排出率53.20%，相比之下，本研究排出率较快，量也较大，可能与服药量大（63 mg/kg）有关，提示临床口服用药量不宜过大。文献报道［6］，大鼠口服加替沙星20 mg/kg后48 h胆汁累积排出率为7.38%，而本实验为14.21%，较文献高，其原因可能为给药量较大所致。本实验大鼠灌服加替沙星后6～8 h粪便排泄量最大，为24 h后的36倍，36 h后粪便中已经未见加替沙星排出，但此时胆汁仍有较高浓度，提示加替沙星口服后肠道排泄快，而胆汁较尿液排泄更慢。
实验结果表明，加替沙星口服后经消化道排泄较快，经尿液次之，胆汁更次之。实验结果有助于临床医师。
【参考文献】
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