百令胶囊对实验性慢性肾衰的作用研究

【摘要】  目的：研究百令胶囊对大鼠慢性肾衰的作用。方法：雄性3月龄SD大鼠90只，随机分为对照组（30只）、模型组（30只）和预防组（30只）。以2%腺嘌呤淀粉混悬液150 mg/(kg·d)灌胃，连续17周，制作大鼠慢性肾衰模型；预防组加以1.5 g/(kg·d)百令胶囊溶于生理盐水灌胃；对照组以等体积的2%淀粉溶液和生理盐水灌胃，分别于实验第7周、12周、17周时进行24 h尿蛋白定量、尿NAG酶、血肌酐Cr及尿素氮BUN检测。结果：与对照组比较，各时相点模型组、预防组大鼠尿蛋白、尿NAG酶、血Cr及血BUN均升高（P<0.01），但预防组低于模型组（P<0.01）；模型组、预防组自身对照各指标均较前一时相点升高（P<0.01）。结论：百令胶囊早期应用可明显改善肾功能，对大鼠慢性肾衰有一定防治作用。

【关键词】  慢性肾衰；冬虫夏草；百令胶囊

　　百令胶囊是人工培养的冬虫夏草（简称虫草）菌丝，经生物工程方法制成的中药制剂，它与天然虫草的化学组成和功能基本一致。研究表明虫草对肾脏病有防治作用。本实验用腺嘌呤灌胃制造慢性肾衰模型，观察百令胶囊对24 h尿蛋白定量、尿NAG酶、血肌酐（Scr）及尿素氮（BUN）的影响，探讨百令胶囊对肾脏的保护作用。

　　1  材料和方法

　　1.1  实验动物
    　　
　　选用雄性3月龄SD大鼠90只，体重160～210 g，购自郑州大学医学部动物试验中心。

　　1.2  动物模型
    　　
　　大鼠适应环境1周后，随机分为对照组30只、模型组30只、预防组30只。将腺嘌呤以2%淀粉溶液溶解，制成混悬液，以150 mg/(kg·d)灌胃，连续17周，制作大鼠肾小管间质纤维化模型［1］；预防组以腺嘌呤混悬液150 mg/(kg·d)灌胃，同时以1.5 g/(kg·d)百令胶囊溶于生理盐水灌胃；对照组以腺嘌呤相同体积淀粉和百令胶囊相同体积生理盐水灌胃。分别于实验第7周、12周、17周时取血，并于各时相点前一天分别将各组10只大鼠放入代谢笼中留取24 h尿液，进行生化指标检测。

　　1.3  生化指标检测方法
    　　
　　血清肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）采用BECKMAN CX?7全自动生化分析仪测定；24 h尿蛋白定量采用考马斯亮蓝法；尿NAG酶采用比色法。

　　1.4  肾脏组织病理
    　　
　　肾组织HE染色和Masson特染，光镜观察。在IDA?2000高清晰度数码显微图像分析系统下肾小管间质纤维化指数。高倍镜（×200）下随机选取10个不重叠视野测定小管间质纤维化面积与同视野小管间质总面积的百分比，进行半定量评分［2］。评分标准：无病变为0分，≤25%计1分，26%～50%计2分，>50%计3分。每张切片取10个视野的平均积分，再在各组取平均值。

　　1.5  统计学处理
    　　
　　各组数据均采用（±s）表示，组间比较采用两组独立样本的t检验（双侧），由SPSS10.0统计软件进行统计学处理。

　　2  结果

　　2.1  生化指标检测结果
    　　
　　结果见表1。与对照组比较，模型组、预防组各时相点大鼠尿蛋白、尿NAG酶、血Cr及血BUN均升高（P<0.01），但预防组低于模型组（P<0.01）；模型组、预防组自身对照各指标均较前一时相点升高（P<0.01）。表1  各时相点两组大鼠尿蛋白、尿NAG酶、血BUN、Cr值的变化（略)注：a?与同时相点对照组相比P<0.01；b?与同时相点模型组相比P<0.01；c?与同组前一时相点相比P<0.01

　　2.2  肾脏组织病理改变
    　　
　　各期对照组大鼠肾脏无病理改变。模型组和预防组大鼠各期肾脏病理改变见图1。两组均呈加重趋势。实验7周时，模型组和预防组大鼠肾脏肾小管扩张，间质单核细胞浸润、水肿，可见间质纤维组织灶性增生。12周时，模型组和预防组肾小管扩张明显，肾小管上皮空泡或颗粒性变性，基底膜断裂，小管间质区域增宽，纤维化明显。17周时，模型组和预防组两组大鼠肾脏病理检查均可见肾小管明显萎缩及消失，间质广泛纤维化。7周、12周时，预防组大鼠肾脏病理改变均较模型组轻。17周时，模型组和预防组大鼠肾脏病理改变无显著差异（P=0.670）。模型组和预防组大鼠肾脏病理改变自身对照均较前一时相点加重。见表2。表2  各时相点模型组和预防组大鼠肾间质损害半定量分析（略)注：a?与同时相点模型组相比P<0.01；b?与同组前一时相点相比P<0.01

　　3  讨论
    　　
　　本文采用腺嘌呤诱导大鼠肾小管间质纤维化模型，7周时即已出现肾功能改变，随着病程进展肾功能持续恶化，17周时肾功能明显减退，病理出现小管萎缩，间质纤维大量增生，具有典型的肾脏病损害和功能学改变，和［1］报道相似。本实验研究百令胶囊对大鼠肾小管间质纤维化早、中期的防治作用。预防组血Cr、血BUN、尿NAG酶及24 h尿蛋白值在第7周时与模型组比较无明显差异，第12周时均低于模型组，并且可见细胞浸润、小管细胞空泡变性及细胞坏死减少。提示百令胶囊对肾小管上皮细胞有保护作用，能有效地改善大鼠的肾损害，减轻肾小管间质纤维化，和文献［3］报道一致。病程的末期（第17周）预防组和模型组肾功能均减低，肾脏病理检查均可见肾小管明显萎缩及消失，间质广泛纤维化，两者之间无差异，提示百令胶囊可能在肾小管间质纤维化的早期对肾脏有保护作用，但随着肾脏病变的加重，将失去其作用。百令胶囊晚期失去其作用可能和病因持续存在有关。研究结果提示，药物防治肾小管间质纤维化应该早期应用，且消除可能导致肾小管间质纤维化的病因尤为重要。

【文献】
  ［1］楚 非, 邹万忠, 孙锁柱, 等. 大鼠肾小管间质纤维化中肾小管上皮细胞表型转化的研究［J］. 中华肾脏病杂志, 2003, 19(1): 10?14.

　　［2］Mezzano SA, Droguett MA, Burgos ME, et al. Overexpression of chemokines, fibrogenetic cytokines, and myofibroblasts in human membranous nephropathy ［J］. Kidney Int, 2000, 57: 147?158.

　　［3］郭啸华, 刘志红, 黄海东, 等. 百令胶囊及其提取液对大鼠环孢素肾毒性的防治作用［J］. 肾脏病与透析肾移植杂志, 2003, 12(3): 223?228.