S100A4蛋白在47例人肺腺癌中的表达及意义
【摘要】 ［目的］研究钙离子结合蛋白A4（S100A4）在肺腺癌组织、癌旁肺组织和正常肺组织中的表达及其临床意义。［方法］应用免疫组化SP法检测47例肺腺癌及相应癌旁肺组织标本（距肿瘤3cm~5cm）、15例正常肺组织标本中S100A4蛋白表达。［结果］在正常肺组织中S100A4蛋白无表达；在癌旁肺组织中S100A4蛋白表达率为12.8%（6/47）；在肺腺癌组织中的表达率为59.6%（28/47），与正常及癌旁肺组织比较有显著性差异（P<0.05）；S100A4蛋白在肺腺癌中的表达与淋巴结转移及癌细胞分化程度均有相关性（P<0.05）。［结论］S100A4蛋白的表达与肺腺癌的发生和淋巴结转移正相关，与肺腺癌分化程度负相关。
【关键词】 肺腺癌 S100A4蛋白 免疫组织化学
Expression of S100A4 Protein in 47 Cases with Human Lung Adenocarcinoma and its Clinical Significance
2. Liaoning Provincial Cancer Hospital, Shengyang 110042, China)Abstract: ［Purpose］ To investigate the expressions of S100A4 protein in lung adenocarcinoma tissues, cancer around tissues and normal lung tissues and their clinical significance.［Methods］The expression of S100A4 protein was detected by SP immunohistochemistry in 47 cases with lung adenocarcinoma and cancer around tissues (approximately 3~5cm from the cancer tissues), 15 cases with normal lung tissues. ［Results］There was no S100A4 expression in normal lung tissues.The positive expression rates of S100A4 were 12.8%（6/47） in cancer around tissues and 59.6%（28/47）in lung adenocarcinoma tissues. There was significantly difference between lung adenocarcinoma and normal tissue or cancer around tissues （P<0.05）. The expression of S100A4 protein in lung adenocarcinoma was associated with both differentiation grade and lymph node metastasis. ［Conclusions］Expression of S100A4 protein was positively related with the occurrence or lymph node metastasis of lung adenocarcinoma, and negtively related with its differentiation.
Key words: lung adenocarcinoma; S100A4 protein; immunohistochemistry
多种恶性肿瘤的发生、侵袭和转移等病理过程密切相关[2]。本研究采用免疫组织化学方法检测15例正常肺组织，47例肺腺癌及癌旁肺组织标本S100A4蛋白的表达情况，并结合临床进行比较分析。
1 材料与方法
1.1 研究对象
本实验标本选自解放军第二0二及辽宁省肿瘤医院胸外科2005年3~9月手术切除的47例肺腺癌及癌旁肺组织标本（距肿瘤3cm~5cm），15例正常肺组织标本（均来自手术切除肺良性病变的周边肺组织），所有病例均未经过术前放、化疗。其中男性13例，女性34例；高-中分化30例，低分化17例；有纵隔淋巴结转移（N2）29例，无纵隔淋巴结转移（N0~1）18例。所有标本均经病确认，淋巴结分级采用1997年UICC标准。
1.2 试 剂
S100A4免疫组化用兔抗人多克隆抗体，购自NEOMARKER公司；羊抗兔IgG（二抗）及SP试剂盒，购自晶美生物工程有限公司。
1.3 方 法
组织标本经10%福尔马林固定，常规脱水，石蜡包埋，3μm厚连续切片。切片脱蜡后置入0.01mol/L 枸橼酸缓冲液（pH=6.0），微波修复抗原。免疫组化采用SP法（具体方法参照说明书进行），DAB显色。每批染色设立阴性空白对照（以PBS代替一抗），并用已知阳性表达的肺腺癌组织切片作阳性对照。
1.4 结果判定
S100A4蛋白主要定位于胞浆内，免疫组化染色以细胞胞浆内出现棕黄色颗粒者为阳性细胞，每例样本随机选择10个高倍视野共计数1 000个细胞，以阳性细胞数占总细胞数的比例阳性表达率，按Kimura等[3]报道的标准：阳性细胞≤30%为阴性；阳性细胞>30%为阳性。
1.5 统计学处理
统计学分析采用χ2检验，以P<0.05为有显著性差异。
2 结 果
S100A4蛋白在肺腺癌组织中的表达见表1。S100A4蛋白主要在胞浆表达，阳性细胞呈局灶分布，在血管平滑肌细胞及淋巴细胞中也可见少量表达。15例正常肺组织中均无S100A4蛋白表达；在47例癌旁组织中阳性表达率为12.8%（6/47）；47例肺腺癌组织阳性表达率为59.6%（28/47），其中男、女性肺腺癌组织中各有10例（10/13）、18例（18/34）有阳性表达；高-中分化组和低分化组各有16例（16/30）、12例（12/17）阳性；淋巴结N0~1组与 N2组各有7例（7/18）、21例（21/29）阳性。S100A4蛋白在肺腺癌组表达显著高于对照组（P<0.05），有纵隔淋巴结转移组显著高于无纵隔淋巴结转移组（P<0.05），肿瘤细胞低分化组表达显著高于中-高分化组（P<0.05），而在不同性别组间差异无显著性（P>0.05）。表明S100A4蛋白表达与肺腺癌的发生、分化程度、纵隔淋巴结转移有密切关系，而与患者的性别无明显关系。
3 讨 论
S100A4是从转移性小鼠乳腺癌细胞中克隆出的一种重要的转移相关基因，该基因编码产物是钙离子结合蛋白S100家族成员之一，S100蛋白具有EF臂型钙离子结合区，当其与钙离子结合后构象即发生改变，暴露出可与靶蛋白结合的位点，进而通过相应的靶蛋白发挥其生物学效应[4，5]。表明，肿瘤相关的野生型p53蛋白、非肌肉原肌球蛋白、非肌肉肌球蛋白、E钙黏蛋白、金属蛋白酶和血栓收缩蛋白等都是细胞内S100A4的靶蛋白，而S100A4蛋白就是通过调控上述肿瘤相关蛋白的表达进而参与多种恶性肿瘤的发生、进展等生物学过程[2]。它可以螯合野生型p53蛋白，诱导细胞摆脱p53对G1~S期调控点的控制作用，因此S100A4的过度表达将使细胞周期失去调控，使一些已发生编码和翻译错误的细胞得以继续生存并繁殖，从而导致肿瘤的发生[1]。S100A4还可以促进肿瘤的转移，其机制主要为：①S100A4蛋白与非肌肉组织的原肌球蛋白和肌球蛋白相互作用，调节细胞间的粘附作用，从而增强肿瘤细胞的粘附和侵袭能力[1]；②S100A4蛋白可以抑制非肌肉肌球蛋白重链的磷酸化，阻止非肌肉肌球蛋白聚集，影响细胞骨架的重排，进而影响肿瘤转移；③S100A4蛋白可作用于基质金属蛋白酶（MMP）及其抑制剂如E钙黏蛋白、nm23等因子的表达，参与细胞外基质的重建，增强肿瘤细胞的转移能力[7]；④通过促进新生血管生成，从而促进肿瘤的转移。近年来，对于S100A4蛋白的研究表明，它的表达与多种肿瘤的发生、分化、侵袭及转移等生物学行为密切相关，文献报道，在肺癌[3]、食管癌[6]、胃癌[7]、结肠癌[8]、胰腺癌[9]、肾癌[10]等恶性肿瘤中其表达率都有升高，因此认为S100A4蛋白可能是反映恶性肿瘤临床病特征的重要指标。
本文通过对47例肺腺癌、癌旁组织及正常对照肺组织标本的研究发现，S100A4蛋白在肺腺癌组织的阳性表达率明显高于正常及癌旁肺组织，发生纵隔淋巴结转移者明显高于无纵隔淋巴结转移者，与性别差异无相关性。我们的研究结果表明，S100A4蛋白与肺腺癌的发生及纵隔淋巴结转移正相关，与性别差异无关，这与国内外其他学者的研究结果基本一致。另外，我们研究结果还说明该蛋白的阳性表达率与肺腺癌组织细胞的分化程度呈负相关，关于这一点，目前研究仍存在争议，Kimura等[3]对135例非小细胞肺癌标本的研究结果表明S100A4蛋白表达与肿瘤组织细胞的分化程度无关，而其他一些研究结果则支持该蛋白表达与食管鳞癌及胰腺癌等肿瘤细胞的分化程度负相关[6，11]，结论的不同可能与纳入研究的病理类型及样本量的差异有关，更可靠的结论将有待于进一步深入的研究和更大样本量的临床实验积累。
综上所述，我们认为S100A4蛋白与肺腺癌的发生、分化和淋巴结转移密切相关，S100A4蛋白的表达可能是反映肺腺癌病因学和临床病理学特征的重要指标之一。
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