乳腺癌组织中p53、nm23-H1基因表达及其与绝经状态、淋巴结转移的相关性
【摘要】 ［目的］ 研究乳腺癌患者中p53和nm23-H1基因表达，及其与绝经状态及腋窝淋巴结转移的关系。［方法］ 采用免疫组织化学SP方法检测60例乳腺癌组织中p53和nm23-H1的表达。［结果］ 60例乳腺癌患者中，p53和nm23-H1的阳性表达率分别为73.3%(44/60)和66.7%(40/60); 在绝经前患者中p53和nm23-H1的阳性表达率分别为66.7%（16/24）和50.0%（12/24），而在绝经后患者中两者的阳性表达率分别为77.8%（28/36）和77.8%（28/36）。在绝经后患者中p53和nm23-H1基因的阳性表达与腋窝淋巴转移呈显著性相关（P=0.019和P=0.019）。［结论］ p53可能参与绝经前妇女乳腺癌的发生，可能促进绝经后乳腺癌的转移；而nm23-H1可能参与绝经后乳腺癌的转移。
【关键词】 乳腺肿瘤 p53 nm23-H1 淋巴结 绝经
Expression of p53 and nm23-H1 in the Tissues of Breast Cancer and Its Correlation with Menopausal Status and Lymphatic Metastasis Abstract: ［Purpose］ To study the role of expression of p53 and nm23-H1 in lymphatic metastasis of breast cancer, and the correlation between expression of p53 and nm23-H1. ［Methods］ Expression of p53 and nm23-H1 in 60 patients with breast cancer was detected by immunohistochemical S-P method. ［Results］ Of 60 cases with breast cancer, 44 cases (73.3%) and 40 cases (66.7%) were positive for p53 and nm23-H1 protein respectively. In premenopausal patients with breast cancer, expression of p53 and nm23-H1 was 66.7% and 50.0% respectively, and in postmenopausal that was 77.8% and 77.8% respectively. In postmenopausal patients with breast cancer, expression of p53 and nm23-H1 was related to lymphatic metastasis（P=0.019 and P=0.019）. ［Conclusion］ p53 may play an role in the carcinogenesis of breast cancer in premenopausal patients by the regulation of endocrine system, and could promote lymphatic metastasis in postmenopausal breast cancer patients. nm23-H1 gene may take part in lymphatic metastasis in postmenopausal breast cancer patients.
Key words: breast neoplasms; p53; nm23-H1; lymphnode; menopause
乳腺癌是妇女中最常见的恶性肿瘤，抑癌基因p53和转移抑制基因nm23?鄄H1都与乳腺癌的发生有关[1，2]。本研究采用免疫组织化学方法检测60例乳腺癌组织中p53和nm23?鄄H1的表达，探讨其与乳腺癌临床病理参数之间的关系。
1 材料与方法
1.1 材 料
收集了2003~2004年期间嘉兴学院医学院附属二院手术切除的乳腺癌标本60例，按《常见恶性肿瘤诊治规范》分类，其中原位癌6例、早期浸润癌1例、浸润性非特殊型癌45例、浸润性特殊型癌8例。患者年龄32岁~81岁，平均53.3岁。所有标本在术前均未经任何放化疗。
1.2 方 法
所有标本均经10%福尔马林固定、常规石蜡包埋，4μm切片后行免疫组织化学SP法染色。鼠抗人单克隆抗体p53和nm23?鄄H1均购自北京中杉生物技术有限公司（1：80稀释）。检测系统用DAB，并用苏木素复染。用已知的p53和nm23?鄄H1阳性的乳腺癌组织切片作阳性对照，这两种抗体均用Tris缓冲液作阴性对照。
1.3 结果判断
p53主要表达于细胞核，而nm23?鄄H1主要表达于细胞浆。所有切片均采用双盲观察，并根据阳性细胞数和显色强弱分为：阴性（-）：阳性细胞数＜5%，无染色或染色较弱；阳性（+）：阳性细胞数≥5%，染色较强。
1.4 统计学分析
运用SPSS 10.0秩和检验对实验数据进行统计学分析。
2 结 果
2.1 乳腺癌组织中p53和nm23?鄄H1表达
p53主要表达于细胞核，而nm23?鄄H1主要表达于细胞浆，均为棕黄色颗粒。在不考虑绝经与否的所有60例乳腺癌患者中，p53和nm23?鄄H1的阳性表达率分别为73.3%（44/60）和66.7%（40/60）。在绝经前病例中p53和nm23?鄄H1的阳性表达率为66.7%（16/24）和50.0%（12/24），而在绝经后病例中两者的阳性表达率为77.8%（28/36）和77.8%（28/36）。
2.2 乳腺癌组织中p53和nm23?鄄H1的表达与临床病理参数关系
表1结果显示，在绝经前病例中p53基因蛋白的表达与腋淋巴结转移无关（P=1.000），而在绝经后患者中两者在统计学上存在相关性（P=0.019）；在不考虑绝经与否的所有60例乳腺癌患者中，腋窝淋巴结转移与p53表达无相关性（P=0.058）。在绝经前患者中nm23?鄄H1表达与腋淋巴结转移无关（P=0.680），但在绝经后患者中却显示了nm23?鄄H1基因蛋白的表达与腋淋巴结转移明显相关（P=0.019）。
表2结果显示，绝经前和全体乳腺癌患者中p53与乳腺癌的组织学类型之间均具有相关性（P=0.037和P=0.018），而与绝经后乳腺癌的组织学类型无显著性相关（P=0.339）。nm23?鄄H1的表达与绝经前后乳腺癌的组织学类型均无显著性相关（P=0.687、P=0.631及P=0.768）。
表3结果显示，在绝经后和全体乳腺癌患者中nm23?鄄H1的表达随p53的表达增加而增加，两者在统计学上呈显著性相关（P=0.002和P=0.004）；而在绝经前患者中两者并无显著性相关（P=0.397）。
表4结果表明，绝经后患者中nm23?鄄H1基因蛋白的表达率高于绝经前患者，两者在统计学上存在显著性差异（P=0.027）；而p53在两组患者中的表达则无显著性差异（P=0.344）。
3 讨 论
众多研究结果显示，包括乳腺癌在内的许多恶性肿瘤在p53基因蛋白过表达的同时常伴有转移能力，因此p53在肿瘤转移过程中起着重要作用[3]。但也有学者并没发现p53基因蛋白的表达与转移有关[1]。本研究表明，在绝经前患者中p53基因蛋白的表达与淋巴结转移无关，而在绝经后患者中该基因蛋白的表达与转移之间在统计学上存在相关性。出现上述结果的可能机制是，在绝经前患者中，由于体内有相对稳定的内分泌调节，p53对肿瘤转移的影响较小；相反，在绝经后患者体内由于性激素水平下降，内分泌系统的调控能力相对减弱，使肿瘤组织中p53基因对肿瘤转移的影响增加，因而在绝经后乳腺癌组织中，p53基因蛋白过表达可能促进了肿瘤的转移。另外，曾有研究表明乳腺癌组织中p53基因蛋白的阳性表达与绝经前状态明显相关[4]，我们的结果则进一步证明p53与绝经前组乳腺癌的组织学类型之间明显相关，提示p53可能在内分泌系统的协调下参与绝经前妇女乳腺癌的发生。
nm23?鄄H1基因由Steeg等[5]于1988年首先发现，并被鉴定为一种转移抑制基因，该基因编码二磷酸核苷激酶（DNPK）。关于nm23?鄄H1基因的表达与肿瘤转移的相关性研究中，实验结果一直存在分歧。张勇等[6]研究结果显示nm23基因的表达与乳腺癌腋窝淋巴结转移呈显著性负相关，黄宗海等[7]研究表明青年组和绝经组乳腺癌组织中nm23?鄄H1基因的表达均与淋巴结转移相关，然而也有研究显示nm23?鄄H1基因表达与乳腺癌淋巴结状况无关[8]。在本研究中，在绝经前患者中的nm23?鄄H1表达与转移无关，但在绝经后患者中却显示了腋窝淋巴结转移随nm23?鄄H1表达的增加而增加，表明nm23?鄄H1基因在绝经后患者的乳腺癌中似乎仅仅与转移有关，但并无证据说明它具有肿瘤转移抑制的作用。
另外，我们对p53、nm23?鄄H1基因蛋白表达与绝经状态之间的关系，以及p53与nm23?鄄H1之间的关系也进行了研究。表4结果显示，绝经后患者中nm23?鄄H1基因蛋白的表达率高于绝经前患者；同时表3结果也显示，在绝经后患者中nm23?鄄H1的表达随p53表达的增加而增加，而在绝经前患者中两者并不相关。这些结果似乎表明，乳腺癌患者在绝经前状态下，nm23?鄄H1的表达可能主要受内分泌因素的影响，而当处于绝经后状态下时nm23?鄄H1则更多受p53的调节，并随p53表达而上调。这个结论与Chen等[9]的观点基本相符，他们认为p53可以通过影响甲状腺/类固醇激素受体来间接地调节nm23?鄄H1的表达；但他们也认为p53过表达时可以下调nm23?鄄H1的表达，这个观点与我们的结论有所不同。
总之，p53可能在内分泌系统的协调下参与绝经前妇女乳腺癌的发生，在绝经后患者的乳腺癌组织中，p53基因蛋白过表达可能促进了肿瘤的转移；nm23?鄄H1基因在绝经后乳腺癌患者中参与转移过程，但并无证据说明它具有肿瘤转移抑制的作用。
【】
[1] Sirotkovic?鄄Skerlev M, Krizanac S, Kapitanovic S, et al. Expression of c?鄄myc, erbB?鄄2, p53 and nm23?鄄H1 gene product in benign and malignant breast lesions:coexpression and correlation with clinicopathologic parameters[J]. Exp Mol Pathol, 2005, 79(1):42-50.
[2] Duenas?鄄Gonzalez A, Abad?鄄Hernandez MM, Garria?鄄Mata J, et al. Analysis of nm23?鄄H1 expression in breast cancer. Correlation with p53 expression and clinicopathologic findings[J]. Cancer Lett, 1996,101(2):137-142.
[3] 贾春实，战忠利，张诗武,等. 乳腺癌转移相关基因表达蛋白组织微阵列的研究[J].肿瘤，2003，12（5）：283-285.
[4] Montero S, Guzman C, Vargas C, et al. Prognostic value of cytosolic p53 protein in breast cancer[J]. Tumour Biol, 2001, 22(5):337-344.
[5] Steeg PS, Bevilacqua G, Kopper L, et al. Evidence for a novel gene associated with low tumor metastatic potential[J]. J Natl Cancer Inst,1988, 80(3): 200-204.
[6] 张勇，杨学伟.乳腺癌nm23基因和雌、孕激素受体表达及其临床意义[J].肿瘤学杂志，2004，10（6）：407-409.
[7] 黄宗海，苏国强，毛乾国,等.血管内皮生长因子与nm23?鄄H1基因在青年女性乳腺癌组织中的表达及其与预后之间的关系[J].第一军医大学学报，2004,24(12)：1398-1401.
[8] Cipollini G，Moretti A，Ghimenti C，et al．Mutational analysis of the nm23?鄄H1 gene in human breast cancer[J]．Cancer Genet Cytogenet, 2000, 121(2)：181-185.
[9] Chen SL, Wu YS, Shieh HY, et al. p53 is a regulator of the metastasis suppressor gene nm23?鄄H1[J]. Mol Carcinog, 2003, 36(4):204-214.
