鼻咽癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞检测

【摘要】  　　［目的］探讨鼻咽癌患者T淋巴细胞亚群（CD3+、CD4+、CD8+）和杀伤（NK）细胞百分含量的变化及其意义。［方法］应用流式细胞仪（FCM）检测109例鼻咽癌患者外周血T淋巴细胞亚群和自然杀伤细胞的水平，其中未放疗者38例，放疗者71例，检测时未发生复发或远处转移者67例，已有复发或远处转移者42例，并测定20例正常对照组作比较。［结果］鼻咽癌患者与正常对照组比较，外周血CD4+细胞水平（24.15±10.91）明显下降（P<0.01）；CD8+ 细胞水平（39.77±15.66)明显上升（P<0.01）；CD4+/CD8+ （0.75±0.54）严重倒置（P<0.01）；CD3+细胞水平（61.55±15.96）无变化；NK 细胞水平（18.20±13.04） 升高（P<0.05）；放疗后除CD8+细胞水平上升（P<0.05），其它指标均无变化；复发或转移组除NK细胞水平上升（P<0.05），其它指标均无变化。［结论］鼻咽癌患者外周血T淋巴细胞亚群存在细胞免疫异常反应。

【关键词】  鼻咽肿瘤　流式细胞术　T淋巴细胞亚群　自然杀伤细胞

　　 1　材料与方法

    1.1　临床资料

    2001年11月～2005年2月，经病理明确诊断的各期鼻咽癌患者109例。年龄20岁～74岁，中位年龄50岁；男性92例，女性17例。排除伴发急、慢性感染，自身免疫疾病，糖尿病和创伤。根据鼻咽癌患者检测时有无进行过放疗而分为未放疗组38例和放疗组71例（包括放疗后复发或转移者）。根据检测时有否发生复发或远处转移分为无复发转移组67例和有复发转移组42例。

    以20例健康体检者为正常对照组，年龄17岁～64岁，中位年龄25岁；男性9例，女性11例。排除肿瘤，急、慢性感染，自身免疫疾病，糖尿病和创伤。

    1.2　实验材料

    Beckman Coulter 公司Epics MCL?鄄XL流式细胞仪，Coulter 公司Q?鄄PREP溶血仪，Beckman Coulter公司IgG?鄄PE/IgG?鄄FITC 双色标记单克隆抗体同型对照，CD3?鄄FITC/CD16，CD56?鄄PE双色标记单克隆抗体，CD4?鄄FITC/CD8?鄄PE双色标记单克隆抗体。

    1.3　实验方法

    取100μl外周抗凝血（EDTA抗凝），分别置于3个流式细胞反应管中，加入20μl双色标记单克隆抗体。其中加入20μl IgG?鄄PE/IgG?鄄FITC的反应管作为同型对照，加入CD4?鄄FITC/CD8?鄄PE的反应管检测CD4+/CD8+，加入CD3?鄄FITC/CD16，CD56?鄄PE的 反应管检测CD3/CD16+CD56+。混匀后，避光孵育15～20min。用Q?鄄PREP溶血仪溶血，溶血完成后，3000r/min离心5min，弃上清，加入500μlPBS混匀沉淀的白细胞，上机检测。

    以FS和SS设门，取淋巴细胞进行检测。先用IgG?鄄PE/IgG?鄄FITC调节荧光，然后分别读出CD4?鄄FITC/CD8?鄄PE，CD3?鄄FITC/CD16，CD56?鄄PE检测值。

    1.4　统计学处理

    实验数据采用t检验统计分析。

    2　结　果

    2．1　鼻咽癌组与正常对照组比较

    与正常对照组比较，鼻咽癌患者外周血CD4+细胞水平（24.15±10.91）显著下降（P<0.01）；CD8+细胞水平（39.77±15.66）显著上升（P<0.01）；CD4+/CD8+（0.75±0.54）严重倒置（P<0.01）；CD3+细胞水平（61.55±15.96）无变化；NK 细胞水平（18.20±13.04）升高（P<0.05），见表1。

    2.2　未放疗组与放疗组比较

    放疗组较未放疗组CD8+细胞水平出现上升（P<0.05）；CD3+、CD4+、CD4+/CD8+和NK水平在两组间均无统计学差异,见表2。

    2.3　未发生复发或远处转移组与发生复发或远处转移组比较

    未发生复发或转移组较出现复发或转移组NK细胞水平出现上升（P<0.05）；CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+在两组间均无统计学差异，见表3。

    3　讨　论

    本研究结果表明，鼻咽癌患者有免疫状态异常。鼻咽癌患者外周血T淋巴细胞亚群存在显著特点：CD4+/CD8+严重倒置，CD4+细胞水平下降，CD8+细胞水平升高。这种异常免疫状态跟鼻咽癌患者存在细胞免疫异常反应有关，可能关系EB病毒感染后的免疫反应。一般地，CD3+细胞代表成熟T淋巴细胞，是细胞免疫中主要的活性细胞。它按CD表型分为CD4+和CD8+两大亚群。CD4+细胞又称辅助T细胞，能协助B细胞分泌抗体和调节其它T细胞群的免疫应答。CD8+细胞常表现细胞毒活性，是主要的细胞毒效应细胞。在T淋巴细胞中，CD4+和CD8+细胞处于调节枢纽地位，其数量和比值变化反映免疫功能状态[3，4]。NK细胞表型为CD16+或CD56+，是非特异性细胞毒细胞，可以杀伤丢失MHC Ⅰ类分子的肿瘤细胞和病毒感染细胞，弥补CD8+细胞的不足[3]。

    在本研究中，与正常对照组比较鼻咽癌患者外周血总T淋巴细胞即CD3+细胞无变化，CD4+细胞下降（P<0.01），CD8+细胞上升（P<0.01），CD4+/CD8+严重倒置（P<0.01），NK细胞上升（P<0.05）。细胞毒细胞（CD8+和NK）呈过度增殖，而辅助调节细胞（CD4+）呈抑制状态，造成CD4+/CD8+严重倒置，证实鼻咽癌患者存在免疫状态异常。未放疗组与放疗组比较，除CD8+细胞水平上升（P<0.05），其它指标均无变化。检测时未发生复发或远处转移组与已有复发或远处转移组比较，除NK细胞水平上升（P<0.05），其它指标均无变化。值得注意的是CD4+/CD8+严重倒置（P<0.01）的状态始终不受放疗因素或复发转移因素影响。在本研究中检测的鼻咽癌患者外周血T淋巴细胞亚群始终存在显著特点：CD4+/CD8+严重倒置，CD4+细胞水平下降，CD8+细胞水平升高。因此，我们认为鼻咽癌患者存在免疫状态异常，这种异常免疫状态跟鼻咽癌患者存在细胞免疫异常反应有关。或许这种免疫特点对于研究鼻咽癌的病因是有益的,值得进一步研究。

【】
  ［１］　韩晓红，石远凯，冯奉仪,等.流式细胞仪分析肿瘤患者免疫功能变化[J].实用癌症杂志，1999,14（5）：273-275.

［２］　王书奎，周振英，吴晓柳,等.恶性肿瘤转移与患者免疫活性细胞水平的相关性研究[J].免疫学杂志，2003,19（11）:786-788.

［３］　徐从高，张茂宏，杨兴季,等.癌——肿瘤学原理和实践[M]. 第5版.济南:山东技术出版社，2000.49-70.

［４］　陈灏珠.实用内科学[M].第11版.北京:人民卫生出版社，2002.94.