痛泻要方对肠易激综合征模型大鼠血管活性肠肽的影响
【摘要】 目的从胃肠激素的角度研究痛泻要方肠易激综合征的机理。方法32只wistar大鼠随机分成4组：正常对照组，模型对照组、痛泻要方组、得舒特组，后三组大鼠采用束缚应激刺激加灌服番泻叶煎剂的方法造成肠易激综合征(IBS)大鼠模型，观察痛泻要方对肠易激综合征模型大鼠体内胃肠激素血管活性肠肽（VIP）的影响。结果模型对照血浆及局部肠组织中VIP含量与正常对照组比较，均有统计学意义（P<0.05～P<0.01）。痛泻要方组血浆VIP含量与模型对照组比较显著降低，有统计学意义（P<0.01）；痛泻要方组局部肠组织中VIP含量与模型对照组比较亦有统计学意义（P<0.05）。结论 IBS模型大鼠体内存在VIP水平升高的病理状态，痛泻要方可调控胃肠激素VIP的分泌和释放，进而达到治疗目的。
【关键词】 痛泻要方 肠易激综合征 大鼠 血管活性肠肽
Abstract：ObjectiveTo explore the mechanism of Tongxieyaofang in the treatment of irritable bowel syndrome from the perspective of gastrointestinal hormone.Methods32 wistar rats were divided randomly into 4 groups:normal control group,model control group, Tongxieyaofang group and Dicetel group.Using the methods of binding,stress and stimulation adding taking senna decoction in the later 3 groups of rats,the rats model of irritable bowel syndrome (IBS) was made.To observe the effects of Tongxieyaofang on gastrointestinal hormones( vasoactive intestinal polypeptide,VIP) in rats of IBS.ResultsThe contents of VIP in plasma and intestinal tissue in model group were higher than those in normal group（P<0.05～P<0.01）. The concentrations of plasma VIP in Tongxieyaofang group decreased more than those in model group（P<0.01）, and the contents of VIP in intestinal tissue in Tongxieyaofang group were also lower than those in model group(P<0.05).ConclusionThe pathological state of the higher levels of VIP exists in rats model of IBS. Tongxieyaofang can treat IBS probably by adjusting the secretion and release of gastrointestinal hormone (VIP).
Key words： Tongxieyaofang; Iritable bowel syndrome; Rats; Vasoactive intestinal polypeptide
痛泻要方为《景岳全书》所载的经典名方，由白术、白芍、陈皮和防风组成， 具有健脾舒肝、止痛止泻的作用，目前临床主要用于肝郁脾虚型肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)的治疗。近年来，国内外的研究发现，IBS的发病与胃肠激素水平密切相关，胃肠激素通过干扰胃肠道的动力与分泌吸收功能而对IBS产生了一定的影响。为了研究痛泻要方的治疗作用及探讨其作用机理，笔者复制出IBS大鼠模型，观察痛泻要方对大鼠血浆及局部肠组织中胃肠激素血管活性肠肽（vasoactive intestinal polypeptide,VIP）水平的影响，探讨其作用机制，为其临床应用提供实验依据。
1 材料
1.1 动物 Wistar大鼠32只，清洁级，雌雄各半，体重180 ～200 g，由医学院实验动物研究所提供，合格证号SCXK京2005?0013。随机分成正常对照组、模型对照组、痛泻要方组、得舒特组共4组，每组8只。
1.2 药物痛泻要方浓缩液由永安堂中药房提供，浓度为2 g/ml。阳性对照药：得舒特，由法国苏威特制药公司生产，批号0011，用0.5%羧甲基纤维素（CMC）配制成悬浮液，浓度为2 mg/ml。
1.3 主要试剂及仪器血管活性肠肽放免药盒、抑肽酶由英国皇家医学院研究生院内分泌部提供。检测仪器GC?911?γ?放射免疫计数器，中国科技大学实业总公司生产。定性滤纸，102中速，新华造纸厂生产。
2 方法
2.1 模型的建立按方法改进［1］，所有动物单只单笼饲养，笼底垫有滤纸。实验前10 h禁食，自由饮水。模型对照组、痛泻要方组、得舒特组动物分别予以番泻叶煎剂 (0.3 g/ml)灌胃 (按 20 ml/kg)，1次/d，灌服完番泻叶煎剂 1 h后，即用漆包线束缚大鼠的两肢，使之行动不便，烦躁不安，造成一定应激刺激，持续2 h，连续14 d。
2.2 各组用药 正常对照组：每日予以生理盐水灌胃20 ml·kg-1·d-1。其余各组按上法造模，14 d后给药：模型对照组灌服生理盐水 20 ml·kg-1·d-1，痛泻要方组灌服痛泻要方浓缩液20 ml·kg-1·d-1，得舒特组灌服得舒特悬浮液20 ml·kg-1·d-1，连续14 d。
2.3 检测项目
2.3.1 各组大鼠稀便率的检测 治疗后每天测量各用药组和模型对照组大鼠的稀便情况：每粒或每堆（不能分清粒数者）为1次，干便与稀便的区分以滤纸上有无污迹为标准，稀便率=稀便次数/总便数，实验结束时对各组大鼠稀便率进行统计分析。
2.3.2 各组大鼠血浆及局部肠组织中VIP含量的检测 实验结束后，所有大鼠用4%戊巴比妥（1 ml/ 100 g，ip）麻醉，用含EDTA的负压管经腹主动脉取血约4 ml（其中痛泻要方组有一只大鼠取血时出现凝血未取到标本），立即注入70 μl抑肽酶，混匀，低温离心，3 000 r/min×15 min，取上清，－20℃贮存；此外，所有大鼠取肛门上2～3 cm处约40 mg肠组织，生理盐水（1 ml/ 20 mg）匀浆，－20℃贮存。用放射免疫法检测血浆及局部肠组织中VIP的含量。
2.3.3 统计学处理 实验数据用±s表示，用SPSS软件进行统计分析，采用单因素方差分析方法，P<0.05表示有统计学意义。
3 结果
3.1 痛泻要方对IBS模型大鼠稀便率的影响研究发现，大鼠造模后性情改变，急躁易怒；毛色失去光亮，晦暗无光泽，鼠毛竖起易脱落；受刺激时排稀便明显。痛泻要方组经治疗后，毛色渐复，稀便率下降，稀便率与模型对照组比较有统计学意义，得舒特组稀便率与模型对照组比较有所降低，但无统计学意义。结果见表1。
表1 痛泻要方对IBS模型大鼠模型稀便率的影响（略）
与模型对照组比较，*P<0.05；n=8
3.2 痛泻要方对IBS模型大鼠血浆及局部肠组织中VIP含量的影响模型对照组血浆及局部肠组织中VIP含量与正常对照组比较，均有统计学意义。痛泻要方组血浆VIP含量与模型对照组比较显著降低，有统计学意义（P<0.01）；痛泻要方组局部肠组织中VIP含量与模型对照组比较亦有统计学意义（P<0.05）。得舒特组血浆VIP含量与模型对照组比较有所降低，但无统计学意义；得舒特组局部肠组织中VIP含量与模型对照组比较有统计学意义（P<0.05）。结果见表2～3。
表2 痛泻要方对IBS模型大鼠血浆VIP含量的影响（略）
与正常对照组比较，*P<0.05 ,**P<0.01；与模型对照组比较，△P<0.05,△△ P<0.01
表3 痛泻要方对IBS模型大鼠局部肠组织中VIP含量的影响（略）
与正常对照组比较,*P<0.05；与模型对照组比较，△P<0.05；n=8
4 讨论
IBS是一种以腹痛或腹部不适和排便习惯改变为特征的慢性功能性肠病，在祖国医学中属“泄泻”“腹痛”“郁证”等范畴，临床以肝郁脾虚型多见。IBS的病因和发病机制尚不清楚，一般认为，IBS不存在器质性病变，而是一种与精神、饮食因素有关的胃肠功能紊乱性疾病［2］，胃肠激素是调节胃肠运动的重要因素，与IBS密切相关。本研究根据IBS的病因及临床特征，采用束缚四肢加灌服番泻叶的方法复制肝郁脾虚型IBS大鼠模型，这种造模方法既符合了医学认为IBS是一种心身性疾病的认识，又符合了中医情志致病、肝郁乘脾的学说，是目前研究IBS发病机制及其较为理想的实验动物模型。本实验结果表明，束缚应激刺激加灌服番泻叶的造模方法可引起大鼠性情改变，急躁易怒；毛色失去光亮，晦暗无光泽，鼠毛竖起易脱落；受刺激时排稀便明显，稀便率增加，与IBS的临床表现相吻合，类似中医肝郁脾虚型的表现，说明造模是成功的。
中医学认为情志失调导致肝郁乘脾是本病的主要病因与病机。中医七情学说中，情绪恼怒变化与肝关系最为密切。肝主疏泄而调畅情志，情志所伤，肝木有病，则气机拂郁，脾主运化受制。如吴鹤皋云:“泻责之脾，痛责之肝，肝责之实，脾责之虚，脾虚肝实，故令痛泻。”故其病证候变化虽以脾胃为主，但其本多在肝。治疗多从补脾泻肝论治。痛泻要方（原名白术芍药散）为《景岳全书》所载的经典名方，是治疗肝郁脾虚，腹痛泄泻的代表方剂，该方由白术、芍药、陈皮、防风4味药组成，具有补脾泻肝之功效。方中以白术燥湿健脾；白芍养血泻肝；陈皮理气醒脾；防风散肝舒脾，诸药相配，补脾土而泻肝木，调气机以止痛泻，对调节植物神经功能，改善肠道分泌功能有较好的作用。
已有研究表明，IBS与胃肠激素的异常分泌有密切关系［3］。胃肠激素可以通过肠道肽能神经释放多肽类神经递质起调节作用，也可以直接作用于胃肠道平滑肌细胞的相应受体。胃肠激素具有多种分泌方式(内分泌、旁分泌、神经分泌、腔分泌和自身分泌等)，对胃肠道的分泌、运动、吸收、营养和免疫等起着重要作用，它们的分泌异常可导致胃肠运动紊乱。
VIP为胃肠激素，已证实为脑肠肽，可同时存在于中枢神经系统及胃肠道黏膜组织中。VIP是一种含28个氨基酸残基的碱基多肽，在胃肠道主要以神经递质的方式发挥局部作用，其主要作用是舒张胃肠平滑肌、舒张血管，此外，VIP具有促进分泌和吸收功能，可促进肠道水和电解质的分泌［4］。关于VIP与IBS的关系，国内外的研究尚无一致的结论。国外相关研究［5］认为VIP与IBS患者的腹痛、腹泻、便秘等症状关系密切，IBS患者腹泻时，血中VIP较正常人空腹时有明显升高。而张红杰等［6］的研究显示，IBS组肠黏膜中VIP含量明显高于对照组，但血浆中VIP的含量不高，推测其机理可能与VIP半衰期仅1～2 min，在血浆中迅速被破坏有关。李兆申等［7］研究表明腹泻型IBS(D-IBS)及便秘型IBS(C-IBS)患者结肠黏膜VIP含量均显著高于正常对照组。认为C-IBS患者肠黏膜中VIP升高，从而造成了肠道动力抑制性背景，以致蠕动性收缩不易发生，导致便秘；而D-IBS患者肠黏膜中VIP升高，可初步解释为VIP升高刺激垂体细胞分泌ACTH起到CRF类似作用，或者理解为是肠动力增强后的一种负反馈机制。据此推测IBS患者肠道内分泌细胞VIP增多。
本研究发现，IBS模型对照组大鼠血浆及肠组织中VIP含量明显升高，与正常对照组比较有统计学意义，说明IBS模型大鼠体内存在VIP水平升高的病理状态，推测VIP升高是导致大鼠腹泻的原因之一，可能与VIP促进肠道水和电解质分泌增加有关。痛泻要方组血浆及局部肠组织中VIP含量与模型对照组比较均有统计学意义，说明痛泻要方可调控胃肠激素VIP的分泌和释放，通过降低IBS模型大鼠体内VIP水平，进而达到治疗目的。得舒特组血浆及肠组织中VIP含量与模型对照组比较虽有降低，但效果不如痛泻要方组明显。痛泻要方通过何种途径影响VIP的分泌，及其对其他胃肠激素的影响尚有待进一步深入研究。
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