维药芹菜籽总黄酮含量测定及提取工艺研究

来源:岁月联盟 作者: 时间:2010-07-12

               作者:乌莉娅 沙衣提 耿萍 虞慧云

【摘要】  目的检测维药芹菜籽中总黄酮的含量,并优选其提取工艺。方法分别采用超声提取法和索氏提取法,用比色法比较维药芹菜籽中总黄酮的含量。结果以芦丁为对照品时, 超声提取法测得芹菜籽中总黄酮的含量为19.61%;索氏提取法测得芹菜籽中总黄酮的含量为16.32%。结论 超声提取法更为简便、稳定、可行、重现性好。

【关键词】  芹菜籽 总黄酮 提取

  Abstract:ObjectiveTo determine the content of total flavonoids and optimize the extracting process in Uygur medicine Celery seeds. MethodsThe two different extracting methods: Ultrasonic extraction and Soxhlet's extracter were used.The content of total flavonoids in Celery seeds was compared by colorimetry.ResultsWhen rutin was used as standard material, the average content of total flavonoids in Celery seeds extract was 19.61% by ultrasonic extraction ,while 16.32% determined by Soxhlet's extracter. ConclusionUltrasonic extraction for determining the content of total flavonoids in Celery seeds extract is convenient, stable, practicible, and reproducible.

  Key words:Celery seeds;  Total flavonoids;  Extraction
   
  芹菜Apium graveolens L.又名香芹、旱芹,是伞形科一年生或两年生草本植物,喜肥沃土壤,全国和世界各地均有栽培[1]。 维药芹菜籽是芹菜的干燥成熟果实。维医临床表明,其性二级干热,具有散气、消肿、止痛、利尿、降血压的作用。在维吾尔药中主要用于高血压病、关节炎、类风湿关节炎、气滞性子宫炎、腹水、肾脏等疾病[2]。目前对其挥发油成分研究的比较多,其挥发油主要成分为α-芹子烯、柠檬烯、丁基苯酞等[3,4]。并且从其正丁醇部位分离出4个黄酮类化合物[5],分别为: 木犀草素?3′?O?.?D? 葡萄糖苷,木犀草素?7?O?.?D?葡萄糖苷,香叶木素?7?O?.?D?葡萄糖苷,柯伊利素。实验表明,芹菜中含有丰富的黄酮类化合物[6],具有降压安神、降血脂、保护血管和增强免疫力等功能[7]。但对其黄酮含量测定的研究还未见报道。本实验拟对两种方法提取物中总黄酮含量进行分析测定,旨在为维医临床用药及对芹菜的综合开发利用提供依据。

  1  仪器与材料

  1.1   仪器Spectrumlab 54 紫外分光光度计(上海市棱光有限公司); KQ-400DB型数控超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司); 天平(sartorius 德国产);  DZF-6021型真空干燥箱(上海精密实验设备有限公司);  DRT-SX型恒温电热套(郑州长城科工贸有限公司);RE-52旋转式蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);SHB-III循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)。

  1.2  材料芦丁标准品(药品生物制品检定所,0080-9705);芹菜籽(购于新疆和阗维吾尔,由本校乌莉娅老师鉴定);所用试剂均为分析纯。

  2  方法与结果

  2.1   样品溶液的制备

  2.1.1   精密称取芹菜籽2 g,置于干燥的索氏提取器中,用石油醚回流脱脂1 h,弃去石油醚提取液。再加入甲醇20 ml超声提取两次,时间分别为30,20 min,超声温度为25℃,过滤并合并滤液。回收甲醇,挥干后用甲醇溶解,置于25 ml容量瓶中加甲醇定容,摇匀。此为样品溶液Ⅰ。

  2.1.2   称取芹菜籽细粉2 g,于真空干燥箱中干燥6 h,温度为60℃,精密称定置于干燥的索氏提取器中,加入乙醚120 ml,加热回流至提取液无色,放冷,弃去乙醚液,再加甲醇90 ml,加热回流至提取液无色,过滤,将滤液回收甲醇,挥干后再用甲醇溶解,移至25 ml 容量瓶中,用少量甲醇洗涤容器,洗液并入容量瓶中,并定容[8]。此为样品溶液Ⅱ。

  2.2   总黄酮的含量测定[9]

  2.2.1  对照品溶液的制备取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品20 mg,置于100 ml容量瓶中,加甲醇适量置水浴上微热使之溶解,放冷并稀释至刻度,摇匀,即得0.2 mg/ml芦丁标准品。备用。

  2.2.2  标准曲线的制备[10]及线性关系精密吸取上述对照品液0.0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 ml分别置于25ml容量瓶中,加蒸馏水至6ml,加5%亚硝酸钠溶液1 ml,使混匀,放置6 min,加10%硝酸铝溶液1 ml,摇匀,放置6 min,加4%氢氧化钠溶液10 ml,再加水稀释至刻度,摇匀,放置15 min。取出以第1份为空白溶液,在510 nm处测吸光度,以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标绘制标准曲线。结果见表1。

  表1  标准曲线数据(略)   

  以上表明在0.008~0.040 mg·ml-1 范围内,浓度和吸光度呈良好的线性关系。标准曲线方程为:A = 14.925C -0.015,r = 0.999 6

  2.2.3   稳定性实验分别精密吸取样品溶液Ⅰ,Ⅱ各2 ml,置于10 ml具塞试管中,同制备标准曲线的操作,在0,15,30,45,60 min测得吸光度,结果见表2。

  表2  稳定性实验结果(略)   

  结果表明,芹菜籽两种样品溶液吸光度的RSD1=0.16%(n=5),RSD2=1.08%(n=5),在60 min内基本稳定。

  2.2.4  精密度实验精密吸取两种样品溶液各2 ml,分别置于10 ml具塞试管中,同标准曲线的操作测定吸光度,结果见表3。

  表3  精密度实验结果(略)   

  结果表明,样品溶液的平均吸光度为:RSD1=0.59% (n=6); RSD2=1.48% (n=6),说明超声提取法的精密度较好。

  2.2.5  重现性实验取相同样品5份,照样品的测定进行实验,测得两种样品中每份试样总黄酮的含量,结果表明,5次测得的平均含量为:
   
  样品Ⅰ:18.73%     RSD1=0.98% ;
   
  样品Ⅱ:15.62%     RSD2=1.36% 。证明超声提取法的重现性较好。

  2.2.6  回收率实验分别精密吸取芦丁对照品溶液各1.0,2.0 ml分别置于5只10 ml容量瓶中,各加入精密吸取的两种样品溶液1.0 ml,按标准曲线制备项下操作,在510 nm处测吸光度,并回收率。结果表明,由回归方程得出5次的加样回收率为P1=97.52% ,P2=93.67% ;RSD1=1.86%, RSD2=2.05%,说明超声提取法测得的结果较为准确。

  2.2.7  样品溶液的测定分别精密吸取样品溶液1.0,2.0,3.0 ml 置于25 ml容量瓶中,同制备标准曲线操作,在510 nm处测得吸光度并计算百分含量。结果见表4。

  表4  芹菜籽提取物中总黄酮含量测定结果(略)   

  3  讨论
   
  由测定结果可以看出,以芦丁作为标准品对不同工艺提取的维药芹菜籽醇提取物中总黄酮含量进行测定分析。结果见表5。

  表5  总黄酮含量测定分析(略)   

  两种工艺检测结果说明,超声提取法为佳。
   
  采用比色法测定芹菜籽中总黄酮含量具有快速、准确、重现性好的特点。
   
  芹菜不同部位所含的天然黄酮类化合物一直受到人们的关注,其具有抗炎症、降血压、抗动脉硬化、抗焦虑以及抗氧化等多方面的生物活性[11]。许多作用机理仍不清楚,对地产芹菜不同部位的研究还须进一步探究,使其对临床药用提供一定的依据。

【】
    [1] 刘勇民. 维吾尔药志(下册)[M].乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社,1999:346.

  [2] 中华人民共和国卫生部药政局.中华人民共和国卫生部药品标准·维吾尔药分册[S].乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社,2000:20.

  [3] 方洪矩.挥发油成分的研究-芹菜种子挥发油的化学成分的研究[J].药物分析杂志,1984,4:203.

  [4] 阿布力米提·伊力,刘 莉. 维吾尔医常用药材-芹菜籽挥发油化学成分的研究[J].天然产物研究与开发,2004,16(1):36.

  [5] 吕金良,牟新力.维药芹菜籽化学成分研究[J].时珍国医国药,2006,17(1):6.

  [6] 陈建初. 芹菜黄酮及其在主要制汁过程中的变化[J].浙江农业大学学报,1998,24(3):279 .

  [7] 刘仲则. 中草药黄酮类化合物心血管活性成分概述[J]. 中草药,1987,19:6702.

  [8] 国家药典委员会.药典,Ⅰ部[S].北京:化学出版社,2000:23.

  [9] 许 琦. 芹菜总黄酮的提取及含量测定[J].食品科技,2006,31(7):241.

  [10] 黄锁义,姚小敏. 竹叶中总黄酮的提取及鉴别[J].时珍国医国药,2006,17(7):1228.

  [11] 孟宪舒. 中成药分析[M].北京:人民卫生出版社,1996:134.