CD44v6和MRP在卵巢癌中的表达

            作者：谭文福 吴绪峰 陈惠祯

【摘要】  目的 探讨CD44v6和 MRP在上皮性卵巢癌组织中表达与化疗疗效和预后的关系。方法 采用免疫组织化学S?P法,检测10例正常卵巢组织、20例卵巢良性肿瘤和50例卵巢恶性肿瘤上皮性组织中CD44v6和 MRP的表达。结果 ①CD44v6和MRP在卵巢恶性肿瘤中的表达明显高于在良性及正常组织中的表达（P<0.05）； ②CD44v6和MRP强阳性率与卵巢癌的临床分期、组织学分级和淋巴结转移有关(P<0.05)； ③卵巢癌中CD44v6和MRP的表达呈正相关（r=0.557, P<0.05）； ④CD44v6和MRP阳性表达的病例，化疗疗效和预后差。 结论 检测卵巢癌中的CD44v6和MRP表达可反映肿瘤细胞的化疗疗效及预测预后。

【关键词】  卵巢肿瘤 免疫组化 CD44v6 MRP

   0  引言

    卵巢癌是女性生殖系统第二大常见恶性肿瘤，由于肿瘤细胞转移和化疗耐药，致使困难，患者预后差。本实验旨在联合检测卵巢癌组织中CD44v6和MRP的表达，分析其相关性，从而为预测卵巢癌化疗疗效和预后、指导治疗提供实验依据。

    1  材料与方法

    1.1  标本来源 

    10例正常卵巢、20例良性肿瘤和50例上皮性卵巢癌组织,标本来自武汉大学中南妇瘤科，1999年4月～2004年10月手术标本经病理证实的病例。标本经10%福尔马林固定，常规石蜡包埋。年龄36～76岁,平均58.25岁。50例上皮性卵巢癌组织中浆液性囊腺癌36例，黏液性囊腺癌4例，子宫内膜样癌6例，透明细胞癌4例；术前均未行化疗和放疗,术后经病理证实的高分化18例,中分化18例,低分化14例；临床分期（FIGO）I～II期14例，III期34例和IV期2例；有淋巴结转移者28例,无淋巴结转移者22例。

    1.2  方法 

    采用免疫组织化学S?P法, 4μm厚连续切片，切片常规脱蜡水化后,用3%过氧化氢去除内源性过氧化物酶, 微波抗原修复,余步骤按试剂盒说明书进行。MRP和CD44v6单克隆抗体（一抗为鼠抗人）和S?P试剂盒,均购自北京中山生物技术有限公司。用已知阳性切片做阳性对照,用PBS代替一抗做阴性对照。用HIPAS-1000高清晰度彩色病理图像免疫组化测量系统进行图像分析。

    1.3  结果判断 

    CD44v6和MRP以细胞膜和/或细胞浆呈棕黄色为阳性细胞，否则为阴性。细胞着色强度判断：①CD44v6［1］，(-)为阴性；(+)为≤20%；(++)为21%～50%；(+++)为>50%。②MRP［2］,(-)为阴性；(+)为≤25%；(++)为26%～50%； (+++)为>50%。(++)以上为强阳性。

    1.4  统计学处理 

    采用统计软件SPSS11.5进行统计学分析。采用卡方检验和精确概率法（以P<0.05为有统计学意义），指标间进行Spearman相关分析。用COX回归模型评价蛋白表达与卵巢癌预后因素的关系。

    2  结果

    2.1  CD44v6和MRP的表达

    CD44v6在卵巢正常组织、良性肿瘤和恶性肿瘤组织中的阳性表达率分别为0%、10.0%和68.0%；MRP分别为10.0%、15.0%和64.0%。CD44v6和MRP在卵巢恶性肿瘤中阳性表达率，显著高于卵巢正常组织和良性肿瘤组织 (P<0.05)。卵巢浆液性、非浆液性囊腺癌中，CD44v6表达分别为72.2%和57.1%，MRP分别为66.7%和57.1%，差异均无显著性（P>0.05）。

    2.2  CD44v6和MRP与临床病理参数的关系

    CD44v6和MRP蛋白的表达与临床分期（FIGO）、组织学分级和淋巴结转移无关(P>0.05)。但它们在卵巢恶性肿瘤的表达强度(强阳性率)均为32.0%（16/50），两者都与卵巢癌的上述病理参数有关(P<0.05)。28例淋巴结转移阳性病例中，淋巴结转移阳性率随着临床分期、组织学分级的升高而增加，且III期与IV期比较差异有显著性(P<0.05)，而组织学分级组间比较差异无显著性(P>0.05)，见表1。 表1  CD44v6和MRP表达强度与临床分期（FIGO）、组织学分级和淋巴转移的关系

    2.3  CD44V6和MRP表达的相关性 

    50例卵巢癌中MRP与CD44v6表达， 经Spearman相关分析， 结果显示： r=0.557， P<0.05， 表明MRP与CD44v6表达呈正相关，  见表2。表2  MRP与CD44v6在卵巢癌中表达的相关性

    2.4  CD44v6和MRP表达与化疗疗效

    CD44v6和MRP阳性表达者，CD44v6化疗有效率为58.8%(10/32)、MRP为31.2%(20/34）,CD44v6化疗无效率为41.2%(22/32)、MRP为68.8%(14/34）；CD44v6和MRP共同阳性表达组，化疗有效率为28.6%(8/28)、无效率为71.4%(20/28)，共同阴性表达组化疗有效率为75.0%(9/12)、无效率25.0%(3/12)，CD44v6和MRP化疗有效率与无效率比较差异有显著性(P<0.05)。

    2.5  CD44v6和MRP表达与预后

    应用Kaplan?Meier生存曲线法患者生存率，见图1，MRP表达阳性的患者平均生存时间中位数为42.5月, 1、3年生存率分别为79.2%和34.8%；MRP表达阴性的患者生存时间中位数为62.4月, 1、3年生存率分别为100.0%和86.7%，二者比较,差异均有显著性(P<0.05)。COX回归模型多因素分析发现，CD44v6和MRP表达均无显著意义（P>0.05），说明都不是独立的预后因素。

   3  讨论

    3.1  CD44v6在卵巢癌中的表达

    细胞黏附分子是细胞膜上分布极广泛的跨膜糖蛋白,主要介导细胞黏附。细胞黏附分子CD44v6是变异型CD44成员之一, 公认与卵巢癌的浸润和转移密切相关[3]。本研究CD44v6在卵巢正常组织、良性肿瘤和恶性肿瘤中,阳性表达率分别为0%、10.0%和68.0%，差异有显著性（P=0.000）。孙宜等[4]采用RT?PCR方法，报道CD44v6在正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤、卵巢癌无转移和有转移者阳性表达率分别为0%、10%、75%和88%。两者在恶性组的阳性表达率存在差异,可能与样本多少及采用的检测方法不同有关,但两者均表明CD44v6在卵巢癌的发生过程中上调。

    3.2  MRP在卵巢癌中的表达

    多药耐药相关蛋白（multidrug resistance associated protein, MRP）是近年来新发现的一种耐药相关蛋白。多数实验结果显示MRP与肿瘤细胞化疗耐药密切相关，MRP在晚期肿瘤中表达增高,并可反映肿瘤的浸润、转移及预后等生物学特性[5]。MRP的扩增和过度表达导致肿瘤细胞对化疗药物耐药，主要因MRP参与内源性物质和毒物的谷胱甘肽巯基复合物的转运。刘东光等[6]采用RT?PCR方法检测30例原发上皮性卵巢癌中MRP的表达，发现MRP蛋白高表达者MDR相关药物对其肿瘤细胞抑制率低，并认为 MRP表达可能与肿瘤细胞的固有耐药有关。本研究结果显示，MRP在正常、良性肿瘤和恶性肿瘤卵巢组织中，阳性表达率分别为10.0%(1/10)、15.0%(3/20)和64.0%(32/50)，差异有显著性（P=0.000），与报道一致[2]。MRP在正常卵巢组织和卵巢良性肿瘤组织中都有表达，也表明MRP表达可能与肿瘤细胞的固有耐药有关。

    3.3  CD44v6和MRP在卵巢癌中的表达与临床病理参数的关系

    本研究结果显示，CD44v6和MRP在卵巢癌中表达随临床分期、组织学分级的升高,以及淋巴结转移而增加，但差异无显著性(P>0.05)，而CD44v6强阳性表达率与临床病理参数显著相关(P<0.05)，这与文献报道一致[7]，提示CD44v6表达越强越易发生肿瘤的浸润转移，越能加速病程的进展；MRP的表达在临床分期方面与文献报道一致[6，8]，且强阳性表达率也与上述病理参数显著相关（P<0.05）。

    3.4  CD44v6和MRP表达与化疗疗效和预后的关系

    本研究表明CD44v6和MRP在卵巢癌中的表达存在正相关关系（r=0.557，P<0.05)，CD44v6和MRP共同阳性表达病例，化疗疗效差、无进展生存期短和预后差。有关CD44v6耐药机理，研究表明卵巢癌耐药细胞系OV1?VCR和人T淋巴母细胞样瘤耐药细胞系CCRF?CEM都出现CD44基因片段缺失,提示CD44基因片段缺失可能是导致肿瘤细胞耐药的原因[9]。单因素分析发现，MRP基因高表达者化疗疗效差、无进展生存期短。这提示MRP可能在卵巢癌的化疗耐药中发挥了重要作用。本研究中，CD44v6和MRP阳性表达者，以及CD44v6和MRP共同表达中，化疗有效与无效相比较，阳性表达者化疗有效率显著低于阴性表达者（P<0.05）。因此，本研究表明，联合检测CD44v6和MRP对预测卵巢癌病情进展、估计预后和指导有一定的意义。但COX回归模型多因素分析发现CD44v6和MRP并非独立的预后因素，从而说明肿瘤的发生发展是一个多步骤、多因素相互作用的结果，但其相互作用机理还有待进一步研究。

【文献】
  ［1］ Julia K, Bar, Piotr Grelewski, et al. Type IV collagen and CD44v6 expression in benign, malignant primary and metastatic ovarian tumors: correlation with Ki?67 and p53 immunoreactivity/[Ｊ/]. Gynecologic Oncology, 2004,95(1):23?31.

［２］ Barbara A,Goff,MD,Pamela J,et al. Evaluation of Chemoresistance Markers in Women with Epithelial Ovarian Carcinoma［Ｊ］. Gynecologic Oncology, 2001,81(1):18?24.

［3］ Gunther U,Stauder R,Maver B,et al.Are CD44 variant isoforms involved in human tumor progression?/[J/]. Cancer Surveys,1995,24(1):19?42.

［4］ 孙宜,沈仲毅,季晓琼. 黏附分子CD44v6表达和p53基因突变与卵巢癌转移关系的研究［J］. 中华妇产科杂志,2000,35(4):225?228.

［5］ 王延明,王爱民,李险波，等.食管癌、癌旁和淋巴结组织中MDR1、MRP表达及其预后关系［J］. 肿瘤,2001,21(4):266?268.

［6］ 刘东光，戴淑真，王言奎，等. 原发上皮性卵巢癌MRP基因表达及其临床意义［Ｊ］. 妇产科进展，1999,8(4):320?325.

［7］ 仲建新,邓艳,施公胜. 卵巢上皮性肿瘤CD44V6的表达及其临床意义的研究［J］. 南通医学院学报, 2001,21(2):135?148.

［８］ 程国钧,祝华,孙丽亚，等. 耐药相关基因在卵巢癌组织中的表达及其临床意义［J］. 中华妇产科杂志,2000,35(2):87?90.

［9］ Hosono J,Narita T,Kimura N,et al.Involvement of adhesion molecules in metastasis of S W1990, human pancreatic cancer cells/[J/].J Surg Oncol,1998,67(2):77?84.