免疫性不孕不育的实验研究进展
【关键词】 免疫
关键词：免疫性不孕/不育； 实验研究
不孕症是妇科的常见病之一,至20世纪中期不孕不育患者的血清中发现精子凝集素以来，免疫性不孕症日益受到关注。据统计，近年发现的不孕症中，20%~40%是由于免疫原因引起的［1］。随着生殖医学的，诸多学者通过实验研究尝试着从不同角度探讨本病的病因病机，探索本病的方法。现将近年来有关本病的实验研究综述如下。
1 病机
罗颂平等［2］为弄清血清AsAb对精子机能的影响，进行了精子爬高试验和穿卵试验。实验表明，经AsAb阳性血清处理后，精子上行高度显著低于阴性血清组和空白组。同时还进行了精子受精能力的体外试验，即人精子穿透地鼠卵试验。以AsAb阳性血清处理精子，再进行穿卵试验，精子上游获能的数目显著低于对照组，穿卵率略低于对照组。提示AsAb主要影响精子上游，从而降低了受孕的机会，对受精过程可能无显著影响。孙晓溪等［3］为了观察透明带抗独特型抗体免疫生育中IL2、IL4两种细胞因子含量的变化，分别用猪卵透明带（PZP）抗小鼠抗PZP单克隆抗体（17D3mAb）亲和提纯的透明带抗原和PZP的抗独特抗体（Ab2）免疫小鼠，通过与细胞体外诱生，测定上清液中IL2和IL4含量，结果表明Ab2免疫组主要介导的是Th2型免疫反应，而PZP免疫组和17D3mAb靶抗原免疫组IL2水平明显升高，可能介导的是Th1型免疫反应。此项研究为抗透明带免疫不孕的实验研究提供了动物模型，也在一定程度上说明了抗透明带所致不孕的机理。林建华等［4］用正常小鼠卵巢匀浆抽提物作为抗原免疫兔，制备兔抗鼠卵巢抗血清，并提取抗卵巢抗体（AoA），将AoA被动免疫小鼠，应用光镜、电镜观察发现AoA作用下的小鼠卵巢多种组织成分均发生不同程度的病理变化，其中尤为明显的是透明带和颗粒细胞，随AoA剂量的增加而损伤加重；受孕率均降为0；低剂量AoA组超促排卵药物治疗后的排卵率和受精率较对照组明显降低，高剂量AoA组超促排卵无效。结果表明AoA可导致卵巢组织的病理改变，影响排卵和受精，从而降低卵巢功能。
2 治疗
梁国珍等［5］以精子混悬液加福氏佐剂及死卡介苗制成抗原，分别给助孕Ⅰ号方组、助孕Ⅱ号方组及对照组SD大鼠腹股沟皮下注射，制作动物模型。于首次免疫后1周灌胃助孕Ⅰ号方与Ⅱ号方，对照组灌同容量清水，连续4周。于免疫前及停药后第1，6天分别行眼球取血，用浅盘凝集法测定AsAb。实验结果表明有滋肾补肾、活血化瘀作用的助孕Ⅰ号方、助孕Ⅱ号方有降低SD大鼠对精子抗原的免疫反应、抑制抗精子抗体产生的作用。李祥兴等［6］采用同种异体主动免疫法建立AsAb阳性动物模型，同时建立检测大鼠血清AsAb的酶联免疫吸附法（ELISA）。用知柏地黄煎剂治疗AsAb阳性大鼠2个月后，其转阴率达78.3%，与对照组相比，有显著性差异（P＜0.01）。表明知柏地黄丸对治疗抗精子抗体阳性所致的免疫不育症具有一定疗效。此项实验为研究免疫性不育症提供了较好的动物模型，同时也为免疫性不育动物模型的治疗效果检测提供了有用的手段和客观指标。赖安妮等［7］将人精子膜抗原注入雌性小鼠腹腔，精子抗体阳性者为免疫不育模型，分别灌胃中药胎宝冲剂、泼尼松及生理盐水，结果生理盐水组受孕率为38.98%,泼尼松组为47.06%，胎宝冲剂高、低剂量组分别为70%与75%，胎宝冲剂低剂量组与生理盐水组比较有显著性差异（P＜0.05）。胎宝冲剂低剂量组孕鼠平均着床数为（10.93±2.91)只，明显高于泼尼松组（6.75±4.59)只。酶联免疫吸附实验（ELISA）和微量细胞毒实验测定AsAb，显示抗体下降，胎宝冲剂低剂量组和泼尼松组细胞毒百分率均显著低于生理盐水组（P＜0.05或P＜0.01）。提示中药胎宝冲剂对生殖免疫有调节作用，能够抑制精子细胞毒抗体，促进免疫不育小鼠的生育能力。王望九等［8，9］用精子抗原免疫昆明种雌小鼠，建立免疫不孕不育动物模型，饲喂中药复方免不1号、2号。结果：免疫不育症鼠血清、宫颈粘液AsAb水平高，卵巢和子宫内膜免疫复合物沉积多，卵巢闭锁卵泡多；中药能降低卵巢子宫内膜免疫复合物沉积率，降低血清和宫颈粘液AsAb水平，且停药后抗体反跳幅度小，提高动物的妊娠，每胎仔数明显高于模型组（P＜0.05）及西药组（P＜0.05或P＜0.01）。提示免不方通过调节免疫系统，吸收、清除循环和局部AsAb、免疫复合物，降低和修复组织损伤，从而提高小鼠的妊娠率。何燕平等［10］将80只SD大鼠分为4组，采用主动免疫法建立血清AsAb阳性大鼠模型，并于造模时间同期分别用针刺法（取关元俞、次廖穴）、归肾液及针药结合治疗，结果针药结合组SD大鼠血清AsAb转阴率明显高于归肾液组、针刺组（P＜0.05），说明针药结合有较好的抑制AsAb产生的作用。张永锋等［11］将人精子作为抗原注入雌性实验鼠双侧腹股沟皮下建立动物模型，分别灌胃中药助孕灵、泼尼松及生理盐水。结果助孕灵高、低剂量组的受孕率、平均着床点数高于泼尼松组和生理盐水组（P均＜0.05）；助孕灵组AsAb转阴率高于泼尼松组，与生理盐水组比较有显著性差异；助孕灵两个剂量组大鼠的子宫卵巢重量均高于泼尼松组和生理盐水组，高剂量组与生理盐水组比较有显著性差异；以子宫内膜处于增生期、分泌期为阴性，可见蜕膜组织、AS现象、胎盘及胚胎者为阳性，助孕灵高剂量组阳性百分率为69.23%，低剂量组为63.64%，泼尼松组为44.44%，生理盐水组为12.5%。提示助孕灵有抑制AsAb，促进子宫、卵巢发育，提高受孕率的作用。崔英霞等［12，13］用雄性新西兰兔精子分别对雌、雄新西兰兔进行人工主动免疫建立免疫性不育动物模型，将AsAb阳性兔分为抑抗灵组、泼尼松组、未治疗组和阴性对照组。经统计，未治疗组与抑抗灵高、中、低剂量组45 d比较，未治疗组与泼尼松组45 d比较，同一剂量抑抗灵治疗45 d与15 d血清AsAb转阴率比较均有显著性差异（P均＜0.05）；雄兔在抑抗灵治疗前后、泼尼松治疗前后、抑抗灵组与未治疗组之间、泼尼松组与未治疗组之间精浆AsAb转阴率比较，精子活率比较及精子运动速度比较，均有显著性差异（P均＜0.05）。结果表明抑抗灵可使血清和精浆AsAb转阴，从而提高精子活率及精子运动速度，改变精子运动状态，改善精子质量。在此实验基础上，戴晓莉等［14］在用抑抗灵对新西兰兔治疗完成即AsAb转阴率达到预期疗效时，观察雌雄兔交配后的孕育结果，实验结果提示抑抗灵在使兔血清、精浆AsAb转阴后，可使其恢复生育能力，以低剂量45 d疗效最好，大剂量抑抗灵对新生兔体重无影响。
3 评估与展望
综上所述，实验研究复制出了抗精子抗体及抗透明带抗体动物模型，取得了一定的进展，但其它免疫不孕模型未见报道，有待于进一步探讨。随着生殖免疫学的、分子生物技术的引入和研究的逐步深入，将会丰富发展免疫性不孕不育的理论，为人类生殖医学作出贡献。临床研究说明，中医免疫性不孕不育确有疗效，而且未见明显毒副作用，值得进一步研究开发，推广应用。但目前存在治疗方法较多，用药繁杂的弊端，有必要进一步通过实验研究与临床对比观察筛选有效方药以缩短疗程，提高疗效。特别是有关中药调节人体免疫、消除抗体的内在机理，更有待于深入阐明。
：
［1］ 王淑贞.实用妇产［M］.北京：人民卫生出版社，1990：56.
［2］ 罗颂平，张玉珍，梁国珍，等.免疫性流产与免疫性不孕的中医治疗［J］.医学研究通讯，1999，28（4）：10.
［3］ 孙晓溪，李大金，朱 影，等.抗卵透明带免疫应答中IL2和IL4含量的变化［J］.上海免疫学杂志，1999，19（1）：42.
［4］ 林建华，严隽鸿，林其德，等.抗卵巢抗体对卵巢组织及其功能影响的实验研究［J］.中华妇产科杂志，1998，33（1）：20.
［5］ 梁国珍，罗松平，刘祖贞，等.助孕Ⅰ号Ⅱ号方对鼠血清抗精子抗体的影响［J］.免疫学杂志，1994，10（1）：44.
［6］ 李祥兴，虞小霞，刘 键，等.知柏地黄煎剂治疗免疫性不育的实验研究［J］.中药新药与临床药理，1997，8（2）：83.
［7］ 赖安妮，宋济范，刘先菊，等.中药胎宝抑制抗精子抗 体的实验研究［J］.中国中西医结合杂志，1997，17（6）：360.
［8］ 王望九，黄 震，汤明礼，等.免不方治疗免疫性不育雌鼠的组织学和免疫组化［J］.解剖学杂志，2000，23（6）：555.
［9］ 王望九，产美英，黄 震，等.免不1号对雌性小鼠免疫性不孕症的实验研究［J］.中国中医基础医学杂志，2002，8（9）：20.
［10］ 何燕萍，唐纯志，梁国珍，等.针药结合疗法对免疫性不育大鼠血清抗精子抗体的影响［J］.广州中医药大学学报，2001，18（2）：140.
［11］ 张永锋，王俊玲，马德芬，等.助孕灵对抗精子抗体阳性大鼠模型的影响［J］.中药药理与临床，2001，17（5）：38.
［12］ 崔英霞，黄宇烽，王咏梅，等.抗精子抗体介导的免疫性不育动物模型的建立［J］.中华男科学，2001，7（6）：365.
［13］ 崔英霞，黄宇烽，王咏梅，等.中药抑抗灵治疗抗精子抗体介导的免疫性不育的实验研究Ⅰ［J］.中华男科学，2003，9（8）：628.
［14］ 戴晓莉，崔英霞，五咏梅，等.中药抑抗灵治疗抗精子抗体介导的免疫性不育的实验研究Ⅱ［J］.中华男科学，2003，9（9）：713.
