前处理清洗对半枝莲中野黄芩苷含量的影响

          作者：陈向东，刘法锦，郑文媛，欧阳永建

【摘要】  　　目的 考察前处理清洗对半枝莲中野黄芩苷含量的影响。方法 采用HPLC法测定药材和清洗后饮片的野黄芩苷含量。结果 清洗放置12h后干燥的半枝莲饮片野黄芩苷含量只有药材的18.4％。结论 半枝莲药材清洗后长时间放置，野黄芩苷含量明显下降。

【关键词】  半枝莲　野黄芩苷　前处理清洗

　　半枝莲为唇形科植物半枝莲Scutellaria barbata D.Don的干燥全草，具有清热解毒，化瘀利尿的功效［1］。野黄芩苷是半枝莲的主要成分之一，具有增加脑血流量，降低脑血管阻力，提高血脑屏障通透性，以及对抗由二磷酸腺苷引起的血小板凝聚等作用［2］。半枝莲配方颗粒是我公司的产品之一，临床用于代替饮片调配汤剂使用，我们在对半枝莲配方颗粒制备工艺研究过程中，测得三批中试产品，其中有两批转移率达到85％以上，而一批只有32％，含量明显偏低，经初步分析，认为是前处理清洗后放置时间较长所致。本次实验基于这方面分析，采用HPLC法测定药材和清洗后饮片的野黄芩苷含量，考察前处理清洗对半枝莲中野黄芩苷含量的影响。

    1 仪器、试剂

    Agilent 1100高效液相色谱仪，包括：Agilent G1311A 四元泵，Agilent G1379A 真空在线脱气机，Agilent G1314A-VWD（紫外检测器）， Agilent chimstation system（安捷伦化学工作站），Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18 柱（4.6mm×150mm，5μm）；天平（BP211D）；恒温水浴锅（天津市华北实验仪器有限公司）。

    半枝莲药材由江西樟树市庆仁中药饮片有限公司提供，经鉴定，为唇形科植物半枝莲Scutellaria barbata D.Don的干燥全草。野黄芩苷对照品（药品生物制品检定所提供，110842-200403）；甲醇（色谱纯）；水（超纯水）；其余试剂均为分析纯。

    2 样品的制备

    2.1 药材组 取半枝莲药材除去杂质和非药用部位，切成1cm左右段，75℃烘干，粉碎过65目筛。

    2.2 清洗放置组 取半枝莲药材除去杂质和非药用部位，淘洗干净，放置12h，切成1cm左右段，75℃烘干，粉碎过65目筛。

    2.3 清洗对照组 取半枝莲药材除去杂质和非药用部位，淘洗干净，立即切成1cm左右段，立即75℃烘干，粉碎过65目筛。

    3 方法和结果

    3.1 色谱条件 色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6mm×150mm，5μm）；流动相：甲醇－水－醋酸（35：61：4）；检测波长为335nm，柱温：25℃；流速：1ml/min；进样量：5μl。

    3.2 对照品溶液的制备 精密称取野黄芩苷对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含24μg的溶液，即得。

    3.3 线性关系 精密吸取野黄芩苷对照品溶液2、4、6、8、10μl进样，并以进样量（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程：Y=1523.393X+2.210，r= 0.9994。表明野黄芩苷在0.048～0.24μg的范围内与其色谱峰面积积分值呈良好的性线关系。

    3.4 稳定性试验 于0、4、8、12、24h分别吸取野黄芩苷对照品溶液5μl测定，结果表明在24h内基本稳定，RSD为1.85％。

    3.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液5μl，重复进样5次，测定峰面积，求得RSD为0.13％（n=5）。

    3.6 重现性试验 取同一样品（药材组）溶液连续进样5次，测定野黄芩苷含量，求得RSD为1.60％。

    3.7 回收率试验 精密称取已知含量的半枝莲药材细粉约0.4g，分别精密添加一定量的野黄芩苷对照品，按供试品的制备与测定方法在上述色谱条件下进行含量测定，测得平均回收率为99.26％，RSD=0.96%(n=5)。结果如表1。表1 回收率测定结果

    3.8 样品测定 精密称取药材组、清洗对照组粉末各约0.8g以及清洗放置组粉末约2g，分别置索氏提取器中，加入石油醚（60℃～90℃）提取至无色，弃去醚液，药渣挥去石油醚，加甲醇继续提取至无色，转移至100ml量瓶中，加甲醇至刻度，精密量取25ml，蒸干，残渣用20％甲醇溶解，并转移至25ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液5μl进样，测定结果见表2，图1。表2 前处理清洗对半枝莲中野黄芩苷含量的影响

　　4 讨论

    实验结果表明：经清洗后放置12h的半枝莲饮片中野黄芩苷的含量明显较低，只有药材的18.4％，而采用同样方法清洗后立即干燥的半枝莲饮片的野黄芩苷含量和药材大致相同，说明野黄芩苷并未在清洗过程中流失，而是在清洗后放置过程中被破坏，证明初步分析结果是正确的。

    在实验过程中，发现经清洗放置后的半枝莲饮片有类似黄芩变绿的现象，推测导致野黄芩苷含量下降的主要原因可能是被药材本身的酶所破坏，至于野黄芩苷含量下降与放置时间之间的关系，有待进一步研究。

    半枝莲采用干燥全草入药，建议在夏、秋二季采挖时洗净、切断、晒干，以减少有效成分的损失。

    药材带有泥沙杂质，需要经过清洗时，由于大生产的周期较长，如果不能及时干燥或投料，会导致有效成分野黄芩苷含量下降，在实际生产中应尽量缩短清洗和放置时间，以达到保留有效成分的目的。

【】
 1 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）.北京：化学出版社，2005,77-78.

2 江纪武,肖庆祥.植物药有效成分手册.北京:人民卫生出版社，1986,947-949.